孔衛(wèi)東,周世玉
(四川省成都市食品藥品檢測中心,四川 成都 610045)
近年來發(fā)現(xiàn)市場上存在一些宣稱止咳、抗哮喘的純中藥制劑,其中非法添加了止咳平喘類和激素類化學(xué)藥,如醋酸潑尼松、茶堿等,如果患者不知情而長期、大量服用這些所謂的純中藥制劑,不僅延誤疾病的治療,且可能發(fā)生中毒甚至危及生命。醋酸潑尼松為腎上腺皮質(zhì)激素,有抗炎與抗過敏作用,對咳嗽、哮喘等過敏性疾病有較明顯的效果,但盲目濫用該類藥物可能導(dǎo)致全身性過敏反應(yīng)、多種代謝異常、兒童生長抑制、誘發(fā)青光眼、精神癥狀等。茶堿是甲基嘌呤類藥物,主要用于治療支氣管哮喘、肺氣腫、支氣管炎等癥,其藥理作用與血濃度有關(guān),但有效血濃度安全范圍很窄,口服吸收不穩(wěn)定,且個(gè)體差異很大,一次用量過大或反復(fù)用藥其作用積累,均有發(fā)生過量中毒的可能。因此,有必要建立準(zhǔn)確、可靠、快速的分析方法,用于檢測止咳平喘類中藥制劑中非法添加的醋酸潑尼松、茶堿等化學(xué)藥品。
美國Waters2687型高效液相色譜儀,Waters2487檢測器,empower色譜數(shù)據(jù)工作站;AE-240型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。肺力咳合劑(貴陽建興藥業(yè)有限公司,批號為20081106);化痰平喘片(通化華辰藥業(yè)股份有限公司,批號為20080501);咳克片(江西民濟(jì)藥業(yè)有限公司,批號為070908);肺寧片(長春萬德制藥有限公司);得樂咳喘寧膠囊(成都得樂醫(yī)院制劑,批號為080721);咳克片(中山市恒山藥業(yè)有限公司,批號20080306)。醋酸潑尼松對照品(批號為10012-0105)、茶堿對照品(批號為 100121-199903)均由中國藥品生物制品檢定所提供。流動(dòng)相中的甲醇為色譜純,水為超純水,其他試劑試藥均為分析純。
色譜柱:Meritech C18柱(250 mm × 4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水;檢測波長:醋酸潑尼松240 nm,茶堿275 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:35℃。理論板數(shù)按醋酸潑尼松及茶堿計(jì)算均不低于10 000。
精密稱取醋酸潑尼松12.99 mg,置25 mL容量瓶中,加甲醇溶解,定容至刻度,搖勻,作醋酸潑尼松對照品儲備溶液;精密稱取茶堿8.27 mg,置25 mL容量瓶中,加甲醇溶解,定容至刻度,搖勻,作為茶堿對照品儲備溶液。根據(jù)醋酸潑尼松及茶堿的日服劑量換算,確定樣品取樣量,取肺力咳合劑50 mL,化痰平喘片3 g,咳克片2 g,肺寧片6 g,得樂咳喘寧膠囊3 g,固體制劑研碎,液體制劑蒸干,分置50 mL容量瓶中,加甲醇適量,超聲處理20 min,用甲醇定容至刻度,搖勻,濾過,作為供試品溶液。
線性關(guān)系考察:吸取醋酸潑尼松對照品儲備溶液5 mL,置50 mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,作對照品溶液Ⅰ;吸取醋酸潑尼松對照品儲備溶液1 mL,置100 mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,作對照品溶液Ⅱ,吸取對照品溶液Ⅱ4,8,16,20 μL,對照品溶液Ⅰ5,10 μL,對照品儲備溶液 3 μL,注入液相色譜儀,以進(jìn)樣質(zhì)量對峰面積回歸,得醋酸潑尼松的線性回歸方程為Y=2 134 996.90X-17 351.86,r=0.999 9(n=7)。取茶堿對照品儲備溶液5 mL,置50 mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,作對照品溶液Ⅰ;取對照品儲備溶液1 mL,置100 mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,作對照品溶液Ⅱ,吸取對照品溶液Ⅱ4,8,15 μL,對照品溶液Ⅰ3,5,7,16 μL,對照品儲備溶液4 μL注入液相色譜儀,以進(jìn)樣質(zhì)量對峰面積回歸,得茶堿的線性回歸方程為Y=2 628 780X+15 622,r=0.999(n=7)。結(jié)果表明,醋酸潑尼松進(jìn)樣量在 2.078 4 ×10-2~1.558 8 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系;茶堿進(jìn)樣量在 1.323 2 ×10-2~1.323 2 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。
精密度試驗(yàn):分別吸取醋酸潑尼松及茶堿對照品溶液Ⅰ5 μL,注入液相色譜儀,連續(xù)進(jìn)樣6次,按上述色譜條件測定。結(jié)果醋酸潑尼松和茶堿的峰面積RSD分別為0.94%和0.13%(n=6),表明儀器精密度良好。
加樣回收試驗(yàn):精密稱取不含醋酸潑尼松及茶堿的咳克片(江西濟(jì)民藥業(yè)有限公司,批號070908)作為空白樣品,精密稱取6份,置50 mL容量瓶中,分別精密加入醋酸潑尼松對照品儲備溶液及茶堿對照品儲備溶液各5 mL,加甲醇適量,超聲處理20 min,放置至室溫,用甲醇定容至刻度,搖勻,濾過,作為回收率供試品溶液,按上述色譜條件測定,進(jìn)樣5 μL,計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 醋酸潑尼松和茶堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)
按供試品溶液制備方法及上述色譜條件操作并測定,進(jìn)樣10 μL,結(jié)果6批樣品均未檢查出醋酸潑尼松及茶堿。見圖1-2。

圖1 醋酸潑尼松高效液相色譜圖

圖2 茶堿高效液相色譜圖
由于現(xiàn)有常規(guī)藥品標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)時(shí)無法檢出中成藥中添加的醋酸潑尼松及茶堿,故在中成藥中擅自添加化學(xué)藥品具有極大的危害性和隱蔽性。本法可用于止咳平喘類中成藥中以醋酸潑尼松和茶堿為指標(biāo)的非法添加成分的檢測,對有效控制藥品質(zhì)量具有現(xiàn)實(shí)意義。
中藥成分較復(fù)雜,參照2005年版《中國藥典(二部)》的色譜條件[1]及相關(guān)資料[2-3],分別選用240 nm和275 nm作為醋酸潑尼松和茶堿的檢測波長,以甲醇-水為流動(dòng)相,通過反復(fù)調(diào)整流動(dòng)相比例,結(jié)果以甲醇-水(55∶45)為流動(dòng)相時(shí),醋酸潑尼松保留時(shí)間適中,能排除樣品中各成分的干擾,而茶堿保留時(shí)間較短,很多雜質(zhì)也在幾分中內(nèi)出峰,各峰無法分開。通過調(diào)整流動(dòng)相比例,適當(dāng)延長茶堿的出峰時(shí)間,以甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相時(shí),茶堿保留時(shí)間適中,能排除樣品中各成分的干擾,峰形對稱。
[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:616.
[2]陳 黎,張紅梅.順氣化痰片(氣管炎片)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào),2003,12(2):42-43.
[3]楊積平,裕海明.反相高效液相色譜法測定氨茶堿人體血藥濃度[J].安徽醫(yī)藥,2006,12(4):263 -264.