2011年北京市海淀區手足口病實驗室檢測結果分析

北京市海淀區疾病預防控制中心(100094) 白 婧 王菊光 劉方遙 紀黎黎 何 斌

手足口病(hand-foot-mouth disease，HFMD)是由多種人腸道病毒引起的一種兒童常見傳染病，是我國法定報告管理的丙類傳染病〔1〕，容易在兒童中造成暴發和流行，甚至產生重癥、死亡病例〔2，3〕。為了解手足口病的流行特征，更好地防控手足口病，北京市各個區縣疾控中心相繼開展了HFMD的監測工作。北京市海淀區2011年3～12月采集本地區HFMD患者臨床標本205例，對其進行分子生物學檢測，現將實驗室檢測結果報告如下。

材料與方法

1.病例標本來源

本研究所用標本為2011年3月至12月期間采集于北京地壇醫院、北京佑安醫院、北京海淀醫院、清河圣地婦兒醫院、新世紀兒童醫院、北京兒童醫院等6家醫院就診的HFMD患者咽拭子，其中包括:152例散發病例(散發病例為監測病例，每個自然月的第一周和第三周，采集于清河圣地婦兒醫院)、53例重癥病例(手足口病患者神經系統、呼吸系統、循環系統等出現危及生命的癥狀和體征，臨床一般診斷為重癥病例)。所有病例標本采集后－4℃運輸，－20℃保存。205例病例標本的年齡在8個月到11歲之間。男女比例為1.53:1。

2.腸道病毒核酸檢測

(1)腸道病毒核酸提取 核酸提取采用Roche公司生產的核酸自動提取儀用試劑盒MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit，嚴格按說明書進行操作。

(2)腸道病毒核酸擴增 核酸擴增采用愛普益公司生產的腸道病毒通用型、柯薩奇病毒A16型、腸道病毒71型核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)，嚴格按照說明書進行操作。PCR的擴增反應程序為:42℃30min，1 個循環;95℃ 3min，1 個循環;94℃ 10s，50℃30s，72℃ 1min，4 個循環;94℃ 15s，55℃ 45s，40 個循環。若檢測樣本無S型擴增曲線或Ct＞36.2，則判定樣本為核酸檢測陰性;若檢測樣本呈S型擴增曲線且Ct≤36.2，則判定樣本為核酸檢測陽性。

3.儀器設備

核酸提取采用Roche公司的MPLC2.0型核酸自動提取儀;核酸擴增采用AB公司的7500Fast型熒光定量PCR儀。

結 果

1.HFMD病毒核酸檢測結果

應用熒光RT-PCR的方法對205例HFMD患者的咽拭子進行了腸道病毒的核酸檢測，不同月份病毒核酸檢測結果見表1。從表中的數據計算得出，患者的咽拭子的實驗室檢測總陽性率為57.56%(118/205)，其中，監測病例的實驗室陽性率為72.16%(96/152)，重癥病例的實驗室陽性率為41.50%(22/53)。按照手足口防控指南(2009)版的要求，對海淀區內手足口病毒的流行情況進行實驗室監測，除3、4月外，其他月份均采集HFMD患者咽拭子15～25份進行實驗室病毒核酸檢測，6～10月，監測病例EV71病毒的陽性率較低，分別為8.00%、4.55%、0%和10.53%;監測病例CVA16全年均呈現較高的陽性率，陽性率最高在10月，為73.33%，最低在5月，為13.33%，平均陽性率為30.90%;5～10月，監測病例均有其他HEV病毒檢出，而4月、11～12月，均未檢出其他HEV病毒。重癥病例發病率主要集中在6～8月，符合手足口病的發病規律，而10～12月，又出現了一個手足口重癥病例的發病小高峰。

2.不同性別HFMD病毒核酸檢測結果

對全年檢測數據按照性別進行統計得到海淀區不同性別HFMD病毒核酸檢測結果，見表2。HFMD病例數中男性患者為124例，女性患者為81例，男女比例為1.53:1;監測病例中男性患者為90例，女性患者為62例，男女比例為1.45:1;重癥病例中男性患者為34例，女性患者為19例，男女比例為1.79:1。從總病例看，女性患者的CAV16病毒陽性率為30.86(25/81)，男性患者的CAV16陽性率為20.97%(26/124)，兩者存在顯著差異(P=0.046＜0.05)。而EV71病毒陽性率男性和女性分別為17.74%(22/124)和17.28%(14/81)，其他 HEV病毒陽性率分別為15.32%(19/124)和14.81%(12/81)。

3.不同年齡HFMD病毒核酸檢測結果

對HFMD患者咽拭子病毒核酸檢測結果按照0～歲、3～歲、6～歲以及12歲以上四個年齡段進行統計分析，見表 3。205例 HFMD患者中，122例(59.51%)屬于0～歲組，75例(36.59%)屬于3～歲組，8例(3.90%)屬于6～歲組，12歲以上無HFMD病例。HFMD以感染0～歲、3～歲兩個年齡段為主，研究發現，2011年海淀區這兩個年齡段兒童感染的HFMD病原體主要以CAV16為主，0～歲組25.41%(31/122)、3～歲組25.33%(19/75)。

表1 北京市海淀區3～12月份HFMD病毒核酸檢測結果

表2 北京市海淀區不同性別HFMD病毒核酸檢測結果

表3 北京市海淀區不同年齡HFMD病毒核酸檢測結果

討 論

EV71和CAV16為引起HFMD的主要病原體，在不同的時期，兩者交替占據優勢地位。2008年北京市HFMD病原以EV71為主，CAV16為輔，高峰期(5月～8月)EV71是 CAV16的4.3倍;2009年北京市HFMD的主要病原仍然是CAV16和EV71，但其中CAV16的檢出數是EV71檢出數的1.4倍〔4〕。豐臺區2008年手足口病以 EV71感染為主，2009年以CAV16感染為主，而2010年EV71感染比例又有所上升〔5〕。大興區2008年手足口實驗室診斷病例分型結果顯示 EV71占陽性病例的 79.41%，2009年以CAV16感染為主，而2010年EV71又占到陽性病例數的63.36%〔6〕。平谷區2008年～2010年的手足口實驗室檢測病例數雖相對較少，但流行趨勢和以上兩個區相同〔7〕。從實驗室檢測結果可以看出，2011年海淀區手足口病主要是CAV16感染為主，占實驗室檢出陽性數的43.22%(51/118)。隨著手足口病近年來的暴發流行〔8〕，做好手足口病的防控工作顯得尤為重要，而利用現有數據，對手足口病的發病趨勢進行預測，并研究手足口病毒不同型別的流行季節分布特征、易感人群分布特征以及臨床特征等，就可以及早地、有針對性地在社區、托幼機構開展手足口防病宣傳工作，降低手足口病的發病率。

2011年海淀區手足口病重癥病例的發病規律與2011年海淀區手足口病月發病數統計規律相同，6～8月為手足口病發病高峰期，平均發病數為713例，而10～12月出現一個手足口病發病的小高峰，平均發病數為327例(數據來源于中國疾病預防控制信息系統)。從實驗室檢測結果來看，重癥病例的檢出率低于監測病例的檢出率。劉海博〔9〕等人研究了不同發病至采樣時間陽性率的差異，發現發病至采樣時間≤2d和＞2d的陽性率差異有統計學意義。而采樣至送檢時間、重癥與非重癥病例標本以及不同單位采樣標本陽性率差異均無統計學意義。以上研究發現提示，接診醫院一旦發現重癥病例，應立即逐級上報，區縣疾控中心才能及時采集到患者標本進行病原學檢測，及早對病例做出明確實驗室診斷，在針對患者的治療和疫情防控方面均有重要意義。

無論是監測病例還是重癥病例，男性的病例數均高于女性，這與北京市其他幾個區縣的研究結果相一致〔5，10－11〕，這可能與男孩經常與小朋友玩耍的比例顯著高于女孩有關〔12〕，增加了密切接觸傳播疾病的幾率。從不同性別HFMD病毒核酸檢測結果來看，女性患者的CAV16病毒陽性率高于男性患者的CAV16陽性率。而曲梅對北京市2009年手足口病的病原結構研究顯示，CAV16和EV71引起HFMD的人群的特征，無論從發病年齡、男女性別比、職業分布等各方面，兩者都沒有統計學上的顯著差異〔3〕。兩者結論出現差異的原因可能與不同年代、不同地區流行優勢型別的變遷和病毒自身的遺傳進化以及人群的免疫狀態有關，使得不同型別的腸道病毒對不同人群存在選擇易感性。這還需要進一步研究2011年北京市各地區CAV16和EV71引起HFMD的人群的特征情況，來得出相應的結論。

2010年昌平區HFMD發病年齡集中在2～4歲年齡組，以EV71為主〔13〕。本研究劃分的統計年齡段與昌平區有所不同，但基本趨勢一致，符合手足口病發病特征〔14〕。而HFMD高發年齡段以CAV16感染為主，這可能是由于調查研究的年份有所不同，引起HFMD的病毒優勢型別有所改變所致。

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