非濃縮尿蛋白電泳法和免疫散射比濁法測定尿免疫球蛋白G的比較

陳 志，王朝暉，邰宏明（江蘇省興化市人民醫院檢驗科 225700）

尿中免疫球蛋白G（IgG）增多與腎小球嚴重病變程度有關，大多是非選擇性蛋白尿［1］。傳統的尿IgG檢測方法主要有免疫散射比濁法、放射免疫法等。放射免疫法由于放射性污染及操作者人為因素的干擾，逐漸被淘汰。近幾年非濃縮尿蛋白電泳已作為檢測尿蛋白和區別尿蛋白類型較好的方法應用于臨床，其優點是操作簡便，靈敏度高，干擾少，結果判斷清晰、直觀，能將尿液中所有的蛋白成分顯示出來，并便于保存，能動態觀察和對比［2-4］。作者采用非濃縮尿蛋白電泳法和免疫散射比濁法分別測定尿免疫球蛋白G，進行比較分析，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 62例標本均來自2010年7月至2011年7月本院腎內科病區患兒新鮮晨尿，其中男35例，女27例，年齡2～8歲，平均5歲，尿干化學常規檢測尿蛋白陽性（＋～＋＋＋＋），病變類型：局灶節段性腎小球硬化16例，局灶性腎小球腎炎12例，腎小球輕微病變9例，狼瘡性腎小球腎炎13例，系膜增生性腎炎12例。

1.2 儀器與方法

1.2.1 非濃縮尿電泳法 采用法國Hydrasys全自動電泳儀（SEBIA）及配套試劑，采用十二烷基磺酸鈉-瓊脂凝膠電泳技術（SDS-AGE），嚴格按照操作說明操作，IgG出現條帶即判定為陽性。

1.2.2 免疫散射比濁法 采用美國貝克曼庫爾特IMMAGE 800免疫分析儀及配套試劑，嚴格按照操作說明操作，尿IgG＞8mg／L，判定為陽性。

1.2.3 干化學法 采用韓國盈東PRO2尿干化學分析儀及配套試紙（批號41911），方法為四溴酚藍指示劑蛋白誤差法。

1.2.4 尿蛋白定量 采用日立7600-020全自動生化儀及配套試劑，采用溴甲酚綠法。

1.3 統計學處理 兩組數據比較用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義，相關分析采用直線相關分析。

2 結 果

2.1 62例非濃縮尿液標本SDS-AGE電泳后，其中33例出現IgG條帶（見圖1），占53%；而采用尿免疫散射比濁法測定IgG陽性40例，占64%。進行相關分析，兩種方法差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.2 非濃縮尿電泳法與免疫散射比濁法定量相關分析 62例標本中兩種方法在檢測尿蛋白IgG上完全符合率達89%，按尿總蛋白定量與尿蛋白電泳IgG百分比計算，尿免疫球蛋白IgG含量與免疫散射比濁法做相關分析，結果兩種方法呈顯著正相關（P＜0.001）?；貧w方程如下：Y電泳法＝1.62X比濁法＋174.96，r＝0.959，見圖2。

圖1 SDS-AGE電泳圖譜

圖2 兩種方法定量測定62份尿蛋白結果相關分析散點圖

3 討 論

尿蛋白電泳技術作為檢測尿蛋白的方法，具有高度的靈敏度和特異性［5］。尿免疫球蛋白IgG作為腎小球病變時的主要蛋白，已越來越多的引起臨床的重視。尿蛋白濃度隨機體對尿液濃縮稀釋作用變化而變化，尿流量受精神、神經調節及飲食因素的影響，一次隨機尿量的影響波動很大，晨尿相對于日間尿流量尿蛋白生成穩定［6-9］。研究發現晨尿的結果比24h尿更為理想，可能因為晨尿較為濃縮及更酸性，能較充分反映腎損傷的情況，也可避免飲食及運動干擾，保證檢測的準確性，同時更方便了患者留尿。本研究中62例尿標本均為晨尿標本。

本研究中，非濃縮尿蛋白電泳法與免疫散射比濁法在判斷IgG型腎病的完全符合率達到89%，并且方法定量呈顯著性正相關，且相關性較好，r＝0.959（可能與標本濃度有關）。根據蛋白質分子量從大到小依次為：腎小管性蛋白（相對分子質量小于70×103）。腎小管功能受損時尿中低分子蛋白排泌量增加；清蛋白（相對分子質量為70×103）；腎小球性蛋白（相對分子質量大于70×103），腎小球濾過膜受損，且分子量越大說明腎小球損傷越大；混合性蛋白，清蛋白條帶兩側同時出現大、小分子蛋白條帶；腎臟病變同時累及腎小管和腎小球時，出現混合性蛋白尿［10］。本研究應用的SDS-AGE非濃縮尿蛋白電泳與以往所經典的十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDS-PAGE）相比，利用瓊脂糖凝膠的選擇性及多孔性，無需預濃縮尿液，靈敏度高（最低檢測15mg／L），可直接檢測，并可排除濃縮尿大于25倍時引起的染色背景過深，而導致的低分子蛋白丟失所帶來的影響［11-12］。

免疫散射比濁法對尿微量蛋白IgG的定量較準確，但是當尿中出現大量尿蛋白時（如多發性骨髓瘤，巨球蛋白血癥或免疫球蛋白輕鏈病時，尿中可排出超過正常的大量輕鏈），IgG含量過高，稀釋不當，其結果將發生嚴重偏倚。免疫散射比濁法由于受儀器、試劑等限制，目前尚無法普及，而且因方法選擇不當或試劑盒本身存在質量問題，限制了其臨床應用［13］。

因此非濃縮尿蛋白電泳法較免疫散射比濁法檢測尿IgG更為方便準確，尤其對IgG含量較高的標本，能對早期腎小球的損傷作出準確的判斷，且受干擾較小。

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