不同提取工藝對(duì)復(fù)方中東莨菪堿含量的影響＊

霍務(wù)貞，吳燕紅，李苑新，袁旭江，朱盛山

(廣東藥學(xué)院中藥開(kāi)發(fā)研究所·國(guó)家中醫(yī)藥管理局三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510006)

喘平復(fù)方制劑是廣東藥學(xué)院中藥開(kāi)發(fā)研究所自主研發(fā)的新 藥，主治支氣管哮喘、喘息性支氣管炎[1]。方中洋金花收載于2010年版《中國(guó)藥典(一部)》，具有平喘止咳、解痙定痛的功效[2]。本研究的復(fù)方中洋金花用量比例雖小，但為了更好地控制復(fù)方制劑中東莨菪堿的含量，現(xiàn)從工藝條件開(kāi)始監(jiān)控東莨菪堿的轉(zhuǎn)移率，考察不同提取工藝對(duì)復(fù)方中微量組分東莨菪堿的影響，以評(píng)價(jià)其最佳提取工藝，為該藥的安全有效使用提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀系列，包括G1312A二元泵、G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1315B－DAD檢測(cè)器(美國(guó)安捷倫);BP211D型電子分析天平(Sartorius，瑞士);EPED－10TJ型實(shí)驗(yàn)室純水器(南京易普易達(dá)科技發(fā)展有限公司);KQ－500M型超聲清洗器(東莞科橋超聲波設(shè)備有限公司)。乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純;氫溴酸東莨菪堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100049－200308)。相關(guān)藥材均采購(gòu)自廣州采芝林藥業(yè)有限公司采購(gòu)部，經(jīng)廣東藥學(xué)院朱盛山教授鑒定為藥典規(guī)定藥材，其中洋金花藥材為茄科植物白曼陀羅的干燥花。

2 方法與結(jié)果

2.1 東莨菪堿含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Agilent TC －C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相:以0.07 mol/L磷酸鈉(含0.017 5 mol/L十二烷基硫酸鈉，用磷酸調(diào) pH至6.0)－乙腈(50∶100)，檢測(cè)波長(zhǎng):216 nm;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:5 μL。在此色譜條件下，分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，注入液相色譜儀。色譜圖中，供試品與氫溴酸東莨菪堿對(duì)照品相同的保留時(shí)間有一對(duì)應(yīng)色譜峰，以氫溴酸東莨菪堿計(jì)算，理論板數(shù)在3 000以上。

2.1.2 溶液制備

取氫溴酸東莨菪堿對(duì)照品適量，精密稱定，加乙腈配制成每1 mL分別含0.1 mg的對(duì)照品溶液。取復(fù)方浸膏0.1 g，加入2 mol/L鹽酸溶液5 mL，超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，濾過(guò)，濾渣和濾器用2 mol/L鹽酸溶液10 mL分?jǐn)?shù)次洗滌，合并濾液和洗液，用濃氨水調(diào)pH至9，用三氯甲烷振搖提取4次，每次10 mL，合并三氯甲烷，回收溶劑至干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.1.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品溶液 0.1，0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 μL 進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為A=797.395C+0.088 5，r=0.999 87(n=7)。結(jié)果表明，氫溴酸東莨菪堿進(jìn)樣量在0.028 5～0.285 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液，按擬訂的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積積分值的RSD為1.36%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品，依法制備供試品溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果含量的RSD為2.71%(n=6)，表明方法重復(fù)性較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取剛制備的同一供試品溶液，按擬訂的色譜條件，于0，2，4，6，8，10，12 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果峰面積積分值的RSD為1.24%(n=7)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

加樣回收試驗(yàn):取同一工藝復(fù)方浸膏(含量為3.284 mg/g)6份，每份0.05 g，分別置錐形瓶中，加入質(zhì)量濃度為2.2 g/L的對(duì)照品溶液73 μL，按供試品溶液制備方法制備待測(cè)溶液，依法測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 東莨菪堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=3)

2.2 提取工藝對(duì)含量的影響

2.2.1 提取工藝

工藝Ⅰ:取處方量藥材，精密稱定，置150 mL圓底燒瓶，加入8倍量蒸餾水，浸泡1 h后，加熱回流1.5 h，倒出提取液，再加入6倍量蒸餾水，加熱回流1 h，倒出提取液，合并提取液。

工藝Ⅱ:取處方量藥材，精密稱定，置150 mL圓底燒瓶，加入8倍量0.02%鹽酸，浸泡1 h后，加熱回流 1.5 h，倒出提取液，再加入6倍量0.02%鹽酸，加熱回流1 h，倒出提取液，合并提取液。

工藝Ⅲ:取處方量藥材，精密稱定，置150 mL圓底燒瓶中，加入8倍量 0.05%鹽酸，浸泡1 h后，加熱回流1.5 h，倒出提取液，再加入6倍量0.05%鹽酸，加熱回流1 h，倒出提取液，合并提取液。

工藝Ⅳ:取處方量藥材，精密稱定，加入3倍量氨水浸潤(rùn)2 h，加入8倍量80%乙醇，加熱回流1.5 h，倒出提取液，再加入6倍量酸液，加熱回流1 h，倒出提取液，合并提取液。

工藝Ⅴ:取處方量藥材，精密稱定，加入3倍量8%氨水浸潤(rùn)2 h，加入8倍量80%乙醇超聲(功率500 W，頻率40 kHz)提取40 min，倒出提取液，再加入6倍量80%，超聲提取20 min，倒出提取液，合并提取液。

工藝Ⅵ:取處方量藥材，精密稱定，置滲漉缸，加入3倍量8%氨水，浸潤(rùn)2 h，用14倍80%乙醇滲漉，收集流出液。

2.2.2 樣品含量測(cè)定

取上述各工藝提取液，減壓濃縮，真空干燥，取 0.1 g，按2.1.1項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備待測(cè)溶液，按擬訂的色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同提取工藝考察結(jié)果(n=3)

3 討論

由表2可見(jiàn)，復(fù)方藥材用酸水直接加熱提取(工藝Ⅱ和Ⅲ，東莨菪堿提取效果比其他提取工藝更高，且酸水加熱提取的工藝簡(jiǎn)單、高效，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

含量測(cè)定時(shí)比較了濃氨試液調(diào)pH對(duì)結(jié)果的影響，pH為9時(shí)三氯甲烷振搖提取可得到更高的含量，pH為10時(shí)東莨菪堿不出峰。還對(duì)三氯甲烷振搖提取的次數(shù)進(jìn)行了考察，以振搖提取5次的累計(jì)結(jié)果為100%，考察發(fā)現(xiàn)，振搖提取3次只能提取到87.77%，而振搖提取4次能達(dá)到98.22%，故本試驗(yàn)采取振搖提取4次，既能節(jié)省成本，又可達(dá)到較大的提取率。

[1]霍務(wù)貞，吳燕紅，袁旭江，等.喘平復(fù)方制劑麻黃藥材質(zhì)量篩選分析[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(6):1 377 －1 378.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:250.