保肝復功丸水煎劑對大鼠急性肝損傷防護作用機制的研究

許 丹 于紅剛 金戰勇 吳洪斌

1.武漢大學人民醫院消化內科 (湖北武漢，430060) 2.武漢市中醫醫院脾胃病科

保肝復功丸是武漢市中醫醫院名老中醫研制的驗方，臨床研究發現具有護肝、改善肝功能作用。為探討其作用機制，又采用脂多糖 (LPS)誘導大鼠急性肝損傷的動物模型，對其進行了實驗研究。

1 材料與方法

1.1 動物 清潔級Wistar雄性大鼠 (180～200g)，購自武漢大學醫學院實驗動物中心。

1.2 藥物和試劑 黃芪20g，山藥、枸杞、當歸、丹參、芍藥、沙參、桑椹子、麥冬各15g，柴胡、紅花、生地、熟地、山茱萸、五味子、山楂、刺蒺藜、郁金、木香各10g，川楝子8g，加水1500ml，浸泡30分鐘，煮沸15分鐘，蒸餾，制作不同濃度保肝復功丸水煎劑。試劑:脂多糖 (Lipoplysaccharides，LPS):L2880 E.colio55∶B5，美國Sigma公司;ALT、AST、SOD、MDA、GSH-Px測定試劑盒均購自武漢博士德生物有限公司。

1.3 造模和給藥方法 將大鼠適應性喂養1天，按體重隨機分為5組:空白組、模型組、保肝復功丸低劑量組、保肝復功丸中劑量組、保肝復功丸高劑量組，每組10只。除空白組外，其余動物腹腔注射LPS 10 mg/kg造模。造模后大鼠常規喂養，自由飲水，飼養室光照10小時，黑暗14小時，溫度21～25℃，濕度30% ～70%。造模成功后，空白組及模型組均給予10 ml/kg體積蒸餾水灌胃;保肝復功丸低、中、高劑量組分別于灌胃保肝復功丸415 g/kg、910g/kg、1804 g/kg濃度煎液，1次/d，連續12天。

1.4 血清ALT、AST及肝臟指數測定 全血離心后，取上清液，按照試劑盒說明書進行測定。肝臟指數=肝臟濕重/體重×100%。

1.5 肝臟MDA、SOD、GSH-Px的測定 取肝臟0.2～0.4g，加冷生理鹽水9倍，勻漿，離心后去上清液，按試劑盒說明書進行測定。

1.6 統計學方法 采用SPSS 13.0軟件進行數據處理，實驗數據間均采用(±s)表示，多組間數據比較采用方差分析，兩組間數據比較采用t檢驗，P＜0.05被認為有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠肝臟指數及血清ALT、AST水平檢測結果 見表1。

表1 各組大鼠ALT、AST及肝臟指數比較(±s)

表1 各組大鼠ALT、AST及肝臟指數比較(±s)

與空白組比較，*P＜0.05;與模型組比較，#P＜0.05

組別 n ALT(U/L) AST(U/L) 肝臟指數 (%)10 65.38±8.47 217.75±11.00 4.79±1.06模型組 10 703.37±64.2* 837.88±71.45* 6.16±0.78*小劑量組 10 346.20±67.27# 556.88±52.92# 5.74±0.54#中劑量組 10 123.75±30.26# 284.62±25.18# 5.64±0.87#大劑量組 10 79.63±13.45# 209.14±8.43# 5.38±0.58空白組#

2.2 各組大鼠肝組織中MDA、SOD、GSH-PX的檢測結果見表2。

表2 各組大鼠肝勻漿中SOD、MDA和GSH-PX的結果比較(xˉ±s)

2.3 各組大鼠肝病理組織學觀察結果 光鏡下空白組大鼠肝小葉結構正常，肝細胞排列整齊，形態正常，結構清晰;模型組大鼠肝細胞存在大量點狀及炎性細胞浸潤，壞死、小灶性壞死及灶性纖維化，肝細胞索排列紊亂;各治療組大鼠與模型組大鼠相比肝細胞索排列相對整齊、壞死灶明顯減少，炎性細胞浸潤顯著減少。

3 討論

LPS是革蘭氏陰性細菌細胞壁外膜內毒素的主要成分，由親水性的多糖O抗原、特異性核心多糖和疏水的類脂A組成。類脂A是革蘭氏陰性細菌內毒素的毒性成分，可引起革蘭氏陰性細菌激發宿主免疫應答、導致機體損傷［1］。

MDA是自由基攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸發生脂質過氧化反應的最終產物，其含量的多少可間接反映機體細胞受氧自由基攻擊的嚴重程度［2］。SOD主要作用是催化超氧陰離子的歧化反應，抑制自由基啟動的脂質過氧化反應，對機體的氧化與抗氧化平衡起著重要作用，它可減少自由基的產生，降低脂質過氧化物的生成，減輕肝細胞的損傷［3］。GSH-Px是一重要的催化過氧化物分解的酶類，它可以催化過氧化氫和脂質過氧化物的還原。GSH是細胞合成的一種非酶性抗氧化劑，在細胞內起抗氧化作用，是SOD、GSH-Px等酶類的供氫體。GSH保護細胞膜中含巰基的蛋白質和含巰基的酶不被破壞，同時還可對抗自由基對重要臟器的損害，在活體細胞抗氧化中起重要保護作用［4，5］。

血清和肝組織中的ALT活性主要反映肝細胞損傷，AST可反映線粒體的受損程度;肝臟指數是肝臟質量與體質量之比，在一定程度上反映肝臟炎性反應的強度及腫脹程度。

研究表明，黃芪的有效成份之一黃芪多糖具有明確的抗氧化作用［6］，能提高血SOD、過氧化氫酶 (CAT)及GSH-Px活力，降低血漿、腦勻漿及肝勻漿中LPO水平;丹參的水溶性成分丹參酸乙能夠直接保護細胞膜，對肝細胞損傷具有防護作用［7］;當歸提取物 (ELCAS)能通過增強抗氧化能力，激活ERK信號傳導途徑，保護內皮細胞免受氧自由基的損傷［8］;郁金具有保護肝細胞、促進肝細胞再生、抗癌、抗菌、抗氧化的作用［9］。本實驗結果表明，保肝復功丸可顯著降低ALT、AST水平;病理結果也表明保肝復功丸可減輕肝組織炎癥反應，促進損傷肝組織的修復。并且在不同劑量的保肝復功丸之間存在著一定的量效關系。可顯著升高模型大鼠肝勻漿中SOD活性和GSH-Px水平，并降低模型大鼠肝勻漿中MDA的含量。提示保肝復功丸對LPS誘導的急性肝損傷具有一定的防護作用，其機制可能與其減少自由基生成，抑制脂質過氧化，減少過氧化脂質的形成，增強機體抗氧化能力有關。

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