金澤冠心軟膠囊質量標準研究＊

王賢英，謝香菊，李勝容

(重慶市中藥研究院，重慶 400065)

金澤冠心膠囊是在國家藥品標準中藥成方制劑第十一冊(原衛生部部頒標準中藥成方制劑第十一冊)收載品種“金澤冠心膠囊(WS3－B－2171－96)”的基礎上研制的新劑型，由澤瀉和雪膽提取物組成，具有調血脂、增加心肌營養性血流量、降低心肌耗氧量的功效，用于冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、心絞痛和高血脂癥。原膠囊劑標準僅對澤瀉進行了薄層鑒別，無含量測定，不能有效控制新型金澤冠心軟膠囊的質量。筆者建立高效液相色譜(HPLC)法對處方中的雪膽提取物進行定性鑒別，建立澤瀉提取物主成分23－乙酰澤瀉醇B含量測定的HPLC法為金澤冠心軟膠囊的質量控制提供依據。

1 儀器與試藥

SK250LH型超聲儀(上海科導超聲儀器有限公司);AG265－S型電子天平(梅特勒－托利多儀器有限公司);LC－2010A型高效液相色譜儀;Shimadzu CLASS－VP V6.12 SP4工作站(日本島津公司)。雪膽甲素對照品，23－乙酰澤瀉醇B對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供;金澤冠心軟膠囊樣品及缺澤瀉陰性樣品由重慶市中藥研究院制藥廠提供;乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 澤瀉的薄層色譜鑒別

取本品1粒，置50 mL具塞三角瓶中，加甲醇10 mL，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)15 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為供試品溶液。另取澤瀉對照藥材2g，加甲醇20mL，同法制成對照藥材溶液。依法制備缺澤瀉的陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯 － 甲酸(6 ∶3.5 ∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10% 硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性無干擾，見圖1。

圖1 澤瀉的薄層色譜圖

2.2 雪膽的HPLC鑒別

取本品裝量差異項下的樣品，取約1.0 g，精密稱定，置 25 mL容量瓶中，加入甲醇約20 mL，超聲處理(功率 250 W，頻率 50 kHz)30 min，放冷，加甲醇定容至25 mL，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 mL，于中性氧化鋁柱上(中性氧化鋁200～300目，10 g，干法裝柱)，用甲醇50 mL分次洗脫，收集甲醇洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至 5 mL，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。精密稱取雪膽甲素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得對照品溶液。取缺雪膽陰性對空白約0.9 g，照供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。在以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑、乙腈－水(40∶60)為流動相、流速1.0 mL/min、柱溫為25℃、檢測波長為210 nm的色譜條件下，進樣量10 μL，測定色譜峰。供試品溶液HPLC色譜圖中，在與對照品溶液HPLC色譜圖相應保留時間處出現相同的色譜峰，陰性無干擾，見圖2。

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil(鉆石)C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 － 水(70 ∶30，V/V);流速:1.0 mL/min;柱溫:25 ℃;檢測波長:208 nm;進樣量:10 μL。

圖2 雪膽鑒別的HPLC圖譜

2.3.2 溶液制備

精密稱取23－乙酰澤瀉醇B對照品適量，加乙腈制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得對照品溶液。取本品裝量差異項下的樣品，取約0.5 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，加石油醚(60～90℃)10 mL，超聲提取10 min，濾過，棄去石油醚提取液，濾渣、濾紙揮去溶劑，一并移入同一具塞錐形瓶中，精密加入乙腈25 mL，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定質量，加乙腈補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。按處方量1%的量，稱取缺澤瀉的處方量藥材按成品制備工藝及供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3.3 方法學考察

系統適用性試驗:取2.3.2項下3種溶液，在擬訂的色譜條件下進樣10 μL。結果見圖3。可知，陰性對照品溶液在23－乙酰澤瀉醇B出峰時間區域無干擾峰出現，故對測定無干擾作用。理論板數按23－乙酰澤瀉醇B峰計算，應不低于2 000，分離度大于 1.5。

線性關系考察:精密稱取23－乙酰澤瀉醇B對照品溶液(0.182 8 g/L)4，8，10，12，16 μL，分別注入液相色譜儀，測定峰面積，以進樣量為橫坐標、峰面積積分值為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=1 502 334X+475 685，r=0.999 9(n=5)。結果表明，23－ 乙酰澤瀉醇 B 進樣量在 0.731 2～2.924 8 μg范圍內與峰面積積分值具有良好的線性關系。

圖3 金澤冠心軟膠囊HPLC圖

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液，重復進樣5次(進樣量10 μL)，按上述色譜條件測定峰面積。結果的RSD為0.35%。

穩定性試驗:取樣品1份，精密稱定，照擬訂的供試品溶液制備方法制備溶液，分別于 0，2，4，6，12 h 時測定。結果峰面積的RSD為0.39%(n=5)，表明供試品溶液放置12 h內穩定。

重現性試驗:取同一批號樣品，按擬訂的含量測定方法，分別制備5份供試品溶液并測定。結果含量的RSD為2.0%，表明方法重現性良好。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品內容物各6份，精密稱定，分別精密加入23－乙酰澤瀉醇B對照品(配成溶液加入，質量濃度為 1.828 μg/mL)0.8，0.8，0.6，0.6，0.4，0.4 mL，按擬訂的含量測定方法分別測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 23－乙酰澤瀉醇B加樣回收試驗結果(n=6)

2.3.4 樣品含量測定

取6批樣品，按供試品溶液制備及測定方法測定峰面積，計算樣品中23－乙酰澤瀉醇B的含量。結果見表2。

表2 金澤冠心軟膠囊中23－乙酰澤瀉醇B的含量測定結果(n=6)

3 討論

曾研究了雪膽的薄層色譜鑒別，但由于本品中雪膽處方量低，且其他樣品對其薄層鑒別干擾極大，不易判斷，故采用HPLC對雪膽進行鑒別。雪膽的HPLC鑒別時選擇了用乙腈－水(40∶60)作為流動相，選用210 nm為檢測波長[1]，在此條件下，雪膽甲素與相鄰色譜峰達到基線分離，峰形對稱，陰性對照無干擾。

曾試驗了乙腈 － 水不同比例(75 ∶25[2]，90 ∶10[3]，80 ∶20[4]，70∶30)，結果選用乙腈 －水(70∶30)能使樣品中23－乙酰澤瀉醇B峰與相鄰峰達到良好分離，峰形對稱，陰性對照無干擾。用甲醇制備23－乙酰澤瀉醇B對照品溶液，進行紫外掃描，結果在208 nm波長處有最大吸收，故選用208 nm為檢測波長。

方法學考察結果表明，23－乙酰澤瀉醇B的含量測定方法成立，能控制產品質量。

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[2]陳建忠，潘 馨，黃若旺.HPLC法同時測定澤瀉中2種有效成分的含量[J].藥物分析雜志，2007，27(5):721 －723.

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