不同進箱溫度對凍干甲肝疫苗的影響

黃衛新,朱 蓮,吳海光,蔣秀梅,張 鋒,沈立軍,陳念良

(浙江省醫學科學院病毒病研究所/浙江普康生物技術股份有限公司,浙江 杭州 310013)

生物制品凍干研發過程常采用-20℃或更低的低溫進箱,以達到更快的降溫速度,而在轉大生產的過程中,發現凍干廢品率高。因此,開展了不同進箱溫度對凍干甲肝疫苗的影響比較,以便摸索降低廢品率的方法。

一、材料和方法

1.材料。(1)實驗對象。凍干甲肝疫苗。(2)主要設備和儀器。SFR-1灌裝機(日本鈴木);GLZ-6凍干機(北京天利);2550型酶標儀(美國BIO-RAD);VCX-600超聲波粉碎儀(Sonics&materials Inc);J2-HS離心機(美國貝克曼公司)。

2.方法。凍干方法:半成品分裝裝盤進箱前,先將凍干機板層溫度預先降至-20℃或5℃。然后,預冷-20℃-50℃的溫度3-5小時,一次干燥,凍干箱擱板溫度-35℃-50℃,二次干燥,擱板溫度 15℃-30℃;感染性滴度CCID50檢測:按 Reed-Muench公式計算[1];凍干苗物理外觀檢查依照飽滿程度由差至好依次分為+-++++;統計學方法采用minitab R16統計軟件對數據進行分析。

二、結 果

1.-20℃、5℃進箱凍干甲肝疫苗外觀比較。進箱溫度分別為-20℃、5℃在同一凍干箱內不同板層上制品外觀,具體見表1。

表1 -20℃、5℃進箱凍干甲肝疫苗外觀比較

2.凍干甲肝疫苗-20℃、5℃進箱感染性滴度檢測結果,具體見表2。經t檢驗統計分析,P>0.05,結果表明二者之間并無明顯差異。

3.進箱溫度-20℃、5℃的對甲肝疫苗廢品率的影響。比較了-20℃進箱溫度甲肝疫苗廢品率(238/250000)和 5℃進箱溫度甲肝疫苗廢品率(23/250000),經雙比率檢驗統計分析,Z=13.31,P<0.05,結果表明二者之間有明顯差異。

表2 進箱溫度-20℃、5℃的感染性滴度(LgCCID50/ml)

三、討 論

在實際過程中發現,小試、中試凍干數量不多,進箱時間通常很短,-20℃進箱后,直接降溫預凍,制品很少見粗結晶和有致密“硬殼”廢品出現[2]。但轉入大規模生產,制品進凍干箱時間會長達幾小時。最先-20℃進箱制品在以很慢的降溫速度通過冰點溫度,溶液中溶質遷移時間充足,廢品率就會明顯增多。因此,試用5℃進箱,使進箱制品溫度均勻處在5℃附近,然后快速擱板降溫,使制品溫度以最快的速度通過冰點溫度,盡量減少溶液中溶質向表面遷移,減低制品的廢品率。但有關大樣本研究觀察以及冷凍干燥機理探討有待進一步深入。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(三部).凍干甲型肝炎減毒活疫苗[M].2005年版.北京:化學工業出版社,2005.123-125.

[2]蘇樹強.溶液類樣品凍干過錯中擱板預凍特性分析[J].低溫工程,2004(1):39-43.