枳術健胃顆粒的制備及 HPLC法測定辛弗林的含量

蘇 瑾,田麗華,金 言

(佳木斯大學藥學院 黑龍江省生物藥制劑重點實驗室,黑龍江 佳木斯 154007)

功能性消化不良(functional dyspesia,FD),是指具有腹痛、腹脹、早飽、噯氣、食欲不振、惡心嘔吐等不適,經檢查排除引起這些癥狀的器質疾病的一組臨床綜合。其病因和發病機制至今尚未清楚,一般認為,傳統中藥在治療 FD方面具有獨特優勢[1]。枳實是常用的理氣藥,《中國藥典》(2010年版)收載的枳實來源于蕓香科植物酸橙 Citrus aurantium或甜橙 C.sinensis osbeck的幼果,具有破氣、散痞、瀉痰、消積的功效 ,主要用于胸腹脹滿、胸痹、痞痛、水腫、食積、便秘、胃下垂、子宮下垂、脫肛等[2]。“枳術健胃顆粒”是由古方“枳實消痞湯”變化而來,其為常用消食強胃經典方,以其組成以枳實和白術命名。《脾胃論》注明該方可“治痞,消食,強胃”,還創立了一系列的變化方,對于飲食所傷而致的它證,亦可靈活使用枳術丸[3～5]。本課題選擇將其制成顆粒劑,既保持了湯劑作用迅速的特點,又克服了臨用時煎煮不便的缺點,且味道可口、體積小,服用、貯藏及攜帶均較方便,采用 HPLC法控制君藥枳實中辛弗林含量,為該制劑的制備、質量控制及應用提供了可靠依據,從而為開發治療功能性消化不良的中藥復方制劑進行了初步探索。

1 實驗材料

1.1 藥品與試劑

辛弗林對照品(批號 120936-200804,含量測定用 ),中國藥品生物制品檢定所;枳實藥材(購于佳木斯市大仁堂醫藥公司,經生藥學方法鑒定為正品);其他試劑均符合規定。

1.2 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀,美國 Agilent公司;Olympus顯微成像系統 ,U-CM AD3型,日本;R系列旋轉蒸發儀,上海申生科技有限公司;FA2004N型電子分析天平,上海恒平科技儀器有限公司。

2 實驗方法

2.1 L9(34)正交實驗法篩選提取工藝

取枳實等藥材,粉碎后過80目篩,按處方比例稱取,以乙醇的濃度、溫度、超聲時間、提取次數為考察對象,每個因素擬定3個水平,選用 L9(34)正交表,見表1。

表1 試驗因素水平表

2.2 處方設計

根據工藝和提取率要求,輔料用量以40%為宜,考慮輔料與干粉混合后的吸濕性和流動性,以及輔料與干粉混勻后制成顆粒的吸濕性、成型性、溶解性等因素選擇輔料[6]。

2.3 枳實健胃顆粒中辛弗林的含量測定[7～9]

2.3.1 色譜條件

用 Aglient 1100 Series高效液相色譜儀 (含四元泵 ,自動進樣器,紫外檢測器,柱溫箱),采用 Zobax-C18柱(4.6mm×200mm)色譜柱,以甲醇-水(0.02%磷酸及0.1%十二烷基磺酸鈉 )(55:45)為流動相 ,流速為 1.0mL/min,檢測波長為224nm,柱溫:室溫 ,進樣量 10μL。

2.3.2 對照品溶液的制備

精密稱定以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥的辛弗林對照品3mg,加甲醇適量,制成每1mL含辛弗林3μg的對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備

取枳實健胃顆粒一次計量 10g,精密稱定,精密加入55%的乙醇 25mL,45℃回流提取三次 ,每次 0.5h,合并提取液 ,減壓回收乙醇。真空烘干,殘渣用甲醇溶解,定量轉移至100mL的量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻 ,即得[10,11]。

2.3.4 系統適應性實驗

取缺少枳實的陰性供試品,按照供試品溶液的制備方法制備成陰性對照品溶液。分別取對照品溶液,供試品溶液與陰性對照溶液按“2.3.1”相下所述色譜條件進樣測定。

2.3.5 線性關系的考察及方法學研究

精密稱取干燥至恒重的辛弗林對照品0.003g,于50mL容量瓶中,加甲醇溶解配制成含辛弗林為0.06mg/mL的對照品溶液,即為辛弗林對照品的貯備液。分別精密吸取4,8,10,14,16μL注入液相色譜儀中,按“2.3.1”述色譜條件測定峰面積,以峰面積 Y對進樣量 X(mL)進行線性回歸,得出辛弗林含量的回歸方程。

精密度試驗 同一批號的樣品5份,照“2.3.3”項下的方法制備供試品,依次進樣,測定辛弗林峰面積。

穩定性試驗取同一供試品溶液于0,2,4,6,8,10h進樣,測定辛弗林含量的峰面積。結果表明顆粒質量在24h內穩定。

重復性試驗精密吸取同一供試品溶液按上述條件測定5次,比較測定結果,測得辛弗林。

回收率試驗取已知含量的樣品5份,分別精密加入辛弗林對照品,按“2.3.3”供試品溶液制備,“2.2.1”色譜條件進行含量測定,計算平均回收率98.9%,RSD2.9%。

2.3.6 樣品測定

取不同批號的供試品 3批,按“2.3.3”項下供試品溶液制備方法提取制成供試品溶液,分別精密吸取供試品溶液10 μL,對照品溶液10μL注入高效液相色譜儀 ,測定峰面積,計算樣品中辛弗林含量。

3 實驗結果

3.1 正交試驗優化制備工藝

見表 2～3。

表2 正交試驗結果

6 2 1 2 3 6.86 7 3 1 3 2 7.32 8 3 3 2 1 5.01 9 3 2 1 3 7.07 I 21.42 18.81 18.27 II 22.62 21.10 21.89 63.44 III 19.40 23.53 23.28 R 1.0733 1.5733 1.6700 477.1815 SS 1.7654 3.7142 4.4596

表3 方差分析結果

經統計分析,篩選出以實驗3為最佳工藝提取有效成分,即用55%乙醇在45℃下超聲30min提取 3次。

3.2 處方及制備工藝

選用乳糖、糊精為輔料,按照處方比例稱取枳實、厚樸、半夏、白術、干姜、黨參、茯苓,用 55%乙醇浸泡 ,45℃超聲30min后,用紗布過濾,將藥渣重復超聲及過濾,合并 3次濾液。真空減壓濃縮至干膏,再將干膏粉碎過80目篩,按干膏粉：蔗糖：糊精(6：3：1)比例投料,用75%的乙醇制軟材 ,干燥后用12目篩制得三批顆粒。三批顆粒的編號分別為20110510、 20110513、20110515,規格為每袋 10g。

3.3 系統適應性實驗

在所述色譜條件下,結果表明,對照品峰,供試品相應峰與陰性供試品峰無重疊,辛弗林峰與其它相鄰組分峰分離完全,分離度均大于1.5,辛弗林峰保留時間為6.251min。

3.4 線性關系考察

以測定的峰面積 Y為縱坐標,進樣量 X(μL)為橫坐標進行線性回歸,得出辛弗林的回歸方程(n=5),Y=36.0756+226.5055X(r=0.9998),線性范圍 0.24～0.96mg。

精密度實驗、穩定性實驗、重復性實驗結果表明供試品溶液穩定、方法的重現性好,滿足樣品測定的要求。

3.5 樣品中辛弗林含量測定

見表4。

表4 樣品測定結果

根據枳實健胃顆粒中辛弗林的測定結果,該顆粒的含量按辛弗林計為0.122%,即辛弗林每袋10g中辛弗林含量不能少于 0.01g。

4 討論

實驗結果表明用正交試驗設計優化制備枳實顆粒劑優于煎煮法,所得產物高于煎煮法。測定辛弗林的紫外吸收,在224nm、275nm處均有最大吸收,綜合考慮其他因素,在224nm處優于275nm,故選擇224nm為檢測波長。配制流動相時,應把 SDS先溶于甲醇,不起泡沫,易于配制。

枳實在臨床上廣泛應用于心血管、胃腸道等疾病,說明其藥理作用的物質基礎是多樣的,因枳實飲片中各類成分含量相差較大,其相應的質量評價指標也應該是多種指標的綜合。在制劑質量控制中,可從多種成分進行綜合評價。對藥材主要成分進行控制,同時進行藥效學比較,可做到對制劑質量的全面、客觀評價,從而合理地應用于臨床。

[1]鄭宏斌,趙茂森.枳實消痞湯治療功能性消化不良療效觀察 [J].四川中醫,2007,25(3):61

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[5]鄭宏斌,趙茂森.枳實消痞湯治療功能性消化不良療效觀察 [J].四川中醫,2007,25(3):61

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