利巴韋林片負荷降解的研究

鄭凝堅

強制降解試驗是指將原料藥或制劑置于比較劇烈的試驗條件下，考察其穩定性的一系列試驗。一般而言，該試驗的目的主要有以下兩方面:一是通過考察藥品在一系列劇烈條件下的穩定性，了解該藥品內在的穩定特性及其降解途徑與降解產物。例如，通過高溫降解試驗，可以了解所考察的藥品在高溫條件下是否穩定;如果不穩定，大致在何種條件下不穩定，該藥品又是通過何種降解途徑得到何種降解產物。其二，這些試驗也能在一定程度上對有關物質分析方法用于檢查降解產物的專屬性進行驗證。對于創新藥，由于對其各方面的性質均不夠了解，因此，通過設計比較完整的強制降解試驗，可以比較全面地了解其穩定特性，從而為制劑處方、工藝的設計，以及產品儲存條件的確定等提供有益的參考。所以對于創新藥而言，通過強制降解試驗來了解藥物的穩定特性就顯得尤為重要。在《中國藥典》中只有對藥品進行高溫、高濕研究的要求。在ICH中只是對光照試驗有指導文件。而本研究是綜合了《中國藥典》［1，2］、ICH 及外國cGMP的要求，對藥品進行了一個全面的研究。下面是我們對藥品利巴韋林片進行強降解試驗研究的全部內容。

利巴韋林片是抗病毒藥，主要適用于呼吸道合胞病毒引起的病毒性肺炎與支氣管炎，皮膚皰疹病毒感染。國外更大量用于丙型肝炎的配合治療。

為了掌握藥品利巴韋林片在極端惡劣環境下的降解情況，并證明我們所采用的分析方法對雜質分析的專屬性，我們綜合了國內外對藥品的穩定性試驗的要求，制定了負荷降解實驗研究。將利巴韋林片在酸、堿、熱、氧化和光照條件下進行降解，15 d(360 h)內降解量要達到20%(±10%)。所有的樣品都用帶有UV檢測器的HPLC檢測系統進行含量及雜質檢測，峰純度用帶有DAD檢測器的HPLC檢測系統進行檢測。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑 儀器:HP1100高效液相色譜系統(HPLC)，色譜柱:Aminex Fast Acid Analysis陽離子交換柱(9μm，100 mm ×7.8 mm)，檢測方法:USP 利巴韋林測定方法。

1.2 樣品制備

1.2.1 酸處理實驗樣品溶液的制備 酸處理貯備液(平行制備兩份):準確稱取相當于200 mg利巴韋林原料的片劑樣品，置于100 ml容量瓶中，加入適量的 HCL(1N)溶液溶解，并定容至刻度，搖勻。置于暗處，于室溫下放置24～144個小時。

1.2.2 堿處理實驗樣品溶液的制備 堿處理貯備液(平行制備兩份):準確稱取相當200 mg利巴韋林原料的片劑樣品，置于100 ml容量瓶中，加入約70 ml KOH(0.1N)溶液溶解，并定容至刻度，搖勻。置于暗處，于室溫下放置4～144個小時。

1.2.3 熱處理實驗樣品的制備 取5個稱量瓶，每個瓶中放入相當于400 mg利巴韋林原料的片劑樣品，放入130℃的烘箱中，烘24～360個小時。

1.2.4 光照實驗樣品的制備 取5個稱量瓶，每個瓶中放入相當于400 mg利巴韋林原料藥的片劑樣品，置于光照試驗箱日光燈下(照度:10000±1000Lux)，放置24～360個小時。

1.2.5 氧化處理實驗樣品溶液的制備 氧化試驗貯備液(平行制備兩份):準確稱取相當于100 mg利巴韋林原料藥的片劑樣品，置于100 ml容量瓶中，加入約100 ml 3% 雙氧水溶解，然后稀釋至100 ml，搖勻，置于恒溫恒濕箱中(40℃±5℃，避光)，放置24～360個小時。

1.2.6 雜質溶液的制備 雜質標準品貯備液:分別準確稱取10 mg 雜質標準品(RTCOOH、TCOOH、Ribavirin α-Anomer、TCONH2、5’ARTCONH2)，置于五個不同的 50 ml容量瓶中，用稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻。再準確稱取25 mg利巴韋林標準品，置于另外一個50 ml容量瓶中，用稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻。

1.3 實驗程序 按照上述負荷降解處理條件，將利巴韋林片分別進行酸、堿、熱、光、氧化處理，然后運用HPLC分析系統，根據設定的儀器及色譜條件，對處理后的樣品溶液進行含量、雜質及峰純度測定。堿處理樣品處理4 h后測定，酸處理樣品在第24、48、144 h分別測定一次，熱處理、光處理和氧化處理樣品在第 24、72、120、240、360 h 分別測定一次。

圖1 酸處理實驗利巴韋林片樣品圖譜

2 實驗結果及分析

2.1 酸處理實驗總結 按照已定的實驗方案，在酸處理實驗第24、48、144 h，我們分別對處理后的利巴韋林片樣品進行了HPLC檢測，結果表明，利巴韋林片經過酸處理144 h后，發生了明顯降解，所檢測出的已知雜質有 RTCOOH、TOOOH、TCONH2等，見圖1。

2.2 堿處理實驗總結 按照已定的實驗方案，在堿處理實驗第4小時，我們對處理后的利巴韋林片樣品進行了HPLC檢測，結果表明，利巴韋林片經堿處理4 h后，發生了明顯降解。這說明:在堿性條件下，利巴韋林片降解產生RTCOOH雜質，見圖2。

圖2 堿處理實驗利巴韋林片樣品圖譜

2.3 光處理實驗總結 按照已定的實驗方案，在光處理實驗第24、72、120、240、360 h，我們分別對處理后的利巴韋林片樣品進行了HPLC檢測，結果表明，利巴韋林片干品經過光照處理360 h后，均未發生明顯降解。這說明:在光照條件下，利巴韋林片相對比較穩定。

2.4 熱處理實驗總結 按照已定的實驗方案，在熱處理實驗第24、72、120、240、360 h，我們分別對處理后的利巴韋林片樣品進行了HPLC檢測，結果表明，利巴韋林片干品經熱處理360 h后，未發生明顯降解，這說明:在較高溫度條件下，利巴韋林片干品相對比較穩定。

2.5 氧化處理實驗總結 按照已定的實驗方案，在氧化處理實驗第24、72、120、240、360 h，我們分別對處理后的利巴韋林片樣品進行了HPLC檢測，結果表明。在氧化條件下，利巴韋林片中核糖基與三氮唑環之間的C-N鍵發生斷裂，由于核糖基不包含能吸收紫外光的發色團，故而不能被UV檢測器檢出，見圖3。

圖3 氧化處理樣品圖譜

3 結論

本報告以上實驗數據及結論表明，利巴韋林片采用USP高效液相測定方法，能夠穩定準確地檢測到利巴韋林片的降解雜質，該方法可作為對利巴韋林片進行質量監控的有效手段。

［1］ 2010年1月 ISBN 978-7-5067-4438-6《中國藥典》2010版二部附錄XIX C原料藥與藥物制劑穩定性試驗指導原則

［2］ 2001年8月，ICH-Q1A(R2)Stability Testing of New Drug Substances and Products