恩諾沙星腸溶微粒包衣工藝研究

張戰偉

(杭州九天動物保健品有限公司，杭州310029)

1 材料和儀器

1.1 材料 恩諾沙星(浙江新昌國邦藥業有限公司，批號120517-1);恩諾沙星對照品(中國獸醫藥品監察所，批號H0081206，含量99.9%);丙烯酸樹酯Ⅰ號(連云港萬泰藥用材料有限公司，批號20121109);丙烯酸樹酯Ⅲ號(連云港萬泰藥用材料有限公司，批號20121117);微晶纖維素(安徽山河藥用輔料有限公司，批號120901);PVPK30(重慶力宏精細化工科技有限公司，批號241010011);滑石粉(廣西桂林來生滑石制品有限責任公司，批號2012122701);食用淀粉(河北德瑞淀粉有限公司，批號2012112911);檸檬酸三乙酯(江蘇雷蒙化工科技有限公司，批號201212008)。

1.2 儀器 LW-B2型底噴干燥包衣鍋、LW-L3型多功能制粒制丸機和LW-H100型槽型混合機，常州龍文干燥設備有限公司;RCZ-8B型藥物溶出儀，天津大學精密儀器廠;GD751型紫外-可見光分光光度計，上海精密科學儀器有限公司;BT25S型電子天平，北京賽多利斯公司;Syltech500型高效液相色譜儀，美國賽爾泰杭州公司。

2 方法與結果

2.1 測定方法 取樣品研細，精密稱取適量(約相當于恩諾沙星25 mg)，置250 mL棕色量瓶中，加入0.1 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL，振搖溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，置100 mL棕色量瓶中，用水稀釋到刻度，照紫外-可見光分光光度法(《中華人民共和國獸藥典》二〇一〇年版一部附錄26頁，簡稱UV法)[1]，在271 nm波長處測定吸光度，另取恩諾沙星對照品，同法測定。計算，即得。

2.2 測定方法的方法學驗證[2]

2.2.1 標準曲線的繪制 精密稱取恩諾沙星對照品25.06 mg，置250 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL，振搖溶解，加水至刻度，搖勻，再精密量取2、3、4、5、6、7、8 mL 的溶液，分別置 100 mL棕色量瓶中，加水至刻度，搖勻，照UV法在271 nm波長處測定吸光度。以濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。結果恩諾沙星在2.0～8.0 μg/mL濃度范圍內，濃度和吸光度呈良好的線性關系。標準曲線方程為A=0.1014C-0.0081，r=0.9999。

2.2.2 精密度試驗 取已知含量的樣品，照2.1項下方法測定含量，每天重復測定一個樣品6次，連續測定3 d，記錄數據，計算日內及日間精密度。結果日內精密度RSD=0.39%，日間精密度RSD=0.33%。

2.2.3 回收率試驗 取已知含量樣品，精密稱定9份(每份含恩諾沙星25 mg)，分別加入20、25、30 mg的恩諾沙星各三份，研磨均勻后照2.1項下方法測定含量，計算回收率，平均回收率為99.88%。

2.2.4 穩定性試驗 取2.2.2項中的樣品溶液，室溫分別放置0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h，按 2.1 項中測定法檢測吸光度，計算含量及其相對標準偏差。結果表明供試品溶液在3 h內吸光度幾乎沒有變化。

2.2.5 與高效液相色譜法測定結果比較 取按最佳工藝生產的樣品五批，照2.1項方法和《中國獸藥典》2010年版一部該品種片劑項下的高效液相色譜法，分別測定樣品的含量，統計學比較兩種方法的含量測定結果(t檢驗，α=0.10)。結果如表1所示，表明兩種方法測定結果無顯著差異。

表1 兩種測定方法統計學比較結果

2.3 腸溶微粒的制備

2.3.1 粒芯的制備[3-5]處方:恩諾沙星 108 g;微晶纖維素40 g;淀粉852 g;PVPK30(0.5%)溶液:適量，共制1000 g。操作:取恩諾沙星過80目篩，與淀粉、微晶纖維素混合均勻后，加入PVPK30溶液制備軟材，用LW-L3型多功能制粒機過五號篩擠壓制粒，制得粒子在流化床內80℃干燥完全后，過篩整粒，測定半成品含量。

2.3.2 包衣液配制 以包衣粒芯60 kg計:取純化水10 kg置于不銹鋼桶中，加入滑石粉1.0 kg，攪拌混勻后依次加入丙烯酸樹酯Ⅰ、Ⅲ號溶液各6.3 kg、三醋酸三乙酯0.5 kg，邊加邊緩緩攪拌，最后加水至全量，啟動不銹鋼桶中的振動泵，使包衣液分布均勻，即可。

2.3.3 包衣方法 將包衣鍋拉至軌道加粒芯位置，加入粒芯60 kg，放置均勻后，恢復至原位封嚴，先打開噴槍壓力閥，再打開底進風閥，設置進風量在粒芯剛好完全拋起為宜，再設定底風溫度、包衣液的槍壓和打入包衣液速度進行包衣。整個包衣過程中，除特殊情況外不得改變運行參數，以免出現意外。待包衣液輸送完畢后，升高底風溫度至80℃，活化干燥1.5 h后，冷卻，過篩，即可。

2.4 正交實驗[6]

2.4.1 實驗設計 實踐經驗得出，在選擇好進風量的情況下影響包衣效果的主要因素為:打入包衣液的槍壓、打入包衣液的速度和包衣鍋底部的進風溫度。根據預試驗，每個因素選擇三個水平(表2)，用L9(34)正交試驗表安排實驗，根據腸溶制劑釋放度要求[7]，考察各個因素對包衣工藝的影響，確定最佳工藝。

表2 正交試驗因素水平表

2.4.2 釋放度的測定[1]依據《中華人民共和國獸藥典》二〇一〇年版一部附錄釋放度測定法第二法測定樣品在酸中和緩沖液中的釋放度。由于每粒量較少，依照藥典方法取樣一粒缺少合理性，故以一定量(0.2 g)的微粒為單位測定釋放度。

2.4.3 正交實驗結果 正交實驗結果見表3，可以看出各因素對在緩沖液中的釋放度無影響，對在酸中釋放度的影響大小順序為R(A)＞R(B)＞R(C)，即設定的包衣液的槍壓影響最大，打入包衣液的速度影響次之，進風溫度對包衣效果幾乎沒有影響，其最佳包衣工藝為A1B3C1，從表4方差分析得出前兩種因素影響較為顯著，由于C因素對包衣效果影響可以忽略不計，為了加快包衣速度、提高效率，C因素選擇進風溫度50℃即C3，即選擇包衣工藝為A1B3C3，選擇最佳包衣工藝為打入槍壓0.24 MPa，打入包衣液速度60 mL/min，進風溫度50℃。

表3 正交試驗結果

表4 方差分析(酸中)

2.5 成品測定結果 取按最佳工藝生產的樣品五批，按《中華人民共和國獸藥典》二〇一〇年版一部附錄腸溶制劑要求，測定樣品在酸和緩沖液中釋放度，記錄數據，結果如表5?？梢钥闯鏊嶂? h后釋放度均小于標示含量的10%，緩沖液中釋放度均大于標示含量的70%。其他測定指標也符合微粒項下規定，證明產品的質量穩定可靠。

表5 五批樣品測定結果

3 小結與討論

微粒制劑劑型本身具有顯著的優點，如在胃腸道吸收一般不受胃排空的影響，釋藥的重現性較高，藥物在胃腸道表面分布的面積增大，提高了藥物的生物利用度、減小局部刺激等;恩諾沙星為濃度依賴性抗菌藥，血液濃度越高，臨床效果越好，制成腸溶制劑，藥物在腸道集中釋放吸收可明顯提高其血藥濃度，增強其療效，所以將恩諾沙星微粒制成腸溶制劑較為理想。

正交試驗前，首先結合相關文獻對測定方法進行了選擇并驗證。方法學驗證表明，所選擇的UV測定方法線性、精密度、回收率、穩定性均能夠達到釋放度及含量測定的要求，相比法定方法(《中華人民共和國獸藥典》二〇一〇年版中高效液相色譜法)，UV法操作簡單方便，費用低廉，可以作為企業內控方法應用，但UV法易受有紫外吸收的物質干擾，專屬性相對較差，對外評定產品質量時，仍以法定標準為準。

正交試驗時，通過對薄膜包衣參數的考察，優化了產品的生產工藝，制備微粒在體外釋放特性良好，在胃溶介質中幾乎不溶，而在腸溶介質中釋放達到80%以上。本法制備的藥物微粒進行腸溶薄膜包衣，掩蓋了藥物本身的苦味，增強順應性，改變藥物釋放特性，提高藥物的穩定性，降低了毒副作用，節省了治療成本，為恩諾沙星制劑研究及大規模生產提供了依據。本試驗的設計均是在體外模擬進行，體內的生物利用度還需要進一步研究。

[1]中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典一部[M].北京:中國農業出版社，2011:4.

[2]劉文英.藥物分析[M].第6版，北京:人民衛生出版社，2007:82.

[3]醫藥工業研究院藥物制劑部藥物制劑國家工程研究中心.藥用輔料應用技術[M].第2版.北京:中國醫藥科技出版社，2002:211.

[4]陸 斌.藥物新劑型與新技術[M].北京:人民衛生出版社，1997:289.

[5]陳衛華，宋友明.環丙沙星微粒薄膜包衣制備工藝研究[J].制劑與技術，2011，11:18-37.

[6]何 雁，馬志慶.醫藥數理統計[M].北京:科學出版社，2009:184.

[7]李智慧，黃 山，孫文靜，等.氟苯尼考腸溶緩釋包衣微粒的制備及體外評價[J].中國獸藥雜志，2011，45(12):31-34.