骨橋蛋白在胸腺瘤組織中的表達及臨床意義

朱 健 劉 勇 朱水波 蔣 煒 夏 峰 余冬敏 梁江水

廣州軍區武漢總醫院心胸外科，湖北武漢 430070

骨橋蛋白（osteopontin，OPN）是與腫瘤的發生發展密切相關的一種磷酸蛋白，Senger等[1]于1979年首次在惡性轉化的上皮細胞株中發現。隨后的研究發現，OPN表達于多種腫瘤組織中，包括胃癌、腎癌、甲狀腺癌、肺癌、食管癌等腫瘤組織，具有較好的敏感性[2]。目前國內外尚無關于OPN在人胸腺瘤組織中表達情況的報道。本研究通過免疫組織化學SP法檢測OPN在胸腺瘤中的表達情況，以探討其對胸腺瘤臨床診斷和患者預后判斷的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院胸腺瘤切除標本患者53例的完整病例資料，其中，男29例，女24例，年齡22～70歲，中位年齡49歲，27例合并重癥肌無力（myasthenia gravis，MG）。 53例術前行胸部高分辨率CT檢查，均診斷為前上縱隔腫瘤，未行放療和（或）化療。術后按Masaoka分期標準[3]分為：Ⅰ期（非侵襲性胸腺瘤）31例，Ⅱ期13例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例（Ⅱ～Ⅳ期為侵襲性胸腺瘤）。根據2004年正式的WHO胸腺瘤組織分型標準[4]分為：A型8例、AB型24例（A、AB型為低度惡性）、B型20例（其中，B1型8例，B2型10例，B3型2例），C型1例（B、C型為高度惡性）。取同期20例非腫瘤胸腺（nonneoplastic thymus，NNT）組織（取自先、后天性心臟病等）作為對照，其中，男11例，女9例，中位年齡47歲。兩組一般情況比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 試劑

一抗兔抗人OPN單克隆抗體、二抗生物素標記羊抗兔IgG試劑盒、DAB顯色試劑盒等試劑均購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 實驗方法

全部標本經10%中性福爾馬林液固定，常規石蠟包埋，制成4 μm厚的連續切片2張，1張供免疫組化染色，1張供HE染色復核診斷。免疫組織化學采用SP法，依據試劑盒說明書步驟進行。HE染色按常規進行。

1.4 免疫組織化學結果判斷方法

采用雙盲法，由兩名病理科高年資醫師隨機選取5個10×40倍視野，根據染色程度和染色細胞所占百分比進行評分[5]：①染色強度以多數細胞為準，無陽性細胞記0分，顯黃色記1分，顯棕黃色記2分，顯棕褐色記3分；②陽性細胞占腫瘤細胞總數的比例＜5%記0分，5%～25%記1分，26%～50%記2分，≥51%記3分；再按①×②的結果分為兩級：0分為陰性；1～9分為陽性。有4張切片結果判定不一致，遂采用武漢同濟千屏病理科圖文綜合信息管理系統HMIAS-2000高清晰度彩色醫學圖文分析系統免疫組化測量程序判定。

1.5 統計學方法

應用SPSS 13.0統計學軟件進行數據分析，計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以α=0.05作為檢驗水準。筆者參考Masaoka分期標準和WHO胸腺瘤組織分型標準及結合黃壯士等[6]對類似數據的合并方式，將Masaoka分期中Ⅱ～Ⅳ期合并后與Ⅰ期作統計學分析；將WHO胸腺瘤組織分型中A、AB型合并后與B、C型合并后作統計學分析。

2 結果

2.1 病理學分析

免疫組織化學SP法檢測顯示，OPN主要表達在胸腺瘤腫瘤細胞的細胞漿中，少量彌散表達在炎癥細胞、腫瘤周圍基質及血管內皮細胞胞漿中。

2.2 各組間OPN表達陽性率比較

OPN在NNT組與胸腺瘤組中的陽性表達率差異有統計學意義（P＜0.001），見表1。在Masaoka分期Ⅰ期組與Ⅱ～Ⅳ期組間陽性表達率差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。在WHO分型A/AB型胸腺瘤組與B/C型胸腺瘤組間陽性表達率差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。在合并MG的胸腺瘤組與不合并MG的胸腺瘤組間陽性表達率差異無統計學意義（P＞0.05），見表4。

表1 OPN在胸腺瘤組織和NNT組織中的表達情況（例）

表2 OPN在胸腺瘤Masaoka不同分期組間的表達情況（例）

表3 OPN在胸腺瘤WHO不同分型組間的表達情況（例）

表4 OPN在胸腺瘤是否合并MG組間的表達情況（例）

3 討論

胸腺瘤是成人最常見的前上縱隔腫瘤，約占50%[7]。目前臨床主要采用Masaoka分期法[3]，臨床Ⅰ期：包膜完整，鏡下無包膜浸潤；臨床Ⅱ期：侵犯周圍胸膜或脂肪組織，或鏡下包膜浸潤；臨床Ⅲ期：侵犯鄰近器官（心包、大血管、肺等）；臨床Ⅳa期：胸膜或心包播散；臨床Ⅳb期：淋巴道或血道轉移。其中Ⅰ期為非侵襲性胸腺瘤，Ⅱ～Ⅳ期為侵襲性胸腺瘤。而組織學分型主要根據2004年正式的WHO胸腺腫瘤組織學分型標準[4]，A型：髓質型；AB型：兼具A型和B型胸腺瘤樣成分；B型：混合型（B1型：皮質為主型，器官樣；B2型：皮質型；B3型：鱗狀上皮樣、分化好的胸腺癌）；C型：胸腺癌；其中，A、AB型為低度惡性，B、C型為高度惡性。由于胸腺組織學結構復雜，細胞多樣化，單純從細胞學形態上很難在“腺瘤”和“腺癌”之間劃一條涇渭分明的界線。病理科醫生往往需要借助特殊標記物染色的表達情況作為診斷的參考依據。

OPN是一種相對分子量約為44 kD的具有多種生物學功能的分泌性、糖基化的磷酸蛋白。它有一個N端信號序列及Gly-Arg-Gly-Asp-Ser細胞黏附序列，并含有28個功能結合區，包括鈣結合域、凝血酶裂解位點等，這使其具有多種功能，在細胞的黏附遷移、信號傳導及組織修復中具發揮著重要作用[8]。有研究報道，骨橋蛋白在腫瘤發生、發展和轉移過程中有重要的作用，其具體機制可能有以下幾個方面：①通過與其受體-整合素和CD44結合后發揮作用[9]；②與血管通透性因子（VPF）/血管內皮生長因子（VEGF）發揮協同作用[10]；③通過自分泌及旁分泌途徑發揮作用[11]；④通過抑制一氧化氮（NO）的產生，使轉移的腫瘤細胞易于存活[12]。

本實驗通過免疫組織化學SP法檢測發現，OPN主要表達于胸腺瘤腫瘤細胞的細胞漿中，少量彌散表達在炎癥細胞、腫瘤周圍基質及血管內皮細胞胞漿中。據此筆者推斷胸腺瘤腫瘤細胞本身能夠產生和分泌骨橋蛋白，并通過分泌的骨橋蛋白來改變周圍的微環境，促進腫瘤迅速生長和浸潤轉移；骨橋蛋白也可能通過旁分泌方式，作用于血管內皮細胞和周圍的基質細胞，促進腫瘤的生長。在本實驗中，OPN的陽性表達率在胸腺瘤中高于NNT組織，提示OPN參與了胸腺瘤的發生；OPN在Masaoka分期為Ⅱ～Ⅳ期的胸腺瘤中的陽性表達率高于Ⅰ期胸腺瘤，提示胸腺瘤中OPN的表達與腫瘤的侵襲性相關；OPN的陽性表達率在WHO分型為B/C型的胸腺瘤中高于良性A/AB型胸腺瘤，提示OPN的表達與胸腺瘤的惡性程度相關；另外，OPN在合并MG的胸腺瘤和不合并MG的胸腺瘤中的陽性表達率差異無統計學意義，說明OPN在胸腺瘤中的表達，與其是否合并MG無明顯相關性。

綜上所述，OPN可能在胸腺瘤的發生和發展中起重要作用，OPN的表達可能成為胸腺瘤臨床診斷和患者預后判斷的一個重要參考指標。

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