骨橋蛋白在卵巢癌及交界性腫瘤中的表達及臨床意義

陶 潛 張曉娟 鄭艷莉 魯曉燕

骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是新近發現的卵巢癌生物學標志物之一，在腫瘤形成過程中刺激細胞粘附、遷移、信號傳導和血管形成。本文研究OPN在卵巢交界性腫瘤及卵巢癌中的表達，分析其與腫瘤分化、臨床分期的關系，以提高卵巢癌的早期診斷率。

1 材料與方法

1.1 一般資料

48例卵巢癌及35例卵巢交界性腫瘤標本均來自南通市第一人民醫院2005年1月－2012年12月的手術標本。所有患者均為女性。卵巢癌患者年齡28～69歲，平均年齡51.4歲;腫瘤多為囊實性;發生于雙側者23例;腫瘤平均直徑7.34 cm，漿液性乳頭狀囊腺癌21例，黏液性乳頭狀囊腺癌12例，內膜樣癌10例，5例為轉移性癌。交界性腫瘤患者平均年齡41歲;腫瘤平均直徑9.24 cm;交界性漿液性乳頭狀囊腺瘤24例，交界性黏液性乳頭狀囊腺瘤9例，交界性內膜樣腫瘤2例。所有病例術前均未放療或化療，均經HE染色及本院兩位主治以上病理醫師診斷。同時選取20例卵巢良性漿液性囊腺瘤對比。

1.2 方法

采用免疫組織化學EnVision法。OPN單克隆抗體購自福州邁新公司。所有標本均經10%福爾馬林液固定，常規石蠟包埋，行HE及免疫組織化學染色。并用已知陽性切片作陽性對照，用磷酸鹽緩沖液代替一抗和二抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷

采用雙盲法觀察每張切片。OPN染色以細胞胞質中出現棕黃色或棕褐色顆粒為陽性著色。具體觀察方法:高倍鏡下(×200)隨機選擇5個視野，每個視野計數200個細胞，共1 000個細胞。①按陽性細胞數占細胞總數的比例計分:無陽性細胞計0分，陽性細胞＜25%計1分，陽性細胞＞25%計2分。②按陽性細胞顯色強度計分:無顯色計0分，細胞質內淺黃色顆粒計1分，棕黃色顆粒計2分，棕褐色顆粒計3分。①+②≥3分記為陽性，否則為陰性。

1.4 統計學分析

采用Stata10.0軟件分析，各組間率采用χ2檢驗，P＜0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 OPN在卵巢組織中的表達

骨橋蛋白在卵巢癌、交界性腫瘤及漿液性囊腺瘤組織中陽性率分別為 72.9%(35/48)、45.7%(16/35)及15.0%(3/20)，組間差異具有統計學意義(P=0.000)。

2.2 OPN表達與卵巢癌病理特征的關系

在漿液性癌、黏液性癌、內膜樣癌及轉移性癌中表達陽性率分別為 80.9%(17/21)、58.3%(7/12)、70.0%(7/10)及80.0%(4/5)，組間差異無統計學意義(P=0.542)，顯示其表達與癌組織學類型無相關性。但在分化較好的癌中OPN表達率明顯低于分化差的癌。26例有盆腔淋巴結轉移的癌，OPN表達者22例，其表達與無淋巴結轉移者差異顯著，見表1。此外，本組研究同時觀察到伴有腹膜非浸潤性種植的交界性腫瘤，OPN的表達明顯強于無腹膜浸潤者。3例伴有微浸潤交界性漿液性乳頭狀腫瘤浸潤區癌細胞明顯表達OPN。

表1 OPN在卵巢癌組織中的表達

3 討論

OPN是1種含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽序列的分泌型磷酸化糖蛋白，最早是由Senger［1］于1979年作為1種與惡性轉化有關的鈣結合磷酸化糖蛋白提取的，通過與其主要受體整合素和CD44的相互作用，在腫瘤細胞的移行、浸潤、促進腫瘤血管的形成、抑制凋亡等多個環節中發揮著重要的作用［2］。骨橋蛋白在許多人類腫瘤組織中表達增高，如肝癌、胃癌、宮頸癌、乳腺癌［3-6］。高亞麗等［7］通過免疫組織化學方法檢測乳腺癌中OPN的表達，結果顯示OPN與乳腺癌的組織學分級，淋巴結轉移呈正相關，與5年生存率呈負相關。余洋等［8］研究50例膀胱尿路上皮癌中OPN表達，顯示OPN隨腫瘤病理分級、臨床分期的增高而明顯增加，并且在初發組和復發組、單發組與多發組的比較中，差異顯著。本組研究結果中，卵巢癌OPN陽性率72.9%，而良性腫瘤幾乎無表達，提示OPN可能通過同樣的作用途徑促進卵巢上皮細胞異常增生和惡性轉化。

本組實驗中，OPN表達與卵巢癌組織學類型無相關性，而與組織學分級密切相關，低分化的卵巢癌OPN表達明顯高于高分化癌，表明OPN的表達不僅反映了卵巢癌細胞的增殖活性，還與腫瘤的進展密切相關。OPN在有淋巴結轉移的癌組織中OPN表達明顯高于無淋巴結轉移組，顯示陽性表達的卵巢癌細胞具有更強的侵襲、轉移能力，與Kim等［9］研究結果相符。伴有腹膜非浸潤性種植的交界性腫瘤，OPN的表達明顯強于無腹膜浸潤者，伴有微浸潤交界性漿液性乳頭狀腫瘤浸潤區癌細胞明顯表達OPN，更進一步提示OPN在腫瘤細胞的突變及進展中發揮了不可忽略的作用。還有學者用組織化學和原位雜交檢測到了卵巢乳頭狀囊腺癌里已鈣化的沙樣瘤里存在OPN［10］，因此對于伴沙粒體形成的交界性漿液性腫瘤應密切隨訪血清OPN水平。

關于OPN與卵巢癌的研究尚處于初始階段，眾多報道結果不一，可能是由于研究方法、實驗條件不同和選擇對象不一致及統計方法不同導致。OPN與卵巢癌的關系有待于進一步研究。

［1］Senger DR，Wirth DF，Hynes RO.Transformed mammalian cells secrete specific proteins and phosphoproteins〔J〕.Cell，1979，16(4):885.

［2］Meerwitch K，Bergeon F，Leblond L，et al.A novel RGD antagonist that targets both vB3 and a5131 induces apeptosis of angiogenic endothelial cells on type Icollagen〔J〕.Vascu Pharm，2003，40(1):77.

［3］Higashiyama M，Ito T，Tanaka E，et al.Prognostic significance of osteopontin expression in human gastric carcinoma〔J〕.Ann Surg Oncol，2007，14(12):3419.

［4］Cho H，Hong SW，Oh YJ，et al.Clinical significance of osteopontin expression in cervical cancer〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol，2008，134(8):909.

［5］Xie H，Song J，Du R，et al.Prognostic significance of osteopontin in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma〔J〕.Dig Liver Dis，2007，39(2):167.

［6］陳 軍，覃思繁.骨橋蛋白與MMP-9在乳腺癌組織中的表達及意義〔J〕.實用癌癥雜志，2008，23(4):339.

［7］高亞麗，邢魯奇.骨橋蛋白在乳腺癌組織中的表達及意義〔J〕.河南科技大學學報(醫學版)，2008，26(4):251.［8］余 洋，李明明，師宏斌，等.骨橋蛋白和環氧化酶-2在膀胱尿路上皮癌中的表達及臨床意義〔J〕.寧夏醫學雜志，2010，32(5):430.

［9］Kim JH，Skates SJ，Uede T，et al.Osteopontin as a potential diagnostic biomarker for ovarian cancer〔J〕.JAMA，2002，287(13):1671.

［10］Maki M，Hirota S，Kaneko Y，et al.Expression of osteopontin messenger RNA by macrophages in ovarian serous papillary cystadenocarcinoma:a possible association with calcification of pasmmoma bodies〔J〕.Pathol Int，2000，50(7):531.