黃芪總苷注射液人體耐受性Ⅰ期臨床試驗

陳光宇 丁紅 劉永家 王若竹 張亞玲

黃芪總苷注射液系成都地奧九泓制藥廠申報的中藥第7類新藥，擬用于心氣虛損、氣虛血瘀之病毒性心肌炎的治療。在完成該品種的制劑、質量控制、藥理、毒理等研究后。根據國家食品藥品監督管理局《新藥臨床研究批件》(2004L03002)的要求，由成都中醫藥大學附屬醫院國家藥物臨床試驗機構負責于2004年11月至2005年1月進行黃芪總苷注射液的Ⅰ期臨床試驗—人體耐受性試驗。試驗按照《藥品注冊管理辦法》［1］、《藥物臨床試驗質量管理規范》［2］、《中藥新藥臨床研究的技術要求》［3］及黃芪總苷注射液的處方組成、功能主治、藥效學、毒理學研究資料進行，現將試驗結果報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象

受試者均為健康志愿者。各組受試者用藥前性別相當，年齡、身高、體重等人口統計學資料相近，無重要既往病史和藥物過敏史，體溫、心率、呼吸、血壓、脈搏等生命體征均在正常范圍，各實驗室檢查結果無具有臨床意義的異常。

1.1.1 入選標準 (1)健康志愿者。(2)年齡18～40歲，男女各半。(3)體重指數18.5～23［體重指數=體重(kg)/身高(m)2］。(4)體格檢查(體溫、脈率、心率、心律、呼吸、血壓，臨床癥狀和體征，眼科檢查，神經系統檢查)。(5)正常者實驗室檢查(全血細胞分析、尿常規、大便常規含隱血、血電解質、血脂、空腹血糖、總膽紅素、直接膽紅素、丙氨酸氨基轉換酶、門冬氨酸氨基轉移酶、白球蛋白比、尿素氮、肌酐、乙肝標志物在正常范圍內者;(6)心電圖、胸部X光透視、肝、膽、脾、胰B型超聲各項指標均在正常范圍者。(7)皮膚劃痕試驗陰性者。(8)對試驗目的、黃芪總苷注射液的主要藥理作用、可能發生的不良反應及受試者的權益等有所了解，自愿參加本試驗并簽署知情同意書者。

1.1.2 排除標準 (1)經常用藥、嗜煙酒者。(2)具有原發性心血管病變、肝臟病變、腎臟病變、血液病、肺臟疾病者。(3)精神或法律上的殘疾者。(4)過敏體質，有藥物、食物過敏史或已知對本藥組成成分過敏者。(5)近3個月內參加過其它藥物臨床試驗，或近3個月內用過已知對某臟器有損害的藥物。(6)近1年內患過重病，正在使用其他預防或治療藥物者。(7)月經期、妊娠期及哺乳期婦女。

1.1.3 剔除標準 對已被選入本臨床研究，屬于以下情況之一者，作為剔除病例。(1)入組后發現不符合納入標準，或符合排除標準者。(2)一次藥未用者。(3)無任何記錄者。

1.1.4 終止試驗標準 在劑量遞增過程中出現了嚴重不良反應，雖未達到最大劑量，亦應終止試驗。如半數受試者出現輕度不良反應，應終止試驗。在達到最大劑量時，雖未出現不良反應，亦應終止試驗。

1.1.5 退出標準 (1)受試者依從性差，不能按時按量用藥。(2)使用其他影響耐受性判斷的藥物。(3)受試者不愿意繼續進行臨床試驗，向主管醫生提出退出者。

1.2 研究藥物

試驗藥品:黃芪總苷注射液，由成都地奧九泓制藥廠提供，生產批號:040911，規格:100ml/瓶。

1.3 單次給藥耐受性試驗

1.3.1 初試劑量確定 根據改良Blachwell法計算。急性毒性試驗資料:小鼠單次尾靜脈注射半數致死量(LD50)為184.2g(生藥)/kg，大鼠LD50為183.2g(生藥)/kg;其1/600分別為0.307、0.305g(生藥)/kg:按成人60kg計，預計初試劑量分別為18.42g生藥、18.3g生藥，相當于注射液36.84ml、36.6ml。長期毒性試驗資料:犬長毒試驗出現毒性的劑量為13.2g(生藥)/kg，其1/60為0.22g(生藥)/kg生藥，按成人60kg計，預計初試劑量為13.2g生藥，相當于注射液26.4ml。根據以上計算結果，結合臨床可操作性，確定本試驗的初試劑量為25ml/次。

1.3.2 最大劑量確定 根據犬長毒試驗出現中毒癥狀的最小劑量13.2g/kg的1/10計算，60kg體重成人的最大劑量為79.2g生藥，相當于注射液158.4ml。根據犬長毒試驗資料，長期無毒劑量或安全劑量為6.24g/kg，其1/5～1/2分別為1.248～3.12g/kg，成人體重按照60kg計，最大劑量為74.88～187.2g生藥，相當于黃芪總苷注射液149.76～374.4ml，考慮到受試者的安全，結合臨床情況，擬定最大劑量為250ml/日/人。

1.3.3 劑量遞增方案 參照費氏遞增法(改良Fibonacci法)遞增，見表1。

表1 劑量遞增方案

1.3.4 試驗例數 32例，男女各半。

1.3.5 分組方法 在試驗開始前，預篩出32例符合入選標準的合格健康志愿受試者，按男性和女性分別根據體重編碼排序隨機分配至各劑量組。每個受試者只接受一個相應的劑量。

1.3.6 給藥方法 25～250ml/人，靜脈滴注，滴速20～30滴/分鐘。

1.3.7 觀察指標 受試者篩選指標:同入選標準(見1.1)。安全性觀察指標:為篩選指標中除乙肝標志物、胸部X光透視、B型超聲以外的所有指標;不良反應觀察:仔細觀察、記錄試驗過程中的不良事件，認真分析不良事件與試驗藥物的因果關系。在試驗中出現的任何異常癥狀、體征、實驗室檢查結果、或其他特殊檢查結果都應隨訪。

1.3.8 試驗方法與觀察時點 每次只試驗一個劑量組，間隔1天或以上進行下一組試驗，不可同時進行兩個以上劑量組的試驗。每個受試者只接受一個相應的劑量。從小劑量開始，每個劑量應用后未見明顯不良反應，才可進行下一劑量組的試驗。出現較重不良反應時或如半數受試者出現輕度不良反應，即使未達到最大劑量，均應停止試驗。

32例合格健康志愿受試者的預篩、分組工作完成后，每個劑量組試驗前24～48小時完成該組受試者病例登記、體格檢查、眼科檢查、神經科檢查、實驗室檢查、心電圖檢查、乙肝標志物檢查、B型超聲檢查及胸部X光透視等各項指標檢查。

在開始給藥即刻觀察臨床癥狀，給藥后0.5小時、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、12小時、24小時觀察記錄一般情況、眼科檢查、神經、循環、呼吸、泌尿、消化等系統及皮膚粘膜的臨床癥狀和體征，并于給藥后第24小時進行心電圖檢查和實驗室檢查，其檢查內容為安全性觀察指標檢查(見1.3.7);并在給藥后48小時、72小時分別觀察臨床癥狀。試驗期間如出現不良反應者，應進行心電監護。

試驗期間，受試者不得離開Ⅰ期臨床試驗病房，其飲食由醫院膳食科統一配置清淡飲食。

1.4 連續給藥耐受性試驗

共12名受試者，按男性和女性分別根據體重編碼排序被隨機分為甲、乙兩組，每組各6人，男女各半。劑量:甲組:劑量根據單次給藥耐受性試驗結果分析后與根據經驗預測的Ⅱ期臨床試驗的劑量相同，100ml/次;乙組:劑量根據單次給藥結果分析后確定為200ml/次，靜脈滴注，滴速20～30滴/分，每天1次。療程:10天。觀察指標:與單次給藥耐受性試驗相同。

試驗方法及觀察時點試驗前受試者的預篩同單次給藥耐受性試驗。觀察時點為給藥前、給藥后每日及停藥后24小時觀察一般情況、臨床癥狀、體征、眼科檢查及神經科檢查，給藥后第24小時、72小時(第4天)、第7天以及第11天(即停藥后24小時)還應進行實驗室檢查及心電圖檢查，檢查內容為安全性觀察指標檢查內容(見1.3.7)。用藥后第0小時(即刻)開始在整個試驗期間觀察臨床癥狀，若出現與中毒有關的癥狀，應立即進行各項相關檢查。對試驗中出現反應的患者應追蹤觀察到恢復正常后一月;無反應者追蹤觀察到停藥后一月。飲食要求同單次給藥的耐受性試驗。整個試驗期間，受試者在Ⅰ期臨床試驗病房住院觀察。

2 結果

2.1 單次給藥的耐受性試驗

本次試驗實際觀察受試者32例。用藥后受試者體溫、心率、呼吸、血壓、脈搏等生命體征均在正常范圍，用藥后心電圖檢查未見與藥物有關的有臨床意義的異常改變。

150ml組有1例出現球蛋白輕度升高，未進行處理，與藥物的關系無法判定;200ml組有1例出現白細胞減少，4天后恢復正常，未進行處理，與藥物的關系無法判定;250ml組有1例出現皮疹，經皮膚科會診后診斷為蟲咬性皮炎，用藥后消失，考慮與試驗藥物無關。

2.2 連續給藥耐受性試驗

本次試驗實際觀察受試者12例。按實驗方案規定的時點，對兩組受試者進行系統的問診和體格檢查，結果表明，用藥后受試者體溫、心率、呼吸、血壓、脈搏等生命體征均在正常范圍，用藥后心電圖檢查未出現與藥物有關的具有臨床意義的異常改變。

兩組各有1例出現咽痛等癥狀，診斷為上呼吸道感染，200ml組1例解2次稀便，均未作處置，未影響試驗用藥，考慮與試驗藥物可能無關。與試驗藥物有關或無法判定的不良事件見表2，其中不良事件絕大多數程度輕，均未進行相關處置，在繼續用藥的情況下，復查最終均恢復正常，說明以上事件可能為輕微的不良反應或不能確定為不良反應。

2.3 黃芪總苷注射液靜脈滴注的安全劑量

單次給藥耐受性試驗7個劑量組實驗結果，25ml、50ml、75ml、100ml和 250ml劑量組未出現與試驗藥物有關的不良反應，150ml和200ml劑量組各有1例不良事件，與試驗藥物的關系無法判定。未出現較重不良反應或半數受試者出現輕度不良反應，故I期耐受性臨床試驗單次給藥安全劑量最大為250ml。

表2 連續給藥不良事件

連續給藥耐受性試驗2個劑量組實驗結果，每個劑量組各有2例出現與試驗藥物可能有關的輕度不良反應，均未進行任何處置，且未影響繼續輸入試驗藥物，均恢復正常。其中3例為出現癥狀和體征，1例為實驗室指標異常，為100ml劑量組有1例甘油三酯中度升高，丙氨酸氨基轉換酶輕度升高，但仍在未減量，未停用試驗藥物的情況下測值下降，最后復查恢復正常，與試驗藥物的關系無法判定或可能有關，該現象在200ml組中并未出現，故200ml可作為安全劑量。故I期耐受性臨床試驗連續給藥安全劑量最大為200ml。

3 討論

新藥的I期耐受性臨床試驗是通過選擇健康志愿者作為受試者，對藥物的安全性和耐受性進行初步評價的人體藥物試驗，為制定該藥的Ⅱ期臨床試驗給藥方案提供依據。該試驗藥物的適應癥為病毒性心肌炎，病毒性心肌炎的病機特點主要為虛實夾雜，而以虛為主［4］。莫曉飛等［5］通過對 6853 篇文獻研究得出，使用頻率較高的45味中藥主要為補虛藥，黃芪排第3位。周亞濱等［6］對該病的研究進展分析，在治療上要從整體上提高或調整免疫功能，清除或防止病毒感染，減輕病毒對心肌的損害。單位中藥首先是黃芪。黃芪具有抗病毒、調節機體免疫、抗氧化、抑制鈣超載、增加心肌收縮力及恢復心功能等作用，對病毒性心肌炎有很好的預防和治療效果［7］。古平等［8］通過對小鼠柯薩奇B3病毒性心肌炎的實驗研究證明黃芪總苷對小鼠病毒性心肌炎有良好的治療作用，且有明顯的量效關。本次試驗的黃芪總苷注射液是由黃芪根中提取的總皂苷與氯化鈉制成的滅菌水溶液。根據臨床前主要藥效學試驗結果得出該藥具有扶正祛邪、益氣養元、養心通脈的功能，臨床擬用于心氣虛損、氣虛血瘀之病毒性心肌炎，癥見胸悶、心前區隱痛、心悸、頭暈、氣短、乏力、脈沉弱、細澀或結代者。

根據Ⅰ期臨床人體耐受性試驗結果，推薦黃芪總苷注射液Ⅱ期臨床試驗的劑量為100～200ml/次，每天一次，靜脈滴注。

本次人體耐受性試驗單次和連續給藥各劑量組無較重的不良反應或同一組超過半數的輕度不良反應，僅見輕微頭痛、頭昏、惡心，腹痛稀便，腓腸肌疼痛等癥狀，出現球蛋白升高、甘油三酯和丙氨酸氨基轉換酶升高、白細胞減少、血清鈣降低各1例，健康人體對黃芪總苷注射液耐受性較好，臨床應用較安全。在黃芪總苷注射液進一步的Ⅱ期、Ⅲ期臨床試驗的有效性和安全性評價中，應重點關注黃芪總苷注射液可能出現的頭痛、頭昏、惡心、腹痛、稀便、腓腸肌疼痛等癥狀的觀察和球蛋白、甘油三酯、丙氨酸氨基轉換酶和白細胞、血清鈣降的監測。

［1］國家藥品監督管理局.藥品注冊管理辦法(試行)［EB/OL］.(2002-10-31)［2013-7-29］.http://www.sda.gov.cn/WS01/CL0053/24478.html.

［2］國家食品藥品監督管理局.藥品臨床試驗管理規范［EB/OL］.(1999-09-01)［2013-7-29］.http://www.csco.org.cn/gcp/class/zhn002.html.

［3］國家藥品監督管理局.中藥新藥臨床研究的技術要求.1999-11-12.

［4］吳美芳，張軍平，呂仕超.病毒性心肌炎中醫病因病機研究概況［J］.中國中醫藥信息雜志，2011，18(8):108-109.

［5］莫曉飛，韓麗華，王振濤，等.病毒性心肌炎中醫用藥規律文獻研究［J］.中醫雜志，2013，54(5):424-426.

［6］周亞濱，翟文姬，陳會君，等.病毒性心肌炎的中醫治療進展［J］.中醫臨床研究，2013，(3):121-122.

［7］趙海.淺談黃芪抗病毒性心肌炎的作用機制［J］.科技咨詢，2007，(25):214.

［8］古平，何民.黃芪總苷治療小鼠柯薩奇B3病毒性心肌炎的實驗研究［J］.西南國防醫藥，2007，17(3):281-284