高爾基體蛋白73診斷原發(fā)性肝癌的臨床評(píng)價(jià)

袁明生，唐富英，王 影

（廣東醫(yī)學(xué)院附屬陳星海醫(yī)院1．檢驗(yàn)科；2．消化內(nèi)科，廣東 中山528415）

原發(fā)性肝癌（Primary Hepatic Cancer，PHC）是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一，早期發(fā)現(xiàn)、早期治療是提高療效的關(guān)鍵。近年來，由于技術(shù)飛速發(fā)展，發(fā)現(xiàn)了一系列新的潛在的腫瘤標(biāo)志物，高爾基體蛋白73（Golgi protein 73，GP73）被認(rèn)為是最值得期待的肝癌血清標(biāo)志物之一［1－3］。本研究通過ELISA檢測(cè)人血清中GP73濃度，初步探討其診斷PHC的臨床價(jià)值，并進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1．1 一般資料 選取我院2010年1月至2012年3月住院病人，排除了其它系統(tǒng)惡性腫瘤和嚴(yán)重疾病后，分成 ①PHC組40例，經(jīng)住院手術(shù)或肝穿病理檢查確診者，其中男30例，女10例，年齡為30－76歲，平均47．2歲；②肝病組40例，其中慢性肝炎20例、肝硬化20例，男28例，女12例，年齡20－60歲，平均33．3歲；③對(duì)照組40例，為門診健康體檢者（孕婦除外）。男20例，女20例，年齡19－50歲，平均29．2歲。

1．2 儀器與試劑 安圖iWO－960洗板機(jī)、安圖2010酶標(biāo)儀，GP73試劑由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供，批號(hào)：20120101，測(cè)量方法：雙抗體夾心ELISA法定量檢測(cè)血清中GP73含量。

1．3 方法 所有肝癌患者、肝硬化患者和對(duì)照組人群于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下肘正中靜脈取血于真空管中，靜置30min，在相對(duì)離心力3 130×g離心5min后，分離后的血清標(biāo)本放入－20℃冰箱保存待統(tǒng)一檢測(cè)GP73濃度（三組存放條件一致）。血清GP73測(cè)定嚴(yán)格按試劑說明書操作，安圖2010酶標(biāo)儀比色，并自動(dòng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣品濃度。試劑盒說明書的參考范圍：GP73＜150ng／ml，患肝癌風(fēng)險(xiǎn)率低。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。對(duì)三組GP73數(shù)據(jù)分布進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)P＜0．05，屬于非正態(tài)分布，因此以中位數(shù)及四分位數(shù)表示。各組間比較，采用多個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)Kruskal－Wallis檢驗(yàn)，兩兩比較用 Mann－Whitney U 檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 40例PHC組、40例肝病組和40例對(duì)照組按本試劑盒說明書測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，其GP73水平結(jié)果見表1，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，三組GP73濃度之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝75．5，P＜0．01），根據(jù)平均秩次（Mean Rank）進(jìn)一步推斷，PHC組GP73濃度明顯高于肝病組和對(duì)照組，肝病組也高于對(duì)照組。

表1 PHC組、肝病組和對(duì)照組血清GP73檢測(cè)結(jié)果

2．2 與“金標(biāo)準(zhǔn)”病理結(jié)果比較，GP73診斷PHC的敏感性為90．0%、特異性為70．0%和符合率為76．7%（表2）。

表2 GP73濃度與病理結(jié)果比較

3 討論

長(zhǎng)期以來，肝癌無創(chuàng)傷的診斷主要是應(yīng)用血清腫瘤標(biāo)志物結(jié)合影像學(xué)的方法。其中AFP是在世界范圍內(nèi)應(yīng)用最廣的血清腫瘤標(biāo)志物，但其敏感性為40%－65%，特異性76%－96%［4］，不甚令人滿意，GP73是近年來新發(fā)現(xiàn)診斷原發(fā)性肝癌的腫瘤標(biāo)志物［5］。

GP73是存在于高爾基體的一種跨膜蛋白，Block等［6］于2005年首先提出，在肝癌患者血清中，GP73水平顯著升高。其原因可能與肝癌患者肝細(xì)胞損傷有關(guān)或是與GP73維持高爾基體結(jié)構(gòu)的完整性有關(guān)。細(xì)胞器的改變與人類癌的發(fā)生聯(lián)系密切，當(dāng)細(xì)胞核和線粒體正常功能、結(jié)構(gòu)組成被破壞時(shí)，反映了癌細(xì)胞在基因組和微環(huán)境上的改變，以適應(yīng)癌細(xì)胞的代謝需求［7］。

從本次研究結(jié)果表1可見，PHC組GP73水平明顯高于肝病組和對(duì)照組（P均＜0．05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，支持上述觀點(diǎn)，GP73水平高低，可以用于篩查原發(fā)性肝癌，肝病組血清GP73水平較對(duì)照組也升高（P均＜0．05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示GP73同肝細(xì)胞受病毒感染有關(guān)聯(lián)，這與 Mao YL［8］等人發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞受到病毒感染，引起GP73的高表達(dá)的結(jié)果相一致；然而在肝癌組中，GP73升高的遠(yuǎn)高于肝炎組。

本次研究120例臨床標(biāo)本測(cè)量結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”病理結(jié)果對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供的ELISA法檢測(cè)GP73試劑盒診斷原發(fā)性肝癌的敏感性和特異性分別是90．0%、特異性為70．0%和符合率為76．7%。其診斷原發(fā)性肝癌的敏感性高于AFP的敏感性，與國(guó)內(nèi)外其它的研究相一致［9，10］，由于它的敏感性高于 AFP，GP73有可能成為臨床篩查原發(fā)性肝癌的一個(gè)新的腫瘤標(biāo)志物，以達(dá)到早期診斷肝癌的目的。

不足之處是本次研究沒有把GP73水平在其它系統(tǒng)惡性腫瘤的表達(dá)與肝癌的表達(dá)比較，從而進(jìn)一步判斷 GP73是否像 PSA（Prostate Specific Antigen，前列腺特異抗原）一樣是肝臟的器官特異性腫瘤標(biāo)志物。

［1］Mao Y，Yang H，Xu H，et al．Golgi protein 73（GOLPH2）is a valuable serum marker for hepatocellular carcinoma［J］．Gut，2010，59（12）：1687．

［2］徐海峰，楊華瑜，毛一雷，等．改變肝癌早期診斷和治療現(xiàn)狀的新肝癌血清標(biāo)志物［J］．基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2008，28（1）：16．

［3］Willyard C．Researchers look for ‘sweet’method to diagnose cancer［J］．Nat Med，2007，13（11）：1267．

［4］徐海峰，楊華瑜，張宏冰，等．改變肝癌早期診斷和治療現(xiàn)狀新肝癌血清標(biāo)志物［J］．基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2008，28（1）：104．

［5］Bachert C，F(xiàn)immel C，Linstedt AD．Endosomal trafficking and proprotein convertase cleavage of cis Golgi protein GP73produces maker for hepatocellular carcinoma［J］．Traffic，2007，8（10）：1145．

［6］Block TM，Comunale MA，Lowman M，et al．Use of targeted glycoproteomics to identify serum glycoproteins that correlate with liver cancer in woodchucks and humans［J］．procnatl Acad sci USA，2005，102（3）：779．

［7］Wei S，Dunn TA，Isaacs WB，et al．GOLPH2and MYO6：putative prostate cancer markers localized to the Golgi apparatus［J］，Prostate，2008，68（13）：1387．

［8］Mao YL，Yang H，xu HF，et al．significance of GoIgi glycoprotein 73，a new tumor marker in diagnosis of hepatocellular carcinoma：aprimary study［J］．Chin Med J，2008，88（14）：945．

［9］毛一雷，楊華瑜，徐海峰，等．新的肝癌血清標(biāo)記物GP73在肝癌診斷中的初步研究［J］．中華醫(yī)學(xué)雜志，2008，88（14）：948．

［10］Yanli Gu，Wenli Chen，Yu Zhao，et al．Quantitative analysis of elevated serum Golgi protein－73expression in patients with liver disease［J］．Ann Clin Biochem，2009，46（1）：38．