UPLC法測定藿香正氣口服液中3種核苷

何 丹，楊 林，秦少容，張景勍

(1.重慶醫科大學藥學院，重慶 400016;2.重慶市食品藥品檢驗所，重慶 401121;3.太極集團重慶涪陵制藥廠有限公司，重慶 408000)

藿香正氣口服液是由蒼術、陳皮、厚樸、生半夏等共十味中藥組成的復方口服制劑，具有解表化濕，理氣和中之功效。用于外感風寒、內傷濕滯，夏傷暑濕，頭痛昏重，脘腹脹痛，嘔吐泄瀉，胃腸型感冒［1］。目前對藿香正氣制劑的定量測定多見于采用HPLC法對厚樸酚、和厚樸酚、陳皮苷及百秋李醇進行測定［2-5］，還未見藿香正氣口服液中核苷類成分量測定的報道。核苷類成分是半夏藥材中含有量較高的活性成分之一，藥理活性明確，且核苷類成分含有量的高低是判別半夏藥材及飲片質量優劣的重要依據［6］，也直接影響到制劑的藥效。目前關于中藥材及中成藥中核苷類成分的測定方法的文獻報道主要是采用 HPLC法［7-9］，未見采用UPLC法。本實驗采用 UPLC(Ultra Performance Liquid Chromatography)法同時對藿香正氣口服液中的尿苷、鳥苷及腺苷進行測定。該方法高效、快速，重復性和精密度良好，適用于藿香正氣口服液中3種核苷類成分的測定。

1 儀器與試藥

Waters ACQUITY UPLC;藿香正氣口服液(批號11111571、11111896、11111902，太極集團重慶涪陵制藥廠);尿苷對照品(批號100635-200401，中國食品藥品檢定研究院);鳥苷對照品(批號E-0575，上海同田生物有限公司);腺苷對照品(批號110879-200202，中國食品藥品檢定研究院)。甲醇為色譜純(山東禹王實業總公司化工廠)，實驗用水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 實驗方法

2.1 色譜條件 ACQUITY UPLC BEH Cl8色譜柱(1.7μm，2.1 mm×50 mm);柱溫30℃;流動相為水-甲醇按表1梯度洗脫;檢測波長254 nm;體積流量0.5 mL/min;進樣量5μL，理論塔板數按尿苷峰計算不低于2000。

表1 梯度洗脫Tab.1 Mobile phase gradient elution

2.2 對照品貯備液的制備 精密稱取尿苷對照品0.02058 g、鳥苷對照品0.01146 g和腺苷對照品0.01006 g，置100 mL量瓶中，加少量甲醇溶解，加水稀釋至刻度，搖勻。得尿苷為205.8μg/mL、鳥苷為114.6μg/mL、腺苷為100.6μg/mL的混合對照品貯備液。

2.3 供試品溶液的制備 取批號為11111571、11111896和11111902的藿香正氣口服液適量，0.22μm微孔濾膜濾過，取續濾液即得供試品溶液。

3 結果

3.1 線性關系考察 精密量取混合對照品貯備液0.5、0.8、1、2、4、5 mL，置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得系列混合對照品溶液。按2.1項下色譜條件測定，以峰面積Y對質量濃度X(μg/mL)進行線性回歸。尿苷的回歸方程為Y=87703X－3811(r=0.9999);鳥苷的回歸方程為Y=60604X－1478(r=0.9999);腺苷的回歸方程為Y=61913X－524(r=0.9999)。結果表明，尿苷在10.29～102.9μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系;鳥苷在5.73～57.3μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系;腺苷在5.03～50.3μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

3.2 精密度試驗 取混合對照品溶液，按2.1項下方法連續進樣6次，測定峰面積。結果尿苷、鳥苷和腺苷的RSD分別為0.34%、0.35%和0.36%。符合精密度試驗要求。

3.3 穩定性試驗 取混合對照品溶液，室溫下放置0、1、2、4、6、8 h，按2.1項下色譜條件分別進樣5μL測定峰面積。結果峰面積基本不變，尿苷、鳥苷和腺苷的RSD分別為0.31%、0.33%和0.32%，表明溶液在8 h內基本穩定。

3.4 重復性試驗 取批號為11111571藿香正氣口服液，按供試品配制方法平行配制6份，按2.1項下方法進樣分析，按外標法以峰面積計算，尿苷、鳥苷和腺苷的平均質量濃度分別為38.33μg/mL、23.40μg/mL 和 27.48 μg/mL，RSD 分 別 為1.45%、1.19%和0.98%。

3.5 加樣回收率試驗 取已知含有量的藿香正氣口服液，精密量取5 mL，共27份，置10 mL量瓶中，分別精密加入相當于制劑中尿苷、鳥苷和腺苷含有量的80%、100%和120%的混合對照貯備液，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，按2.1項下色譜條件進樣5μL，按外標法計算回收率。結果見表2～4。結果尿苷、鳥苷和腺苷的平均回收率分別為97.25%、98.34%和98.88%，RSD分別為2.46%、2.18%和1.89%。

表2 尿苷回收率Tab.2 Results of recovery tests for uridine

表3 鳥苷回收率Tab.3 Results of recovery tests for guanosine

表4 腺苷回收率Tab.4 Results of recovery tests for adenosine

3.6 樣品測定 3批樣品按供試品配制方法配制，按2.1項下方法進樣分析，計算，結果見表5，色譜圖見圖1。

表5 藿香正氣口服液測定結果(n=3)Tab.5 Determination results of Huoxiang Zhengqi Qral Liquid(n=3)

圖1 藿香正氣口服液測定色譜圖Fig.1 UPLC chromatograms of Huoxiang Zhengqi Oral Liquid

4 討論

超高效液相色譜技術采用1.7μm顆粒度色譜柱填料，與傳統的5.0μm顆粒度的色譜柱填料的HPLC技術相比能獲更高的柱效，并且在更寬的線速度范圍內柱保持恒定，因而有利于提高流動相速度，縮短分析時間，提高分析通量［10］。同時可顯著改善色譜峰的分離度和檢測靈敏度，特別適用于中藥指紋圖譜研究和中藥復方制劑多成分的分析測定［11-15］，已成為繼HPLC后現代分析的重要手段。從本實驗的結果，UPLC法測定藿香正氣口服液中核苷類成分分離效果好，方法準確可靠。

《中國藥典》2010年版中藿香正氣口服液中含量測定項規定對厚樸酚與和厚樸酚和橙皮苷進行測定，作為質量控制指標［1］。本實驗中當甲醇比例增加后洗脫出的成分較多，在下一步研究工作中可同時測定以上成分。

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