高效液相色譜法測定半夏瀉心口服液中黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量

王 敏，王逢春，郭 琪

半夏瀉心口服液源于《傷寒論》中的處方半夏瀉心湯，是由半夏、黃芩、黃連、干姜、人參等多味中藥制成的一種復(fù)方制劑，具有寒熱平調(diào)，消痞散結(jié)的功效，常用于心下痞滿、嘔吐、腸鳴下利等中氣虛弱、寒熱互結(jié)者。制劑中的黃芩與黃連都具有清熱解毒的功效，與該制劑的療效有密切關(guān)系［1］。因此采用高效液相色譜法同時(shí)測定黃芩與黃連中的主要成分黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量，對于保證制劑發(fā)揮臨床療效及控制其質(zhì)量具有一定的參考價(jià)值。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200型高效液相色譜儀(包括四元泵，VWD檢測器，自動(dòng)進(jìn)樣器，ChemStation化學(xué)工作站);Mettler AE240電子天平(梅特勒公司)。

1.2 試藥 黃芩苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào):110715-200815)，鹽酸小檗堿對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào):110713-200609);半夏瀉心口服液(自制，批號(hào):20121026，20121027，20121028)，藥材購自北京同仁堂藥店;甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18(4．6 mm × 150 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇:20 mM醋酸銨溶液(38:62);流速為1．0 ml/min;檢測波長為280 nm(0～8 min)，345 nm(8～12min);進(jìn)樣量:10 μl;柱溫為室溫。

2.2 混合對照品溶液的制備 精密稱定黃芩苷對照品16．08 mg和鹽酸小檗堿對照品11．62 mg，分別置于10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液。再分別精密量取1 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成每毫升含黃芩苷對照品32．16 μg和鹽酸小檗堿23．24 μg的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取本品1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，0．22 μm 濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備 依照處方比例，按生產(chǎn)工藝分別制備缺黃連、黃芩的陰性樣品，按2．3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，制得陰性對照溶液。

2.5 專屬性試驗(yàn) 取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液按2．1項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣。結(jié)果顯示，供試品溶液中色譜峰與其他色譜峰能達(dá)到基線分離，且保留時(shí)間與對照品溶液一致，陰性對照溶液在相同保留時(shí)間處無色譜峰，表明其他組方藥材對黃芩苷及鹽酸小檗堿的測定無干擾，見圖1。

2.6 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對照品溶液1、2、5、10、15、20 μl，按 2．1 項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，測定峰面積。以混合對照品的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程分別為黃芩苷 Y=2011．7X －2．5235(r=0．9999，n=6);鹽酸小檗堿 Y=192．45X+0．4498(r=0．9998，n=6)。結(jié)果表明，黃芩苷和鹽酸小檗堿分別在 0．03216～0．64320 μg 和 0．02324～0．46480 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 取混合對照品溶液，按2．1項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果黃芩苷和鹽酸小檗堿的相對標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)分別為0．36%和0．85%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批號(hào)為20121026的樣品，按2．3項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，按2．1項(xiàng)下色譜條件，分別在0、2、4、8、10、12 h 各進(jìn)樣 1 次，測定峰面積。結(jié)果黃芩苷和鹽酸小檗堿RSD分別為2．12%和1．95%(n=6)，表明樣品溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為20121026的樣品，按2．3項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，按2．1項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣測定。結(jié)果黃芩苷和鹽酸小檗堿的平均含量分別為 293．5 μg/ml和 149．2 μg/ml，RSD 分別為2．01%和 1．35%(n=6)，表明方法的重復(fù)性良好。

圖1 對照品及半夏瀉心口服液樣品高效液相色譜圖

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取黃芩苷和鹽酸小檗堿已知含量分別為 293．5 μg/ml和 149．2 μg/ml(批號(hào)20121026)6份，分別精密加入1．608 mg/ml黃芩苷對照品溶液 0．1 ml，1．162 μg/ml鹽酸小檗堿對照品溶液0．07 ml，按2．3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2．1項(xiàng)下色譜條件，10 μl進(jìn)樣測定黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷和鹽酸小檗堿的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.11 樣品含量測定 取批號(hào)為20121026、20121027、20121028的樣品，按 2．3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2．1項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣測定。結(jié)果樣品中黃芩苷的含量分別為 293．5、269．2、254．7 μg/ml，RSD 分別為 2．01%、1．52%、2．64%(n=3);鹽酸小檗堿的含量分別為 149．2、155．9、137．8 μg/ml，RSD 分別為 1．35%、1．85%、1．68%(n=3)。

3 討論

復(fù)方中藥制劑發(fā)揮藥效主要是各味藥中多種組分共同作用的結(jié)果，因此其含量的多少及之間的比例關(guān)系都會(huì)影響到制劑的質(zhì)量。因此在評(píng)價(jià)、控制復(fù)方中藥制劑質(zhì)量時(shí)，多種指標(biāo)成分同時(shí)測定比單一指標(biāo)成分測定更科學(xué)，更能很好地體現(xiàn)藥品的質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)建立同時(shí)測定復(fù)方制劑中2種藥材的主要成分，能在一定程度反映出制劑的整體質(zhì)量。方法簡便，準(zhǔn)確度高，可用于半夏瀉心口服液的質(zhì)量控制。

目前，文獻(xiàn)中已報(bào)道的同時(shí)測定黃芩苷和鹽酸小檗堿的方法，均選用單一波長進(jìn)行檢測［2-10］。但本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)單一波長無法滿足半夏瀉心口服液中黃芩苷和鹽酸小檗堿含量的系統(tǒng)性要求。而采用波長切換的方法，分別在其最大吸收波長處測定黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量，具有較高的靈敏度，能夠保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時(shí)得到的色譜峰型和出峰時(shí)間均較理想，能夠達(dá)到半夏瀉心口服液質(zhì)量控制的要求。

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