復方黃連素片中鹽酸小檗堿含量測定方法改進

李茂森

(四川省德陽市藥品檢驗所，四川 德陽 618000)

復方黃連素片收載于2010年版《中國藥典(一部)》，由鹽酸 小檗堿、木香、吳茱萸、白芍等4味藥組成，用于濕熱引起的腸道疾病，臨床療效顯著。原標準中采用高效液相色譜(HPLC)法測定鹽酸小檗堿的含量，但對照品和樣品制作過程較復雜而煩瑣，增大了對試驗結果的影響因素，致使試驗結果重現性不理想。筆者對對照品和樣品制作過程進行了改進，并對其他影響含量結果的因素加以討論。現報道如下。

1 儀器與試藥

美國Waters 1525型液相色譜儀，Waters 2487檢測器，Waters Breeze數據處理系統。鹽酸小檗堿對照品(批號為0731－9906，中國藥品生物制品檢定所);復方黃連素片(批號為 100906，101003，100803，四川同人泰藥業有限公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:SymmetryShieldTMRPC18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.033 mol/L磷酸二氫鉀－乙腈(60∶40);檢測波長:265 nm;柱溫:30 ℃;流速:0.8 mL/min;進樣量:10 μL。

2.2 改進方法[1]

2.2.1 溶液制備

精密稱取100℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得對照品溶液。取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細，精密稱取適量(相當于鹽酸小檗堿30mg)，置100 mL量瓶中，加鹽酸－甲醇(1∶100)溶液約75 mL，超聲處理20 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續濾液，精密量取續濾液2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.2.2 方法學考察

標準曲線制備:精密稱取100℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL含100 μg的備用溶液;精密吸取備用溶液 1.0，2.5，5.0，7.5，10 mL，分別置 10 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積并回歸，得回歸方程為Y=1.291 04×10－5X－0.169 22，r=0.999 9(n=5)。結果表明，鹽酸小檗堿質量濃度在10～100 μg/mL范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

精密度試驗:取同一對照品溶液，重復進樣5次。結果峰面積積分值的RSD=0.92%(n=5)。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，立即測定和在室溫下放置不同時間進行測定。結果供試品中鹽酸小檗堿的峰面積積分值在5 h內穩定，RSD=0.52%(n=5)。

重現性試驗:取同一批(批號為030803)樣品5份，按樣品測定方法測定。結果平均含量為89.8%，RSD=0.88%(n=5)。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品(批號為030803)5份，分別添加一定量的鹽酸小檗堿對照品，按供試品溶液的制備方法制成檢測溶液，并依法測定其含量。結果見表1。

2.3 藥典方法[2]

對照品溶液制備:精密稱取100℃干燥5 h的鹽酸小檗堿對照品約25 mg，置250 mL燒杯中，加沸水約150 mL使溶解，稍冷后加入稀鹽酸3 mL，攪勻，放冷，轉移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取2 mL，置25 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗結果(n=5)

供試品溶液制備:取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細，精密稱取適量(相當于鹽酸小檗堿30 mg)，置250 mL燒杯中，加沸水約150 mL使溶解，稍冷后加入稀鹽酸3 mL，攪勻，放冷，轉移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，離心(轉速為4 000 r/min)，精密量取2 mL，置25 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 樣品含量測定

按上述改進方法與藥典方法測定了3批樣品的鹽酸小檗堿含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果(%)

3 討論

供試品除去糖衣的方法對含量測定結果影響較大。方法1:采用低溫加熱后輕輕敲打剝去糖衣，由于糖衣內表面鹽酸小檗堿易滲透黏附而剝去，使含量結果偏低。方法2:采用水洗糖衣包衣層(注意不要洗到片芯)，擦干，低溫干燥。試驗發現，方法1比方法2含量結果約低2%，采用方法2結果更穩定準確。

鹽酸小檗堿對照品干燥恒重時要注意嚴格控制溫度。105℃干燥5 h對照品顏色由黃色加深至棕色，100℃干燥5 h對照品由黃色變成暗黃色，溫度對試驗結果有一定的影響。另外對照品采用硅膠干燥24 h，對試驗結果影響最小。不同批次的鹽酸小檗堿對照品對試驗結果也有一定的影響。對照品藥典方法配制的酸水備用液，在冰箱中冷藏保存時，顏色易加深而且產生絮狀沉淀而變質。本法采用100℃干燥至恒重加甲醇溶解對照品，對試驗結果影響較小，且能在冰箱中密閉冷藏保存較長時間。但采用甲醇作溶劑時，在3 min左右有一甲醇溶劑峰，應注意區別。

流動相和檢測波長等均采用了原藥典方法，僅對對照品和樣品的制備方法進行了改進，減小了勞動強度和對試驗結果的影響因素。本法操作簡便，重現性好，可對復方黃連素片中的鹽酸小檗堿含量測定方法的改進提供參考依據，也可作為藥品生產企業快速檢驗中間產品和成品的方法。

[1]WS－10558(ZD－0558)2002，國家食品藥品監督管理局標準(試行)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2000:1 182.