阿托伐他汀鈣對動脈粥樣硬化大鼠血脂水平及CRP-m RNA表達的影響

高招波 魏曉琴 鄭春華 肖冬平

南昌市第一醫院心血管科，南昌 330006

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）可致動脈管壁增厚、變硬、管腔狹窄等，直接引發多種心腦血管事件的發生[1]。目前對AS防治思路的研究，低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）研究一直處于中心位置，大量研究證實，LDL-C水平與AS嚴重程度密切相關[2]。C反應蛋白（C-reactive protein，CRP）作為AS重要的促炎癥因子，在參與AS形成和發展中扮演了重要角色[3]。本文以大鼠AS模型為載體，探討阿托伐他汀鈣對AS大鼠血脂水平和CRP-mRNA表達的影響，研究其臨床價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 資料來源

選取45只健康Wistar雄性大鼠，月齡3～4個月，體質量190～220 g，均由南昌醫學院動物實驗室提供（2012-0009），且依清潔級對大鼠專人飼養。

1.2 方法

1.2.1 主要藥品及試劑 阿托伐他汀鈣（美國輝瑞制藥有限公司，H20093819）；膽固醇、膽酸鈉（河南平頂山市東珠生物制品有限公司，H19993993）；丙基硫氧嘧啶購自蘇州恒益醫藥原料有限公司；低分子量標準蛋白購自中科院上海生物化學研究所等。

1.2.2 主要儀器設備 PCR擴增儀（美國Eppendorf公司）；RS-28高速低溫離心機（德國賀利氏公司）；全自動生化分析儀（美國貝克曼公司）；超低溫冰箱（海爾公司）；BX60顯微鏡（德國Olympus公司）。

1.2.3 實驗方法 將45只健康Wistar雄性大鼠基礎喂養1周后，隨機分為對照組、AS模型組和阿托伐他汀鈣治療的觀察組，各15只。對照組繼續喂養基礎飼料，AS模型組和觀察組則改喂食高脂飼料 （3%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%豬油、81.3%基礎飼料）。觀察組在喂養高脂飼料4周后，改給予溶于生理鹽水的阿托伐他汀鈣5 mg/（kg·d）灌胃，其余2組則給予同等體積的生理鹽水灌胃。整個實驗持續8周。

1.3 標本采集及檢測

實驗第8周末對大鼠麻醉后分離取單側頸動脈血，分離后提取血清和血漿，采用全自動生化分析儀測定血脂HDL-C、LDL-C水平。采用Trizol[3]一步法提取RNA并做鑒定，RNA含量采用紫外分光光度計檢測法。應用酶聯免疫分析法測定大鼠CRP-mRNA水平；大鼠處死后取主動脈弓縱切面，石蠟包埋，連續切片，HE染色，光鏡下觀察大鼠主動脈病理形態學變化。

1.4 統計學方法

采用SPSS13.0統計軟件對數據進行分析和處理，計量資料以±s表示，采用F檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組大鼠血脂和CRP-mRNA表達水平的比較

觀察組的LDL-C低于對照組和AS模型組，HDL-C高于對照組和AS模型組（P＜0.05）。AS模型組的LDL-C高于對照組，HDL-C低于對照組 （P＜0.05）。觀察組的CRP-mRNA 表達水平低于 AS 模型組（P＜0.05）（表 1）。

表1 3組大鼠血脂和CRP-mRNA表達水平的比較（mmol/L，±s）

表1 3組大鼠血脂和CRP-mRNA表達水平的比較（mmol/L，±s）

與對照組和 AS模型組比較，*P＜0.05；與對照組比較，#P＜0.05；與AS模型組比較，▲P＜0.05

組別 n LDL-C HDL-C CRP-mRNA對照組AS模型組觀察組15 15 15 2.09±0.11 4.09±0.12#1.41±0.08*0.61±0.09 0.47±0.05#0.89±0.07*0.53±0.07 0.64±0.08 0.35±0.03▲

2.2 3組大鼠主動脈的病理結果

對照組：大鼠主動脈內膜、中膜和外膜分界清楚，光鏡下見內皮細胞完整，內膜光滑；中膜主要由呈同心排列的彈性纖維膜組成，基質內可見環形的平滑肌細胞；外膜較薄，為疏松結締組織，內含少量平滑肌細胞（圖1A）。AS模型組：大鼠主動脈可見多處隆起于內膜表面的斑塊，斑塊表面為纖維膜，深部為大量粥糜樣物質（圖1B）。觀察組：大鼠主動脈可見內膜增厚且血管平滑肌細胞增生，彈性膜薄厚不均，內皮細胞不完整，內皮下有少量壞死物，有少量淋巴細胞和泡沫細胞，中膜萎縮，有斷裂分離現象，但尚無明顯的斑塊形成（圖1C）。

3 討論

AS的病因目前尚不完全清楚，早期AS多見損傷性的脂質條紋，有研究發現其多由大量膽固醇的巨噬細胞源性泡沫細胞構成[4]。大量膽固醇酯在巨噬細胞內積聚，形成泡沫細胞，可能是AS形成早期的特征性病理生理過程[5-7]。LDL-C作為AS的炎癥指標，高度參與了膽固醇逆轉運發揮抗AS作用，其具有抗AS作用在于膽固醇逆轉運[8]，其與AS發生有密切關系，為判斷和治療AS提供了重要的參考依據。

他汀類調脂藥在AS、冠心病的防治中占有重要地位，不僅能通過抑制三羥基三甲基戊二酰輔酶A還原酶阻斷羥甲戊酸途徑及增加肝臟LDL-C受體表達，從而降低血漿LDL-C的濃度，還能升高HDL-C水平[9]。本實驗采取高脂飲食喂養直接導致大鼠HDL-C降低和LDL-C升高，阿托伐他汀鈣灌胃后顯示，LDL-C明顯降低，HDL-C明顯升高，提示阿托伐他汀鈣對降低AS大鼠LDL-C、提高HDL-C有顯著效果。LDL-C水平與AS及心腦血管疾病發生風險有密切聯系，降低LDL-C水平對減少AS的發生有積極意義[10]。

有研究發現，在肺炎衣原體所致的AS模型中觀察到斑塊中出現明顯的炎癥改變，同時伴有CRP-mRNA和蛋白表達明顯升高，提示AS可能與CRP-mRNA和高蛋白表達有一定的關聯[11-14]。有研究發現他汀類藥物可降低頸動脈粥樣斑塊累及的平滑肌細胞CRP-mRNA表達而抑制炎癥反應[15]。本研究顯示，服用阿托伐他汀鈣治療的觀察組CRP-mRNA表達水平明顯低于AS模型組，提示他汀類藥物降低了AS模型大鼠AS段CRP-mRNA的表達，可為臨床抗心血管藥物治療提供新思路。

綜上所述，阿托伐他汀鈣可降低AS大鼠LDL-C水平，升高HDL-C水平，并抑制AS段CRP-mRNA表達，從而延緩AS的進程。

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