高效液相色譜法檢測止咳平喘類中成藥中非法添加的醋酸潑尼松、茶堿

孔衛東，周世玉

(四川省成都市食品藥品檢測中心，四川 成都 610045)

近年來發現市場上存在一些宣稱止咳、抗哮喘的純中藥制劑，其中非法添加了止咳平喘類和激素類化學藥，如醋酸潑尼松、茶堿等，如果患者不知情而長期、大量服用這些所謂的純中藥制劑，不僅延誤疾病的治療，且可能發生中毒甚至危及生命。醋酸潑尼松為腎上腺皮質激素，有抗炎與抗過敏作用，對咳嗽、哮喘等過敏性疾病有較明顯的效果，但盲目濫用該類藥物可能導致全身性過敏反應、多種代謝異常、兒童生長抑制、誘發青光眼、精神癥狀等。茶堿是甲基嘌呤類藥物，主要用于治療支氣管哮喘、肺氣腫、支氣管炎等癥，其藥理作用與血濃度有關，但有效血濃度安全范圍很窄，口服吸收不穩定，且個體差異很大，一次用量過大或反復用藥其作用積累，均有發生過量中毒的可能。因此，有必要建立準確、可靠、快速的分析方法，用于檢測止咳平喘類中藥制劑中非法添加的醋酸潑尼松、茶堿等化學藥品。

1 儀器與試藥

美國Waters2687型高效液相色譜儀，Waters2487檢測器，empower色譜數據工作站;AE－240型電子天平(瑞士梅特勒－托利多公司)。肺力咳合劑(貴陽建興藥業有限公司，批號為20081106);化痰平喘片(通化華辰藥業股份有限公司，批號為20080501);咳克片(江西民濟藥業有限公司，批號為070908);肺寧片(長春萬德制藥有限公司);得樂咳喘寧膠囊(成都得樂醫院制劑，批號為080721);咳克片(中山市恒山藥業有限公司，批號20080306)。醋酸潑尼松對照品(批號為10012－0105)、茶堿對照品(批號為 100121－199903)均由中國藥品生物制品檢定所提供。流動相中的甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑試藥均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Meritech C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－水;檢測波長:醋酸潑尼松240 nm，茶堿275 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:35℃。理論板數按醋酸潑尼松及茶堿計算均不低于10 000。

2.2 溶液制備

精密稱取醋酸潑尼松12.99 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，搖勻，作醋酸潑尼松對照品儲備溶液;精密稱取茶堿8.27 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，搖勻，作為茶堿對照品儲備溶液。根據醋酸潑尼松及茶堿的日服劑量換算，確定樣品取樣量，取肺力咳合劑50 mL，化痰平喘片3 g，咳克片2 g，肺寧片6 g，得樂咳喘寧膠囊3 g，固體制劑研碎，液體制劑蒸干，分置50 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20 min，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:吸取醋酸潑尼松對照品儲備溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作對照品溶液Ⅰ;吸取醋酸潑尼松對照品儲備溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作對照品溶液Ⅱ，吸取對照品溶液Ⅱ4，8，16，20 μL，對照品溶液Ⅰ5，10 μL，對照品儲備溶液 3 μL，注入液相色譜儀，以進樣質量對峰面積回歸，得醋酸潑尼松的線性回歸方程為Y=2 134 996.90X－17 351.86，r=0.999 9(n=7)。取茶堿對照品儲備溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作對照品溶液Ⅰ;取對照品儲備溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作對照品溶液Ⅱ，吸取對照品溶液Ⅱ4，8，15 μL，對照品溶液Ⅰ3，5，7，16 μL，對照品儲備溶液4 μL注入液相色譜儀，以進樣質量對峰面積回歸，得茶堿的線性回歸方程為Y=2 628 780X+15 622，r=0.999(n=7)。結果表明，醋酸潑尼松進樣量在 2.078 4 ×10－2～1.558 8 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系;茶堿進樣量在 1.323 2 ×10－2～1.323 2 μg 范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:分別吸取醋酸潑尼松及茶堿對照品溶液Ⅰ5 μL，注入液相色譜儀，連續進樣6次，按上述色譜條件測定。結果醋酸潑尼松和茶堿的峰面積RSD分別為0.94%和0.13%(n=6)，表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗:精密稱取不含醋酸潑尼松及茶堿的咳克片(江西濟民藥業有限公司，批號070908)作為空白樣品，精密稱取6份，置50 mL容量瓶中，分別精密加入醋酸潑尼松對照品儲備溶液及茶堿對照品儲備溶液各5 mL，加甲醇適量，超聲處理20 min，放置至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，作為回收率供試品溶液，按上述色譜條件測定，進樣5 μL，計算回收率。結果見表1。

表1 醋酸潑尼松和茶堿加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品檢測

按供試品溶液制備方法及上述色譜條件操作并測定，進樣10 μL，結果6批樣品均未檢查出醋酸潑尼松及茶堿。見圖1－2。

圖1 醋酸潑尼松高效液相色譜圖

圖2 茶堿高效液相色譜圖

3 討論

由于現有常規藥品標準檢驗時無法檢出中成藥中添加的醋酸潑尼松及茶堿，故在中成藥中擅自添加化學藥品具有極大的危害性和隱蔽性。本法可用于止咳平喘類中成藥中以醋酸潑尼松和茶堿為指標的非法添加成分的檢測，對有效控制藥品質量具有現實意義。

中藥成分較復雜，參照2005年版《中國藥典(二部)》的色譜條件[1]及相關資料[2－3]，分別選用240 nm和275 nm作為醋酸潑尼松和茶堿的檢測波長，以甲醇－水為流動相，通過反復調整流動相比例，結果以甲醇－水(55∶45)為流動相時，醋酸潑尼松保留時間適中，能排除樣品中各成分的干擾，而茶堿保留時間較短，很多雜質也在幾分中內出峰，各峰無法分開。通過調整流動相比例，適當延長茶堿的出峰時間，以甲醇－水(20∶80)為流動相時，茶堿保留時間適中，能排除樣品中各成分的干擾，峰形對稱。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業出版社，2005:616.

[2]陳 黎，張紅梅.順氣化痰片(氣管炎片)質量標準研究[J].江蘇大學學報，2003，12(2):42－43.

[3]楊積平，裕海明.反相高效液相色譜法測定氨茶堿人體血藥濃度[J].安徽醫藥，2006，12(4):263 －264.