1000例婦女宮頸人乳頭瘤病毒基因分型檢測結果分析

吳夏楓，喻 晶，劉曉翌，張銀漢

（北京大學深圳醫院 檢驗科，廣東 深圳518036）

宮頸癌是威脅全球女性健康最為嚴重的疾病之一，是全球女性最常見的第3位腫瘤，而且78%發生在發展中國家，為僅次于乳腺癌的女性第2位高發惡性腫瘤。許多研究表明，人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）與子宮頸癌的發生密切相關，已發現至少120種不同的HPV亞型，其中約50余種亞型可感染生殖器官，是宮頸癌的主要致病因子，特別是高危亞型是女性子宮頸癌發生的直接原因［1，2］。文獻表明，HPV亞型分布存在明顯的地區差異和種族差異。因此對本地區HPV亞型感染進行詳細調查對宮頸癌早期預防和早期治療具有重要意義。為探討本地區婦女感染HPV及HPV亞型的分布情況，我們對1000名婦女進行HPV基因分型檢測，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1．1 研究對象

選擇2011年1月份－2011年8月份在本院婦科門診檢查的婦女，共1000名。患者年齡范圍18－65歲，有性生活史，排除細菌性、霉菌性以及滴蟲性陰道炎。取材時要求月經干凈期，48小時內無性生活史，白帶清潔度檢查正常。

1．2 研究方法

1．2．1 HPV標本采集 行常規婦科檢查，先用窺陰器暴露宮頸，干棉簽擦拭干凈子宮頸口分泌物，取宮頸刷置于宮頸口內2－3cm，順時針旋轉5圈，獲頸管脫落細胞，存于裝有細胞保存液的洗脫管。做好樣本標識，－20℃保存，一周內完成檢測。

1．2．2 主要儀器與試劑 儀器：基因擴增儀為德國Eppendorf 5331，雜交箱為英國 Unitherm。試劑：HPV基因分型檢測試劑盒由深圳亞能生物技術有限公司提供，可同時檢測23種HPV病毒亞型。包括18種高危亞型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4；5種低危亞型：6、11、42、43、44。

1．2．3 HPV DNA 提取 充分洗脫宮頸刷，取1 ml洗脫液轉移到1．5ml離心管中，13 000rpm離心10min，棄上清液。加入50μl裂解液懸浮沉淀，沸水浴加熱10min。13 000rpm離心10min，保留上清液待用。

1．2．4 PCR擴增 取出PCR反應管，在管蓋上做好標記，分別加入已提取待測樣品5μl。加樣結束后把PCR反應管放置擴增儀中進行擴增。

1．2．5 分析結果 把已擴增的PCR產物按照說明書進行雜交，洗膜，顯色、膜條掃描和保存、讀取結果。

結果判定：實驗結果有效的前提是每張膜條在質控點（PC）必須出現藍色顯色信號。除PC質控點外，膜條上各檢測位點有藍色顯色位點即提示感染相對應基因型的HPV，包括單一感染和混合性感染；檢測位點沒信號，說明未感染膜條上包括的23種基因型HPV。

2 結果

2．1 HPV基因型分布情況

受檢1000例標本中檢測HPV陽性標本為245例，陽性率為24．5%。23種基因亞型中共檢測出20種，未檢出基因型為44、83和MM4。在245例陽性標本中共計278株HPV基因亞型（包括多重感染的重復計算），其中低危亞型組85株（30．57%），高危亞型組193株（69．42%）。低危亞型 組 主 要 以 HPV6 型 （9．71%）、HPV11 型（8．63%）、HPV43型（7．19%）為主；高危亞型組則以 HPV16 型 （16．19%）、HPV52 型 （11．87%）、HPV58型（10．43%）、HPV66型（9．35%）為主，結果見表1。HPV陽性者中，單一基因亞型陽性標本167例，占16．7%，多重基因亞型陽性標本78例，占7．8%，其中包括兩項基因亞型陽性52例（5．2%），三項基因亞型陽性19例（1．9%），四項基因亞型陽性7例（0．7%）。

根據年齡將患者分為≤26歲、26－35歲、36－45歲、46－55歲和56－65歲5個年齡組。各年齡組HPV感染率分別為19．72%、19．55%、27．85%、26．69%和31．91%。各年齡組HPV感染率差異不存在統計學意義（χ2＝8．90，P＞0．05）。結果見表2。

表1 HPV基因亞型分布（株數）

表2 不同年齡患者HPV感染陽性率

3 討論

在1987年，ZHr Hausen［3］首先提出人乳頭瘤病毒感染與宮頸癌發病相關的假設之后，經國內外學者20余年的研究，現已明確HPV感染是宮頸癌的直接病因和發病的必要條件，并且HPV的感染是宮頸癌的相對危險性增加250倍。

本研究采用反向斑點雜交法對1000例女性進行HPV亞型檢測，總感染率為24．5%。據研究資料，湘潭地區感染率為21．79%，沈陽地區為17．0%，杭州為27．8%，本研究的結果與報道有所不同，可能與HPV地域性差異、受檢人群的不同和采用HPV檢測方法不同相關［4－6］。研究認為，目前世界最常見的HPV基因型是HPV16，其他常見基因亞型存在地域差異。歐洲的主要分布型別以HPV16、31、18為主，南美地區的以 HPV16、58、18為主，亞洲地區為 HPV16、18、33［7］。從國內的統計資料來看，除HPV16型感染率最高之外，其他常見亞型在各地區分布還是略有差異，山西省為HPV58、52型，沈陽地區為 HPV52、58型，濰坊地區為HPV58、33型。本研究結果顯示，HPV16、52、58型為主要的感染型別，與無錫地區、湘潭地區等的報道一致，與重慶地區 HPV16、58、52有所差別［8］。這種差別既提示HPV亞型分布具有一定的人群和區域特點，也提示不同檢測方法所覆蓋的HPV檢查型別有差異。

HPV感染率具有年齡分布特點，Smith J S認為≤25歲是女性HPV感染的高峰期，隨年齡的增加，感染率有所下降；中年婦女（35－50歲）感染率的高低具有地域性；老年婦女感染率存在不同趨勢［9］。文獻報道，大多數感染呈一過性，感染幾率可高達25%－29%，年輕婦女機體免疫功能強，約60%－70%可在一年內消失，兩年內約90%可清除感染，35歲后感染幾率從5%－10%轉為持續性感染狀態［10］。本研究結果顯示，≤35歲感染率接近20%，且隨著患者年齡增加，感染率呈逐漸上升趨勢。這可能與患者個人性行為、衛生習慣，不重視早期癥狀，健康意識缺乏等有關。而56－65歲年齡段的感染率高達31．91%，原因可能是更年期女性絕經期體內雌激素水平下降和機體免疫力降低，還有可能與老年婦女生活習慣改變，引起的持續感染和反復感染。

總之，HPV感染的基因型別和年齡分布在在地區及人群間差異較大，且和人生活習慣，性行為方式密切相關。因此，做好HPV基因亞型檢測，才能早期發現，早期診斷，早期干預宮頸細胞癌前病變，從而有效語法宮頸癌的發生，降低宮頸癌的死亡率。

［1］Walhoomers JMM，Jacobs MV，Manos MM，et al．Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide［J］．J Pathol，1999，189（1）：12．

［2］Bosch FX，Manos MM，Munoz N，et al．Prevalence of human papillomavirus in cervical cancer：a worldwide perspective：International Biological Study on Cervical Cancer（IBSCC）Study Group［J］．J Natl Cancer Inst，1995，87（11）：796．

［3］zur Hausen H．Papilloma virus and cancer：from basic studies to clinical application［J］．Nat Rev Cancer，2002，2：342．

［4］張詠梅，周 晶，龔志紅．湘潭地區HPV感染及不同亞型分布［J］．中國現代醫生，2010，34：108．

［5］張 新，王純雁，石菊芳，等．沈陽市婦女人乳頭瘤病毒感染型別分布的研究［J］．中華流行病學雜志，2007，28（10）：954．

［6］李 偉，范超明，陳 軍，等．杭州地區女性人乳頭瘤病毒各亞型感染情況的研究［J］．中國衛生檢驗雜志，2009，19（12）：2896．

［7］CliffordGM，Gallus S，HerreroR，et al．Worldwide distribution of human papillomavirus types in cytologically normal women in the International Agency for Research on Cancer HPV prevalence surveys：apooled analysis［J］．Lancet，2005，366（9490）：991．

［8］夏吉榮，楊雙雙，祝佳麗，等．重慶地區婦女人乳頭瘤病毒感染的調查分析［J］．重慶醫學，2012，41（9）：892．

［9］Smith J S，Melendy A，Rana R K，et al．Age－specific prevalence of infection with human papillomavirus in females：A global review［J］．J Adolesc Health，2008，43（4）：S5．

［10］趙 蓉，張為遠，張淞文，等．2006－2008年北京地區25－54歲育齡婦女HPV亞型感染狀況的調查［J］．中華婦產科雜志，2011，46（3）：184．