阿爾茨海默病患者腦脊液α-突觸核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L 水平變化及意義

劉曉蘭，陸連第，陳子祥

(天津市海河醫院，天津 300350)

阿爾茨海默病(AD)是進行性發展的致死性神經退行性病變，65歲以上人群發病率為6.6%，并且每增加5歲，患病率增加一倍以上 。AD患者記憶、認知功能的減退給個人、家庭及社會帶來了沉重的痛苦和負擔。AD患者的臨床表現往往與血管性癡呆(VD)的癥狀相互疊加，臨床上很難獲得確診。本研究檢測了阿爾茨海默病(AD)患者腦脊液α-突觸核蛋白、β-淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)、總牛磺酸(T-tau)、磷酸化牛磺酸(P-tau)、輕鏈蛋白(NF-L)水平變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2007年1月～2011年12月我院收治的AD患者43例(AD組)，男27例，女16例;年齡(64.3±7.7)歲;依據美國精神疾病診斷與統計手冊(第三版)的標準診斷;MMSE量表評分(7.4 ±5.4)分;病程(40.2 ±14.3)d;并發神經系統疾病3例，高血壓23例，心臟病16例。VD 51例(VD 組)，男28例，女23 例;年齡(66.4 ±6.8)歲;MMSE 量表評分(7.9 ±6.0)分;病程(50.2 ±18.4)d;并發神經系統疾病4例，高血壓29例，心臟病17例。另選30例體檢者作為對照組，男17例，女13例;年齡(63.4 ±6.5)歲;MMSE 量表評分(17.8 ±2.7)分;合并高血壓10例，心臟病8例。

1.2 腦脊液 α-突觸核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L檢測 本組所有腦脊液標本均在患者入院后3 d內采集，標本采集后，在30 min內，4℃離心2000 r/min，15 min，取上清液，棄去下層沉淀。采用ELISA試劑法檢測腦脊液中上述蛋白的水平，室溫下預測樣品含量，對濃度過高的樣本進行稀釋，加樣完成后30℃反應120 min。棄去液體，甩干，每孔加檢測溶液A 100 μL，37℃反應60 min。溫育60 min后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1～2 min，大約 400 μL/每孔，甩干;再加入檢測溶液B，溫育60 min后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1 ～2 min，350 μL/每孔，甩干，依序每孔加底物溶液90 μL，酶標板加上覆膜37℃避光顯色。每孔加終止溶液50 μL，終止反應，用酶聯儀在450 nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。以標準物的濃度為縱坐標(對數坐標)，OD值為橫坐標(對數坐標)，在對數坐標紙上繪出標準曲線。應用curve expert1.3進行計算出樣本含量的最終濃度。

1.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。計量資料以表示，組內、組間比較采用t檢驗，計數資料用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 腦脊液 α-突觸核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L水平比較 見表1。

2.2 α-突觸核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L 聯合應用鑒別AD和VD的靈敏度、特異度 α-突觸核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L聯合應用可以將AD與VD區分開來，靈敏度93%(95%CI為0.84～0.95)，特異度 88%(95%CI為 0.67 ～0.91)。

表1 腦脊液 α-突觸核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L 水平比較(ng/mL，)

表1 腦脊液 α-突觸核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L 水平比較(ng/mL，)

注:與對照組比較，*P ＜0.05;與 VD組比較，△P ＜0.05

組別 α-突觸核蛋白 Aβ1-42 T-tau P-tau T-tau/P-tau NF-L AD 組 94.7 ±17.9* 355.8 ± 89.2＊△ 844.1 ±199.6＊△ 102.3 ±12.3* 12.3 ±0.3△ 1998.4 ±387.5*VD 組 75.3 ±17.3* 523.4 ±100.3 602.5 ±150.3* 125.6 ±11.7* 20.8 ±3.2* 2247.8 ±386.4*對照組 66.8 ±12.3 643.4 ±123.1 473.4 ±148.2 49.2 ±10.4 10.3 ±1.1 840.3 ±200.3

3 討論

目前，尚未建立統一公認的腦脊液或血清生物標記物診斷早期AD的體系和標準，而對于腦脊液生物標記物在AD患者中的診斷價值，目前也存較多的爭論。α-突觸核蛋白是Lewy體的重要組成成分，是一種中樞神經系統突觸前表達的可溶性蛋白質，其基因定位于第4號染色體，被認為與帕金森病的發病密切相關。而近年來，其在AD患者中的表達變化也逐步被重視。Mollenhauer等報道，α-突觸核蛋白在AD患者腦脊液呈明顯的升高趨勢，但是對于診斷AD而言，缺乏足夠的敏感性和特異性。很多學者同樣認為盡管α-突觸核蛋白在AD患者腦脊液中有一定的升高，但是在VD患者的腦脊液中同樣升高，因此單純依靠α-突觸核蛋白的變化，并不能將VD和AD區分開來［1～3］。本研究 AD組和VD組腦脊液α-突觸核蛋白水平均較對照組升高，但兩者間比較無差異，以上結果表明α-突觸核蛋白升高，提示患者有VD或者AD的可能，但是單純通過α-突觸核蛋白的表達水平的高低卻并不能將兩者區分開來。

Aβ1-42、T-tau、P-tau在 AD 患者腦脊液中的水平變化研究較多，多數學者認為AD的主要病理特征為細胞外老年斑和細胞內神經元纖維纏結。患者腦脊液tau蛋白升高、Aβ1-42降低。近年來，有學者提出腦脊液tau蛋白、Aβ1-42與癡呆嚴重程度有關，但是并無直接的證據證明這一論點。Strozyk等［4］對17例AD患者3 a隨訪結果顯示，腦脊液Aβ1-42、Aβ1-40的水平顯著降低，且病程＜2 a的患者比病程＞2 a的患者下降更顯著。王海紅等［5］認為，AD的嚴重程度與血漿腦脊液中的Aβ1-42、T-tau、P-tau的水平具有較為明確的相關性。孟然等［6］報道了胼胝體面積測量同時配合腦脊液P-tau蛋白和Aβ1-42水平的測定，不僅對確診早期AD有幫助，而且能反映AD的病程變化。AD組腦脊液T-tau、P-tau、T-tau/P-tau水平較對照組升高，Aβ1-42水平較對照組降低;VD組腦脊液 T-tau、P-tau、T-tau/P-tau較對照組升高;AD組腦脊液 Aβ1-42、T-tau、T-tau/P-tau水平較VD組升高。這與文獻報道一致，通過聯合檢測 Aβ1-42、T-tau、T-tau/P-tau水平可以更有效的鑒別AD與VD，提高鑒別的準確度和敏感性。

NF-L被認為是軸索損傷的標志物，一度被認為對多發性硬化的診斷具有非常重要的意義，并且其水平與預后直接相關，而其在AD中的研究相對較少［7］。本研究AD組和VD組腦脊液NF-L水平均較對照組升高，但兩者比較無差異，因此一定程度上認為，NF-L的水平變化并不能反應AD與VD的區別。

事實上，無論 α-突觸核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau及NF-L，其作為單獨的診斷標記來區分AD與VD或其他疾病的敏感性及準確度都非常低，特別是加入年齡、健康狀況、關節炎及腫瘤等因素，更易使診斷出現偏差。Constantinescu等［8］報道 α-突觸核蛋白作為單獨的標記物來區分AD和VD的準確度為71%，敏感度67%;而Reesink則發現，聯合應用Aβ1-42、T-tau、診斷 AD的準確性83%，敏感度85%。聯合5個指標區分AD和VD的靈敏度為93%、特異度為88%，明顯的高于單個指標，因此聯合上述5個指標來鑒別AD與VD具有非常重要的臨床意義。

總之，α-突觸核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L在AD中表達升高或降低，聯合檢測五種指標有可能早期診斷AD及鑒別VD。

［1］張平，劉康永，蔡增林，等.α-突觸核蛋白及其在帕金森病發病中的可能機制［J］.中國臨床神經科學，2008，16(5):556-558.

［2］李毅，張忠興，呂路線，等.阿爾茨海默病與血管性癡呆患者腦脊液tau蛋白及β-淀粉樣蛋白(1-42)濃度的對照性研究［J］.中華神經科雜志，2004，37(4):221-224.

［3］薛海波，肖世福，孫云，等.腦脊液生物學標志物診斷阿爾茨海默病與血管性癡呆［J］.中國現代神經疾病雜志，2007，7(3):257-261.

［4］Strozyk D，Blennow K，White LR，et al.CSF Aβ42 levels correlate with amyloid-neuropat hology in a population-based autopsy study［J］.Neurology，2003，60(4):652-656.

［5］王海紅，李冠軍，李霞，等.阿爾茨海默病與血管性癡呆患者腦脊液β淀粉樣蛋白1-42、β-淀粉樣蛋白1-40［J］.內科理論與實踐，2009，4(4):305-307.

［6］孟然，陳楠，賈建平，等.矢狀軸位胼胝體面積測量與腦脊液ptau蛋白和Aβ1-42水平對阿爾茨海默病早期診斷的價值［J］.中華神經外科雜志，2007，19(1):23-26.

［7］張艷，李翔，喬建，等.神經絲蛋白輕鏈與多發性硬化的相關性研究［J］.中華醫學雜志，2007，87(39):2745-2749.

［8］Constantinescu R，Zetterberg H，Holmberg B，et al.Levels of brain related proteins in cerebrospinal fluid:an aid in the differential diagnosis of parkinsonian disorders［J］.Parkinsonism Relat Disord，2009，15(3):205-212.