全自動生化分析儀測定血清高密度脂蛋白膽固醇分析性能評價

馮 倩，鄧德耀，周林華，陳 弟，李增安，支國華，薛云松（云南省第二人民醫院檢驗科，昆明 650021）

眾多流行病學與臨床研究表明，隨著血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平降低，缺血性心血管病的發病危險增加。目前，檢測HDL-C的參考方法是超速離心法，直接測定方法即均相測定法因其具有簡便、快速、易于自動化，所以作為常規方法在臨床廣泛應用，但有關的性能評價報道較少。為了深入了解在全自動生化分析儀上檢測HDL-C的性能，作者參考美國臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）的相關文件、國內一些定量檢測性能評價的報道以及試劑廠家的標準，在全自動生化分析儀上對試劑進行了性能評價。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本 受檢者均隔夜空腹8h以上抽血，3 500r／min離心5min，取血清檢測，或留取血清標本置于-20℃待檢。

1.1.2 儀器 日立7600全自動生化分析儀。

1.1.3 試劑 （1）日本積水醫療株式會社HDL-C檢測試劑（批號：805RCJ）；（2）配套校準品（批號：823RJI）；（3）Bio-Rad質控血清水平2（批號46452）和水平3（批號46453）；（4）干擾材料（日本Sysmex公司），包括游離膽紅素、結合膽紅素、血紅蛋白和乳糜物。

1.2 方法

1.2.1 精密度驗證 用兩個水平的質控品和患者新鮮混合血清按標本檢驗程序進行測定，在批內重復測定20次，以及每份樣本每天測定1次，連續測定20d。分別計算批內及天間均值、標準差（s）和變異系數（CV）。并判斷是否小于廠家規定的性能標準。

1.2.2 正確度驗證 依據參考文獻［1］，結合本室的實際情況，選擇衛生部臨床檢驗中心2012年5月發放的5個批號的質控品進行檢測，每個質控品測定HDL-C兩次，計算檢測均值與靶值的相對偏倚（%），偏差小于衛生部臨檢中心組織的室間質評的允許偏倚，則正確度驗證成功。

1.2.3 分析干擾實驗 采用Sysmex干擾檢查試劑盒。空白液與新鮮混合血清按1∶9比例制備各自干擾物的空白對照A液。將結合膽紅素、血紅蛋白、游離膽紅素和乳糜物用蒸餾水溶解，按1∶9的比例分別加入相同的新鮮混合血清，制成不同的干擾物B液，制成后結合膽紅素B液濃度為200mg／L，血紅蛋白B液5 000mg／L，游離膽紅素B液200mg／L，乳糜物B液3 000FTU。將A液與B液按照10∶0（空白管），8∶2（1號管），6∶4（2號管），4∶6（3號管），2∶8（4號管），0∶10（5號管）比例混合，制備成空白管及含不同干擾物濃度的1～5號管。對每一份樣品進行兩次HDL-C濃度測定，結果取平均值。計算影響度（F）＝（含干擾物質標本檢測值-無干擾物質標本（空白）檢測值）／無干擾物質標本檢測值×100%［2］。F絕對值大于10%認為該濃度干擾物質對HDL-C檢測有影響。

1.2.4 分析測量范圍（AMR）驗證 按參考文獻［3-5］，使用廠家提供的高值質控品（其值大于廠家給定的分析測量范圍上限），用生理鹽水稀釋。稀釋液（L）與高值樣本（H）按照10L、9L＋1H、8L＋2H、7L＋3H、6L＋4H、5L＋5H、4L＋6H、3L＋7H、2L＋8H、1L＋9H、10H的關系配制，形成系列濃度樣品。每個濃度重復測定2次，以平均值為實測值，按照公式預期濃度＝（CL×VL＋CH×VH）／（VL＋VH）計算預期值。將實測值與預期值作比較，確定HDL-C的分析測量范圍。檢測低限（LLD）的確定：LLD為樣品單次檢測，可以達到的非空白檢測響應量對應分析物的量。按99.7%的可信限，生理鹽水在批內重復測定10次空白樣品均值±3 s所對應HDL-C的量即為LLD。

1.2.5 生物參考區間（biological reference interval）的驗證參考NCCLS C28-A2文件［6］，選取健康體檢者20例，年齡20～56歲，平均36歲，男女各10例。按照標準操作程序進行檢測，對結果進行統計并與設定的參考區間進行比較，若20份標本的檢測結果均在設定的參考區間內或不超過2份標本超出，則驗證通過。否則，進行參考區間確立實驗。

1.3 統計學方法 應用SPSS11.5統計軟件進行數據分析。分析測量范圍的驗證中截距a與0的比較用t檢驗。

2 結 果

2.1 不精密度驗證結果 結果見表1，批內CV均小于5%，天間CV均小于10%，達到廠家性能標準。

表1 日立7600全自動生化分析儀測定HDL-C的批內、天間不精密度結果

2.2 準確度驗證結果 結果見表2，相對偏倚均小于30%，小于衛生部臨檢中心規定的室間質評允許偏倚。

表2 日立7600全自動生化分析儀測定HDL-C的偏倚結果

2.3 抗干擾能力檢測結果 結果見表3，不同濃度游離膽紅素、結合膽紅素、血紅蛋白和乳糜物對HDL-C檢測的干擾（F）絕對值都小于10%。

2.4 分析測量范圍驗證結果 以實測值為Y軸、預期值為X軸，將結果點在X-Y坐標圖上，計算回歸方程Y＝bX＋a。得到回歸方程Y＝0.995X-0.011，r＝0.999，相關系數r≥0.975，b在0.97～1.03范圍內，a與0差異無統計學意義（P＞0.05），可判斷分析測量范圍（AMR）在實驗已涉及的濃度。生理鹽水在批內重復測定10次，結果均為0，本檢測系統的檢測低限（LLD）是0mmol／L。結合LLD，本方法的AMR為0～5.21mmol／L。

表3 不同濃度干擾物質對HDL-C檢測的干擾（%）

2.5 生物參考區間驗證結果 20份表面健康人血清HDL-C檢測結果濃度為1.11～2.78mmol／L，均在設定的參考范圍大于1.04mmol／L之內。

3 討 論

均相法測定HDL-C根據檢測原理的不同分為清除法、選擇性抑制法、PEG修飾酶法、免疫抑制劑法等［7-8］。本檢測系統試劑的檢測原理是利用脂蛋白與表面活性劑的親和性差異，選擇性地使HDL-膽固醇可溶，所釋放的膽固醇與膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶反應，生成H2O2，并作用于4-AAP色原體產生顏色反應。臨床實驗室的管理部門和相關機構要求實驗室要選擇適當的方法對檢測系統的分析性能進行評價，證實其能夠達到所要求的性能標準，才可將分析系統用于常規工作。本文對日立7600全自動生化分析儀測定HDL-C的主要分析性能進行評價，包括不精密度、不準確度、分析測量范圍、分析干擾試驗、生物參考區間，來了解該系統的性能。

一個檢測系統最基本的性能指標是精密度，在本檢測系統，兩個質控品及患者混合血清的批內、天間變異都小于廠家聲明的CV值。正確度的驗證，有關文獻建議可以通過與參考方法比對或檢測定值參考物（包括由參考方法或決定性方法定值的樣本，從能力比對試驗獲得的參考物，廠家提供的正確度參考物或質控物，室間質量評價樣本，由第三方提供的已用一些不同方法定值的物質）來驗證［9］。本實驗使用衛生部臨檢中心發放的5個不同批號質控品進行正確度驗證，結果均小于衛生部臨檢中心規定的室間質評允許偏倚。不同濃度的游離膽紅素、結合膽紅素、血紅蛋白和乳糜物對檢測結果的影響度均小于10%，可認為這些濃度的干擾物質不影響HDL-C的檢測。本檢測系統分析測量范圍為0～5.21mmol／L，略寬于廠商給出的線性范圍（0.04～3.89mmol／L）。20份健康人血清濃度均在設定的參考區間大于1.04mmol／L范圍內，可以認為現用參考區間適用于本實驗室。

總之，本文參考試劑廠家、NCCLS文件以及國內關于定量檢測分析系統性能評價的相關報道，評價了循環酶法在全自動生化分析儀上檢測HDL-C的性能，基本與廠家聲明的性能一致，該檢測系統能夠用于臨床。

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