中風復元口服液質量標準研究

★ 張誠光 譚梅英 胥愛麗 李素梅（.廣東省第二中醫院 廣州 50095；.廣東省中醫研究所 廣州50095）

中風復元口服液主要由黃芪、陳皮、赤芍、半夏等中藥組成，具有補氣活血，化痰通腑的功效，可用于中風恢復期、后遺癥期治療中風后肩手綜合癥，中風后便秘等。為了更好地控制中風復元口服液的質量，本文通過實驗制定了科學可靠的質量標準，對保證臨床用藥的有效性和安全性具有一定的價值和意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀，Alltech 3300蒸發光散射檢測器，四元梯度泵，G2170AA數據處理系統；CAMAGTLCSCANNER III型薄層掃描儀（瑞士）；CAMAG TLC SAMPLER 4型自動點樣儀（瑞士）；PBQ-II型薄層自動鋪板器（重慶南岸實驗電器廠）；電熱恒溫干燥箱：DHG-9070A（上海精宏實驗設備有限公司）；電子天平：BP-221D Sartorius（德國）；電熱恒溫水浴鍋：HWS-26（上海）；

1.2 試藥

黃芪甲苷對照品（批號：110781-200613）、黃芪對照藥材（批號：120974-200609）、陳皮對照藥材（批號：120969-200507）、赤芍對照藥材（批號：121092-200402）均購自中國藥品生物制品檢定所；中風復元口服液由廣東省第二中醫院制劑室提供；乙腈為色譜純試劑（一級），水為雙蒸水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

2.1.1 黃芪TLC鑒別 取中風復元口服液10mL，加水飽和正丁醇振搖提取3次，每次15mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材2g，加水100mL，煎煮30分鐘，放冷，濾過，濾液加水飽和正丁醇振搖提取，同法制得對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙酯-稀氨水（1→10）（4：1：5）的上層溶液為展開劑，置于用濃氨試液預飽和15分鐘的展開缸內，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾（見圖1）。

2.1.2 陳皮TLC鑒別 取中風復元口服液10mL，加乙酸乙酯振搖提取3次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，殘渣加甲醇1mL溶解作為供試品溶液。另取陳皮對照藥材0.3g，加乙酸乙酯30mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1mL溶解作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述供試品溶液2μL，對照藥材溶液4μL，分別點于同一用1%氫氧化鈉制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（3：2）為展開劑，展開，取出，晾干，在105℃加熱3分鐘，置于紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾（見圖2）。

2.1.3 赤芍TLC鑒別 取中風復元口服液5mL，通過D101型大孔樹脂柱（濕法裝柱，內徑8mm，柱高10cm），先用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，再用20%乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，繼續用20%乙醇70mL洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取赤芍對照藥材0.5g，加水50mL，煎煮30分鐘，濾過，濾液濃縮至5mL，同法制得對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述供試品溶液15μL，對照藥材溶液3μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-氨水（6：3：1.5：1.5：0.3）為展開劑，置于用濃氨試液預飽和15分鐘的展開缸內，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸試液，105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾（見圖3）。

2.2 黃芪甲苷含量測定

2.2.1 色譜條件[1]色譜柱：Agilent Hypersil ODSC18（4.6mm×250mm，5μm）柱；流動相：乙腈-水（32：68）；流速：1.0mL/分；柱溫：25℃；漂移管溫度：45℃；氣體流速：1.5L/分；撞擊器模式：開。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解，制成每1mL含黃芪甲苷0.512mg的對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密量取中風復元口服液20mL，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5mL使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱，（內徑1.5cm，長12cm），以水50mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 取處方中除黃芪外其他藥材，按制劑工藝制備，按2.2.3項下供試品溶液的制備方法制得供試品陰性對照溶液。分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL進樣，記錄色譜圖。從圖中可見，黃芪甲苷色譜峰峰形對稱，達到基線分離，陰性對照溶液在黃芪甲苷色譜峰處基本無干擾。結果見圖4。

2.2.5 線性范圍的考察 分別精密吸取不同濃度黃芪甲苷對照品溶液（每1 mL中含黃芪甲苷分別為0.0512μg，0.1536μg，0.2560μg，0.3584μg，0.4608μg）10μL進行色譜測定，按上述色譜條件測定峰面積，并以峰面積的自然對數值（Y）對進樣量的自然對數值（X）進行線性回歸，得標準曲線：Y=1.3722X+5.0011，r=0.9995。表明黃芪甲苷在0.512-4.608μg范圍內呈良好的線性關系。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液（0.512mg·mL-1）5μL重復進樣6次，測得峰面積積分值的RSD為1.48%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩定性試驗 取樣品供試液（批號120201）分別于0，2，4，6，8小時進樣5μL，測得樣品中黃芪甲苷峰面積值的RSD為1.84%，表明樣品供試液在8小時內穩定。

2.2.8 重復性試驗 按擬定的含量測定方法，取同一批樣品（批號：120201）5份，分別制備供試液，測得峰面積并計算含量，結果供試品中黃芪甲苷的RSD為1.32%。

2.2.9 回收率試驗 取已知黃芪甲苷含量的同一批號樣品（120201）6份，置分液漏斗中，再分別精密加入一定量的黃芪甲苷對照品，按上述供試品制備方法，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測試，結果黃芪甲苷的平均回收率為99.92%，RSD為1.67%，結果見表1。

表1 黃芪甲苷回收率試驗結果

2.2.10 樣品的測定 分別精密吸取對照品溶液2μL、5μL與供試品溶液各10μL，按上述色譜條件進行測定，結果見表2。

表2 樣品中黃芪甲苷含量測定結果（n=2）

圖4 中風復元口服液HPLC色譜圖（t/min）

3 討論

《中國藥典》2010年版一部第283頁黃芪項下收載有黃芪甲苷的提取、純化方法，采用此方法處理供試品，以正丁醇-乙酸乙酯-稀氨水（1→10）（4：1：5）上層溶液為展開劑，以濃氨試液飽和展開缸，所得色譜斑點清晰，供試品色譜與對照藥材色譜對應良好，且陰性對照無干擾，故列入正文。

《中國藥典》2010年版一部第176頁陳皮項下收載有薄層鑒別方法，但操作方法過于復雜，為簡化方法，首先采用乙醚為提取溶劑，以甲苯-乙酸乙酯（3：2）為展開劑，結果供試品斑點較淺。將提取溶劑改為乙酸乙酯[2]，以5%三氯化鋁乙醇溶液為顯色劑，結果供試品色譜與對照藥材色譜對應良好，斑點清晰，分離度好，且陰性無干擾，故列入正文。

《中國藥典》2010年版一部第147頁赤芍項下收載有薄層鑒別方法，采用此方法，結果供試品色譜背景較深，拖尾嚴重。采用大孔樹脂吸附法對供試品進行純化[3]，以20%乙醇洗脫，將展開劑改為甲苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-氨水（6：3：1.5：1.5：0.3），以濃氨試液飽和展開缸，結果供試品色譜與對照藥材色譜對應良好，斑點清晰，且陰性無干擾，故列入正文。

選擇方中君藥黃芪所含黃芪甲苷作為含量測定指標，測定其含量以控制中風復元口服液的質量。參考《中國藥典》2010年版一部黃芪【含量測定】項下方法對中風復元口服液樣品進行處理并檢測，所得結果較為理想，峰形及分離度均良好，出峰時間亦較短，故選擇該方法作為黃芪中所含黃芪甲苷的含量測定方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部，北京：化學工業出版社，2010.

[2]水彩紅，陳玉敏，姜春來，等.小兒止瀉安顆粒質量標準的研究[J].解放軍藥學學報，2011，27（5）：435-437.

[3]陳立江，段洪云，張勝，等.赤芍中芍藥苷的分離純化與結構鑒定[J].中國現代應用藥學，2011，28（7）：634-637.