鹿銜草配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

趙 敏， 吳 浪， 安金雙， 邱智東， 孟慶繁*

(1.吉林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，吉林長春130012;2.長春中醫(yī)藥大學(xué)-吉林敖東藥業(yè)集團(tuán)現(xiàn)代中藥配方顆粒研究聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，吉林長春130117)

鹿銜草系鹿蹄草科植物鹿蹄草Pyrola callitha H．Andres或普通鹿蹄草P．decorate H．Andres的全草，又稱鹿壽草、破血丹、鹿壽茶［1］等，具有活血調(diào)經(jīng)、祛風(fēng)除濕、補(bǔ)虛益腎等功效。中藥配方顆粒［2］又稱免煎中藥，主要通過將單味中藥進(jìn)行加工提取其有效成分，制成中藥飲片新劑型;臨床應(yīng)用及相關(guān)藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，單味中藥配方顆粒和傳統(tǒng)的水煎劑具有基本相同的療效及藥理作用，且中藥配方顆粒具有體積小，易于攜帶保存，質(zhì)量穩(wěn)定可控等優(yōu)點(diǎn)［3］。鹿銜草配方顆粒采用《中國藥典》規(guī)定的炮制中藥飲片鹿銜草為原料，通過提取濃縮、干燥制粒等現(xiàn)代工藝而制成，其有效成分和功效基本保持不變。本實(shí)驗(yàn)參考2010年版《中國藥典》鑒別項(xiàng)下內(nèi)容，采用TLC法對鹿銜草配方顆粒進(jìn)行鑒別，并用HPLC法測定鹿銜草配方顆粒中水晶蘭苷，為大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)提供了科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-20AB高效液相色譜儀 (日本島津);101A-2E電熱鼓風(fēng)干燥箱 (上海實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);GeneGenius凝膠成像系統(tǒng) (美國，Syn-Gene);硅膠H板 (青島海洋化工廠)。

1.2 試藥與藥品 水晶蘭苷對照品 (批號:20110622，CAS:5945-50-6)購自上海源葉生物科技有限公司;鹿銜草對照藥材由中國食品藥品檢定研究院提供;鹿銜草飲片由長春中醫(yī)藥大學(xué)-吉林敖東藥業(yè)集團(tuán)現(xiàn)代中藥配方顆粒研究聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室提供，飲片經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室姜大成教授鑒定。甲醇為色譜純;水為重蒸水;其他試劑為分析純。

2 鹿銜草配方顆粒的薄層色譜鑒別

按照《中國藥典》2010年版一部鹿銜草飲片【鑒別】項(xiàng)下規(guī)定，取鹿銜草對照藥材及飲片粉末1 g，加乙醇20mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，取上清液作為對照品溶液。另取鹿銜草配方顆粒1 g(相當(dāng)于3 g飲片)，同法制成供試品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸 (5∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果見圖1所示。圖1表明，配方顆粒與對照藥材顯示相同的斑點(diǎn)。

圖1 鹿銜草對照藥材與配方顆粒TLC圖譜Fig.1 TLC chromatogram of Pyrola reference herb and Pyrola Dispensing Granules

3 鹿銜草配方顆粒檢查

3.1 水分 按照《中國藥典》2010年版附錄IXH［4］水分測定項(xiàng)中烘干法測定。取同一批鹿銜草配方顆粒，平行3份，測得平均含水量為4.64%(小于6%)，符合2010版藥典一部中關(guān)于顆粒劑的要求。

3.2 溶化性 取鹿銜草配方顆粒10 g，加熱水200 mL攪拌5 min，觀察到顆粒全部溶化，說明該顆粒的溶化性符合要求。

3.3 粒度 按照《中國藥典》2010年版一部附錄XIB［4］粒度測定第二法，取鹿銜草配方顆粒100 g稱定質(zhì)量，置規(guī)定的藥篩中，保持水平狀態(tài)過篩，左右往返，邊篩動邊輕扣3 min，不能通過一號篩和能通過五號篩的顆粒為5.3 g(不超過15%)。

4 水晶蘭苷測定

4.1 色譜條件［4］Zorbax SB-C18色譜柱 (4.6 mm×250 mm，5μm);流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液(5∶95);柱溫30℃;體積流量1.0 mL/min;檢測波長235 nm;進(jìn)樣量5μL。水晶蘭苷對照品和供試品的HPLC圖譜見圖2所示。

圖2 水晶蘭苷HPLC圖譜Fig.2 HPLC chromatogram ofmonotropein

4.2 對照品溶液的制備 取水晶蘭苷對照品適量，精密稱定，加水制成每1 mL含0.200 mg的溶液，即得水晶蘭苷對照品母液。

精密吸取水晶蘭苷對照品母液適量，配制成50.00、100.00、 150.00、 200.00、 250.00、 300.00、350.00、400.00μg/mL的溶液。

4.3 供試品溶液的制備 取本品粉末約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加水100 mL，在80℃水浴中提取1 h，放冷，搖勻，即得。重復(fù)上述操作，制得供試品平行組。

4.4 線性關(guān)系考察 精密吸取上述各質(zhì)量濃度對照品溶液5μL進(jìn)樣，測定峰面積，以水晶蘭苷質(zhì)量濃度 (X)為橫坐標(biāo)，峰面積 (Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程:Y=5697.1X+7979.2，R2=0.999 9。表明水晶蘭苷在0.250 0μg～2.000 μg的范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

4.5 回收率試驗(yàn) 精密稱定本品0.5 g，平行6份，按4.3項(xiàng)下方法操作制備供試液，然后向供試液中精密加入一定量水晶蘭苷對照品，混勻后測定水晶蘭苷含量，結(jié)果平均回收率為99.87%，RSD=0.73%(n=6)，結(jié)果見表1所示。

表1 回收率測定試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)Tab.1 Recovery ofmonotropein(n=6)

4.6 精密度試驗(yàn) 按上述色譜條件方法測定水晶蘭苷，精密吸取上述供試品溶液5μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，RSD為0.26% (n=6)，結(jié)果表明精密度良好。

4.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品同一批次樣品6份，按4.3項(xiàng)下方法操作，分別按上述色譜條件方法測定水晶蘭苷，RSD為1.20%。結(jié)果表明本方法的重復(fù)性較好。

4.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取上述供試品溶液5μL，分別在 0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，RSD為2.24%(n=6)，色譜峰面積積分值在12 h內(nèi)基本無變化，說明穩(wěn)定性較好。

4.9 樣品測定 分別精密稱定不同批號的鹿銜草配方顆粒約1 g，按4.3項(xiàng)下方法制備供試品，按上述色譜條件測出峰面積，采用外標(biāo)法計(jì)算水晶蘭苷的含有量。結(jié)果見表2所示。

表2 3批樣品測定Tab.2 Determ ination of monotropein content for three batches of samples

5 討論

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鹿銜草具有增加機(jī)體免疫力、擴(kuò)張血管、促進(jìn)冠脈循環(huán)、降壓、調(diào)脂等作用，對于治療心腦血管疾病療效確切，有很好的開發(fā)利用前景［5］。將鹿銜草制備成顆粒劑能夠保留原藥材的性味、有效成分和功能。本實(shí)驗(yàn)先通過TLC法進(jìn)行鑒別，然后對顆粒劑各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢查，最后檢測有效成分的含有量，建立起一套科學(xué)、標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法。

TLC實(shí)驗(yàn)是參照2010年版中國藥典的TLC鑒別方法進(jìn)行的，實(shí)驗(yàn)中還進(jìn)行了更換不同展開劑進(jìn)行薄層色譜分析［6～9］，結(jié)果顯示，將藥典中規(guī)定的展開劑甲苯-甲酸乙酯-甲酸 (5∶4∶1)更換成甲苯-乙酸乙酯-乙酸 (5 ∶4 ∶1)［6］可得到同樣清晰的特征斑點(diǎn)。此外，采用GF254硅膠板、以三氯甲烷-甲醇 (10∶3)為展開劑［9］進(jìn)行薄層鑒別同樣可得到清晰的特征斑點(diǎn)，說明鹿銜草配方顆粒中有效成分的量穩(wěn)定可控。

鹿銜草配方顆粒的粒度、水分含有量和溶化性參照2010年版藥典一部關(guān)于顆粒劑的要求進(jìn)行檢查，結(jié)果均符合要求。

據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道［10-12］，鹿銜草中主要成分為黃酮類物質(zhì)，多為醇提，但成本高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用水提工藝，有效成分水晶蘭苷的含有量達(dá)到藥典中關(guān)于鹿銜草含量測定的要求，所以采用水晶蘭苷為指標(biāo)建立鹿銜草配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為鹿銜草的深入開發(fā)利用提供一定的依據(jù)。

以水晶蘭苷為指標(biāo)評價(jià)鹿銜草配方顆粒，結(jié)果顯示，該方法科學(xué)準(zhǔn)確，具有良好的可控性，因此可以作為鹿銜草配方顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

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