高效液相色譜法檢測止咳平喘類中成藥中非法添加的醋酸潑尼松、茶堿

孔衛(wèi)東，周世玉

(四川省成都市食品藥品檢測中心，四川 成都 610045)

近年來發(fā)現(xiàn)市場上存在一些宣稱止咳、抗哮喘的純中藥制劑，其中非法添加了止咳平喘類和激素類化學(xué)藥，如醋酸潑尼松、茶堿等，如果患者不知情而長期、大量服用這些所謂的純中藥制劑，不僅延誤疾病的治療，且可能發(fā)生中毒甚至危及生命。醋酸潑尼松為腎上腺皮質(zhì)激素，有抗炎與抗過敏作用，對咳嗽、哮喘等過敏性疾病有較明顯的效果，但盲目濫用該類藥物可能導(dǎo)致全身性過敏反應(yīng)、多種代謝異常、兒童生長抑制、誘發(fā)青光眼、精神癥狀等。茶堿是甲基嘌呤類藥物，主要用于治療支氣管哮喘、肺氣腫、支氣管炎等癥，其藥理作用與血濃度有關(guān)，但有效血濃度安全范圍很窄，口服吸收不穩(wěn)定，且個(gè)體差異很大，一次用量過大或反復(fù)用藥其作用積累，均有發(fā)生過量中毒的可能。因此，有必要建立準(zhǔn)確、可靠、快速的分析方法，用于檢測止咳平喘類中藥制劑中非法添加的醋酸潑尼松、茶堿等化學(xué)藥品。

1 儀器與試藥

美國Waters2687型高效液相色譜儀，Waters2487檢測器，empower色譜數(shù)據(jù)工作站;AE－240型電子天平(瑞士梅特勒－托利多公司)。肺力咳合劑(貴陽建興藥業(yè)有限公司，批號為20081106);化痰平喘片(通化華辰藥業(yè)股份有限公司，批號為20080501);咳克片(江西民濟(jì)藥業(yè)有限公司，批號為070908);肺寧片(長春萬德制藥有限公司);得樂咳喘寧膠囊(成都得樂醫(yī)院制劑，批號為080721);咳克片(中山市恒山藥業(yè)有限公司，批號20080306)。醋酸潑尼松對照品(批號為10012－0105)、茶堿對照品(批號為 100121－199903)均由中國藥品生物制品檢定所提供。流動(dòng)相中的甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑試藥均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Meritech C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－水;檢測波長:醋酸潑尼松240 nm，茶堿275 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:35℃。理論板數(shù)按醋酸潑尼松及茶堿計(jì)算均不低于10 000。

2.2 溶液制備

精密稱取醋酸潑尼松12.99 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，搖勻，作醋酸潑尼松對照品儲備溶液;精密稱取茶堿8.27 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，搖勻，作為茶堿對照品儲備溶液。根據(jù)醋酸潑尼松及茶堿的日服劑量換算，確定樣品取樣量，取肺力咳合劑50 mL，化痰平喘片3 g，咳克片2 g，肺寧片6 g，得樂咳喘寧膠囊3 g，固體制劑研碎，液體制劑蒸干，分置50 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20 min，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:吸取醋酸潑尼松對照品儲備溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作對照品溶液Ⅰ;吸取醋酸潑尼松對照品儲備溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作對照品溶液Ⅱ，吸取對照品溶液Ⅱ4，8，16，20 μL，對照品溶液Ⅰ5，10 μL，對照品儲備溶液 3 μL，注入液相色譜儀，以進(jìn)樣質(zhì)量對峰面積回歸，得醋酸潑尼松的線性回歸方程為Y=2 134 996.90X－17 351.86，r=0.999 9(n=7)。取茶堿對照品儲備溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作對照品溶液Ⅰ;取對照品儲備溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作對照品溶液Ⅱ，吸取對照品溶液Ⅱ4，8，15 μL，對照品溶液Ⅰ3，5，7，16 μL，對照品儲備溶液4 μL注入液相色譜儀，以進(jìn)樣質(zhì)量對峰面積回歸，得茶堿的線性回歸方程為Y=2 628 780X+15 622，r=0.999(n=7)。結(jié)果表明，醋酸潑尼松進(jìn)樣量在 2.078 4 ×10－2～1.558 8 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系;茶堿進(jìn)樣量在 1.323 2 ×10－2～1.323 2 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):分別吸取醋酸潑尼松及茶堿對照品溶液Ⅰ5 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測定。結(jié)果醋酸潑尼松和茶堿的峰面積RSD分別為0.94%和0.13%(n=6)，表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取不含醋酸潑尼松及茶堿的咳克片(江西濟(jì)民藥業(yè)有限公司，批號070908)作為空白樣品，精密稱取6份，置50 mL容量瓶中，分別精密加入醋酸潑尼松對照品儲備溶液及茶堿對照品儲備溶液各5 mL，加甲醇適量，超聲處理20 min，放置至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，作為回收率供試品溶液，按上述色譜條件測定，進(jìn)樣5 μL，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 醋酸潑尼松和茶堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品檢測

按供試品溶液制備方法及上述色譜條件操作并測定，進(jìn)樣10 μL，結(jié)果6批樣品均未檢查出醋酸潑尼松及茶堿。見圖1－2。

圖1 醋酸潑尼松高效液相色譜圖

圖2 茶堿高效液相色譜圖

3 討論

由于現(xiàn)有常規(guī)藥品標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)時(shí)無法檢出中成藥中添加的醋酸潑尼松及茶堿，故在中成藥中擅自添加化學(xué)藥品具有極大的危害性和隱蔽性。本法可用于止咳平喘類中成藥中以醋酸潑尼松和茶堿為指標(biāo)的非法添加成分的檢測，對有效控制藥品質(zhì)量具有現(xiàn)實(shí)意義。

中藥成分較復(fù)雜，參照2005年版《中國藥典(二部)》的色譜條件[1]及相關(guān)資料[2－3]，分別選用240 nm和275 nm作為醋酸潑尼松和茶堿的檢測波長，以甲醇－水為流動(dòng)相，通過反復(fù)調(diào)整流動(dòng)相比例，結(jié)果以甲醇－水(55∶45)為流動(dòng)相時(shí)，醋酸潑尼松保留時(shí)間適中，能排除樣品中各成分的干擾，而茶堿保留時(shí)間較短，很多雜質(zhì)也在幾分中內(nèi)出峰，各峰無法分開。通過調(diào)整流動(dòng)相比例，適當(dāng)延長茶堿的出峰時(shí)間，以甲醇－水(20∶80)為流動(dòng)相時(shí)，茶堿保留時(shí)間適中，能排除樣品中各成分的干擾，峰形對稱。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:616.

[2]陳 黎，張紅梅.順氣化痰片(氣管炎片)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，12(2):42－43.

[3]楊積平，裕海明.反相高效液相色譜法測定氨茶堿人體血藥濃度[J].安徽醫(yī)藥，2006，12(4):263 －264.