三七不同藥用部位聚炔類成分的GC-MS分析研究

周建良， 陸靜嫻， 譚春梅， 鄭 成， 陳碧蓮

(浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院，浙江杭州310004)

三七為五加科植物三七Panax notoginseng(Burk．)F．H．Chen的干燥根，主產(chǎn)于云南、廣西及四川等地，是我國(guó)特有的名貴中藥材，具有散瘀止血、消腫止痛之功效。三七含有多種化學(xué)成分，主要有效成分之一是皂苷類成分。此外，三七還含有其他藥用成分，如三七素、黃酮、揮發(fā)油、氨基酸、植物甾醇等［1-2］。近年來(lái)，有文獻(xiàn)報(bào)道三七的脂溶性成分對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株及部分革蘭氏陽(yáng)性菌有強(qiáng)烈的抑制活性，經(jīng)分離純化并鑒定了兩個(gè)聚乙炔醇類化合物，人參炔醇 (panaxynol)和人參環(huán)氧炔醇 (panaxydol)［1］。人參炔醇可抑制血管緊張素II誘導(dǎo)的血管收縮，降低自發(fā)性高血壓大鼠平均脈動(dòng)壓，同時(shí)還具有抗炎及抗血小板凝聚活性;另人參炔醇具有抗癌、抑菌、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、降壓、抗炎和神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)等多種作用［3-5］。

目前，三七水溶性皂苷類和氨基酸成分的分析研究較多［6-11］，但少有對(duì)聚炔類成分分析的研究報(bào)道［12］，鑒于該類成分的特殊活性，本研究采用氣質(zhì)聯(lián)用 (GC-MS)方法對(duì)12批三七藥材及不同藥用部位中的聚炔類成分進(jìn)行分析和測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 7000 GC/MS Triple Quad氣質(zhì)聯(lián)用儀 (氣相系統(tǒng)為7890A GC System)。

1.2 試藥 環(huán)己烷為分析純;對(duì)照品正十八烷(octadecane)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;三七藥材及不同藥用部位購(gòu)自亳州、文山藥材市場(chǎng)，經(jīng)浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院郭增喜主任中藥師鑒定均屬于五加科植物三七Panax notoginseng(Burk．)F．H．Chen，樣品來(lái)源見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備 取三七藥材 (或不同藥用部位)粉末約1 g，精密稱定，精密加入環(huán)己烷25 mL，正十八烷內(nèi)標(biāo)溶液 (40.25μg/mL，溶劑環(huán)己烷)1.0 mL，85℃加熱回流30 min，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)行GC-MS分析。

2.2 GC-MS分析條件 HP-5MS毛細(xì)管柱(30 m×0.25mm×0.25μm);初始柱溫60℃，保持3 min，再以10℃/min的速率升至250℃，保持8 min;載氣為氦氣;體積流量1.2 mL/min;進(jìn)樣口溫度250℃;分流模式為不分流。MS條件:離子源為EI;電離電壓70 eV;質(zhì)譜質(zhì)量掃描范圍為50～600 amu;溶劑延遲5 min。

表1 三七藥材及藥用部位樣品來(lái)源Tab.1 Sam p les collection of Panax notoginseng

2.3 三七聚炔類成分結(jié)構(gòu)解析 在上述GC-MS色譜分離條件下，對(duì)三七藥材不同藥用部位 (主根、花、剪口、筋條、莖葉、須根)進(jìn)行分析。將GCMS所得的質(zhì)譜信息經(jīng)NIST08數(shù)據(jù)庫(kù)檢索對(duì)照分析，鑒定了3個(gè)聚炔類成分，保留時(shí)間15.1 min的色譜峰為 methyl 5，7-hexadecadiynoate，19.7 min為人參炔醇，21.1 min為人參環(huán)氧炔醇，保留時(shí)間17.3 min的色譜峰為內(nèi)標(biāo)峰正十八烷，見表2。代表性色譜圖見圖1。

表2 三七藥材中鑒定的聚炔類成分Tab.2 Polyacetylenes identified from different parts of Panax notoginseng

2.4 三七聚炔類成分相對(duì)定量分析 由于缺乏聚炔類成分的對(duì)照品，采用定量加入內(nèi)標(biāo)溶液，比較樣品峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的大小表征樣品中methyl 5，7-hexadecadiynoate、人參炔醇和人參環(huán)氧炔醇量的相對(duì)高低。定量分析時(shí)，采用豐度高且具有特征性的碎片離子作為定量離子，其中人參炔醇和人參環(huán)氧炔醇為m/z91.1，methyl 5，7-hexadecadiynoate為m/z205.2，內(nèi)標(biāo)峰正十八烷為m/z 71.1，內(nèi)標(biāo)出峰位置處未出現(xiàn)干擾峰，見圖2。在精密度試驗(yàn)中，對(duì)同一份樣品重復(fù)進(jìn)樣分析6次，內(nèi)標(biāo)峰面積的RSD為2.1%(n=6)，表明精密度良好。

三七主根、花、剪口、筋條、莖葉和須根等三七不同藥用部位中聚炔類成分的相對(duì)含有量結(jié)果見圖3［相對(duì)含有量=樣品峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積/稱樣量 (折算至每克的含有量)］。結(jié)果表明methyl 5，7-hexadecadiynoate、人參炔醇和人參環(huán)氧炔醇在三七不同藥用部位中有較大差異。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)從三七環(huán)己烷提取物中鑒定了3個(gè)聚炔類成分，其中人參炔醇和人參環(huán)氧炔醇為主要的聚炔類成分。由于三七聚炔類成分不穩(wěn)定，加上對(duì)照品缺乏，本實(shí)驗(yàn)采用內(nèi)標(biāo)校正的相對(duì)含有量測(cè)定法對(duì)該類成分進(jìn)行了定量測(cè)定，其結(jié)果在同一操作下具有可比性。

測(cè)定結(jié)果表明，3個(gè)聚炔類成分的總含有量在三七筋條、3年生主根、花、剪口中較高，在莖葉中較低;主根中，三七3年生的總含有量最高，而頭數(shù)越多，含有量越低;三七花中的人參炔醇含有量很高，但人參環(huán)氧炔醇幾乎未能檢測(cè)到。

圖1 三七藥材不同藥用部位的GC-MS總離子流代表性圖譜Fig.1 Representative GC-M S total ion chromatograms(TICs)of different parts of Panax notoginseng

圖2 不加內(nèi)標(biāo)的樣品GC-MS總離子流代表性圖譜 (文山剪口)Fig.2 Representative GC-MS TIC of Panax notoginseng sample w ithout internal standard(W ensan Jiankou)

圖3 三七不同藥用部位聚炔類成分的相對(duì)含有量及其總和Fig.3 Relative amount of polyacetylenes from different parts of Panax notoginseng

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