降壓藥對小鼠胚胎與發育毒性影響的比較研究

胡 奇，李世芬，王玉翠，戴菲菲，鐘義紅，張成香，王玉邦（江蘇省醫藥農藥獸藥安全性評價與研究中心，江蘇 南京 210029）

高血壓是最常見的心血管疾病之一，嚴重威脅著人類的健康。按2010年我國人口的數量與結構推算，目前我國約有2億高血壓患者[1]。根據美國國家高血壓預防、診斷、評價與治療聯合委員會第7次報告（JNC-7）推薦，常用降血壓西藥主要有5類，分別是利尿劑、β-受體阻滯劑、血管緊張素轉換酶抑制劑（ACEI）、血管緊張素受體拮抗劑（ARB）和鈣拮抗劑（CCB）[2]。降壓藥物的使用是高血壓病治療的主要措施，但是對于降壓藥的不良反應特別是對生殖系統的不良反應，報道較少。本研究從降血壓中選擇有代表性的藥物，分別是氫氯噻嗪（利尿劑）、比索洛爾（β-受體阻滯劑）、卡托普利（ACEI）、纈沙坦（ARB）和非洛地平（CCB），研究并比較它們的胚胎與發育毒性及其差異性。

1 資料與方法

1.1 一般資料：受試樣品氫氯噻嗪片為江蘇方強制藥廠有限責任公司生產；富馬酸比索洛爾片為Salutas Pharma GmbH生產；卡托普利片為上海長城藥業有限公司生產；纈沙坦分散片為哈爾濱三聯藥業有限公司生產；非洛地平片為濟南利民制藥有限責任公司生產。

1.2 動物來源與飼養：6～8周齡清潔級ICR小鼠，共200只，雌雄各半，由南京醫科大學實驗動物中心提供，生產許可證號：SCXK（蘇）2008-0004。動物飼養于本中心SPF級屏障系統內，實驗動物使用許可證號：SCXK（蘇）2012-0041，環境溫度20～25℃，相對濕度40%～70%。實驗動物飲用水為無菌水，輻照滅菌飼料由蘇州雙獅實驗動物飼料科技有限公司提供。

1.3 試驗方法

1.3.1 劑量分組與樣品配制：各試驗樣品的給藥劑量為治療高血壓患者推薦劑量的的10倍（按體表面積計算），氫氯噻嗪、比索洛爾、卡托普利、纈沙坦和非洛地平的劑量分別為210 mg/（kg·d）、21 mg/（kg·d）、310 mg/（kg·d）、330 mg/（kg·d）和21 mg/（kg·d），另設一個陰性對照組0 mg/（kg·d）。樣品用無菌水配制，各劑量組配制濃度分別為21 mg/ml、2.1 mg/ml、31 mg/ml、33 mg/ml和2.1 mg/ml，陰性對照組用無菌水代替受試物，灌胃給予受試物10 ml/（kg·d）。

1.3.2 動物處理：試驗前檢疫7 d，按體重隨機分為氫氯噻嗪組、比索洛爾組、卡托普利組、纈沙坦組、非洛地平組和陰性對照組，每組雌、雄各15只，交配前所有動物給藥65 d（約等于小鼠2個生精周期）。雌鼠在交配期、妊娠期及產后4 d持續給藥至處死。雄鼠交配期及交配后持續給藥至處死。給藥65 d后，雌雄動物按照1:1同籠飼養。每天早晨檢查陰栓，檢查到陰栓的當天記為妊娠第0天。

1.3.3 觀察指標：仔鼠出生后第0天、第4天稱重。每窩在出生后檢查性別和數量，其他檢查包括：死胎、活胎、身材和外觀。親代母鼠檢查并記錄著床點和黃體的數目。

1.4 統計學分析：用SPSS 10.0軟件進行數據處理，方差齊時用單因素方差分析（One Way ANOVA），組間兩兩比較采用LSD法，方差不齊則用秩和檢驗。計數資料用χ2檢驗，仔鼠以窩為單位進行統計處理，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 降壓藥對胚胎死亡及出生后仔鼠死亡的影響：見表1～2。非洛地平胚泡著床后至出生前死亡數高于陰性對照組、比索洛爾組、卡托普利組與纈沙坦組（P＜0.05）。著床前死亡數和出生后死亡仔鼠數各劑量組與陰性對照組及兩兩組間比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。

表1 降壓藥對胚胎死亡的影響

表2 降壓藥對出生后仔鼠死亡的影響

2.2 降壓藥對仔鼠存活率的影響：陰性對照組、比索洛爾組、非洛地平組、卡托普利組、氫氯噻嗪組與纈沙坦組出生0～4 d死亡率分別為2.4%、1.2%、0.9%、2.8%、4.1%、1.6%。出生4 d存活率分別為97.6%、98.8%、99.1%、97.2%、95.9%、98.4%。出生0～4 d死亡率、出生4 d存活率各劑量組與陰性對照組及兩兩組間比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。

2.3 降壓藥對仔鼠體重的影響：見圖1。卡托普利組出生0 d仔鼠重、出生4 d仔鼠重和每只仔鼠增重均高于陰性對照組（P＜0.05）。其他各組各項指標與陰性對照組比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。比索洛爾組、非洛地平組、氫氯噻嗪組與纈沙坦組出生0 d仔鼠重均低于卡托普利組（P＜0.05）；比索洛爾組、氫氯噻嗪組與纈沙坦組出生4 d仔鼠重均低于卡托普利組（P＜0.05）；比索洛爾與纈沙坦組仔鼠增重均低于卡托普利組（P＜0.05）。

圖1 降壓藥對仔鼠體重的影響

2.4 降壓藥對外觀畸形和生長發育的影響：比索洛爾組（168只）有1只仔鼠出現身材短小，1只仔鼠出現卷尾；非洛地平組（109只）有1只仔鼠出現身材短小；卡托普利組（111只）有1只仔鼠出現身材短小、尾巴短且卷尾，另外2只仔鼠出現身材短小；氫氯噻嗪組（172只）有2只仔鼠出現身材短小；纈沙坦組（129只）未見明顯外觀畸形和生長遲緩；陰性對照組未見明顯畸形。

3 討論

高血壓是目前最常見的心血管疾病，現今雖已有多種降壓藥可供選擇，利尿劑、β-受體阻滯劑、ACEI、ARB和CCB均可作為初始和維持用藥，根據患者的危險因素、亞臨床靶器官損害以及臨床疾患情況，合理選擇和使用藥物。

本實驗將各類降壓藥的胚胎和發育毒性進行比較研究，試圖找出各類降壓藥在胚胎與發育毒性上表現的不同，實驗結果也顯示各類降壓藥對小鼠胚胎與發育毒性有明顯的不同。ACEI是應用最廣泛的處方降壓藥之一，但是可能引起先天性畸形和胎兒發育遲緩等不良反應[3-4]。此外，曾有卡托普利致胎動停止和胎兒死亡的報道[5]。本研究發現卡托普利發育毒性主要表現為外觀畸形和生長遲緩。2001年澳大利亞有服用ARB出現嚴重的不良反應的報告，主要為胎兒子宮內死亡和新生兒早期死亡[6]。本研究未發現ARB纈沙坦有明顯的發育毒性。

研究還發現，卡托普利能引起胎仔出生體重超重以及體重增重應值得關注。出生體重超重的發生與多種因素有關，目前主要與孕前體重指數、孕期增重、性別、孕齡及妊娠糖尿病有較明確的正相關，且上述危險因素間相互影響、相互促進，最終導致出生體重超重[7]。卡托普利導致出生體重超重的原因還有待進一步研究。

[1] 中國高血壓防治指南修訂委員會.中國高血壓防治指南[J].中華高血壓雜志,2011,19(8):701.

[2] Chobanian AV,Bakris GL,Black HR,et al.The seventh report of the joint national committee on prevention,detection,evalua tion,and treatment of high blood pressure:the JNC 7 report[J].JAMA,2003,289(19):2560.

[3] Cooper WO,Hernandez DS,Arbogast PG,et al.Major congenital malformations after first-trimester exposure to ACE inhibitors[J].N Engl J Med,2006,354(23):2443.

[4] Friedman JM.ACE inhibitors and congenital anomalies[J].N Engl J Med,2006,354(23):2498.

[5] 陳慶英,劉國樹.常用抗高血壓藥物的不良反應及處理[J].藥物不良反應雜志,2004,6(1):25.

[6] Martinovic J,Benachi A,Laurent N,et al.Fetal toxic effects and angiotensin-Ⅱ-receptor antagonists[J].Lancet,2001,35(2):241.

[7] 麥爾哈巴·迪力木拉提,姚麗艷.高出生體重兒的影響因素研究進展[J].海峽預防醫學雜志,2013,4(19):17.