穴位埋線對衰老模型大鼠慢性應激行為學及大腦皮質的影響*

★ 邊心會 張 宏（1.廣東省廣州市番禺區中醫院 番禺 511400；2.廣州中醫院大學 廣州 511400）

人體進入老年階段以后，由于生理功能、機體代謝和組織形態變化，機體各系統都會出現不同程度的衰老征象，在形體外觀、行為學和大腦功能方面均出現一系列衰退變化。應激是機體受到強烈刺激后出現的一系列神經內分泌免疫反應，以及由此而引起的各種機能和代謝的改變。研究發現長期強烈的身心應激可引起神經內分泌免疫功能的紊亂，嚴重影響人類的身心健康，加速機體的衰老過程[1-3]。本文旨在觀察慢性應激對衰老機體行為學和大腦皮質方面的影響及穴位埋線的調節作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

健康3月齡SD雄性大鼠48只，SPF級，體重200-250g，由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供。大鼠按體重隨機分為4組：空白對照組（A組）、模型組（B組）、模型+應激組（C組）、模型+應激+埋線組（D組），每組12只。大鼠均飼養于SPF級動物實驗室，分籠飼養，每籠4只，飼養溫度21-24℃，光照時間為12小時左右，國家標準固體混合飼料喂養，自由飲食。

1.2 主要試劑與儀器

D-半乳糖（D-Galactose）由廈門興隆達化學試劑有限公司提供；制動應激器為有機玻璃制成，由河南省新鄉縣實驗動物設備廠提供；醫用羊腸線為可吸收性外科縫線3-0鉻制，上海浦東金環醫療用品有限公司生產；DT-2000型電子天平：江蘇常熟雙杰測試儀器廠；光學顯微鏡由上海齊躍生物科技有限公司生產，型號：A-1。

1.3 模型制備

本實驗過程共8周。B組、C組與D組連續8周給予腹腔注射5%D-半乳糖溶液（生理鹽水配制，120mg·kg-1·天-1），每天1次，A組每天給予腹腔注射等量生理鹽水；C組與D組從第5周開始給予制動應激，應激工具為由大鼠固定儀改制而成的限制活動筒。將造模大鼠置于應激裝置中，應激裝置以完全限制大鼠活動為度，應激每天1次，連續應激4周，并通過循序延長制動時間增加應激強度。應激時間分別為d1-d4：60分鐘/天；d5-d8：90分鐘/天；d9-d12：120 分 鐘/天 ；d13-d16：150 分 鐘/天 ；d17-d20：180 分 鐘/天 ；d21-d24：210 分 鐘/天 ；d25-d28：240分鐘/天。每天應激時間安排在上午9：00-12：00。

1.4 埋線取穴與方法

D組從第1周開始給予穴位埋線，選取“腎俞雙”、“肝俞雙”、“百會”、“內關雙”作為穴位埋線處方。“腎俞”和“百會一組，”“肝俞”和“內關”一組，2組交替埋線。穴位定位參照《實驗針灸學》（李忠仁主編，2003年中國中醫藥出版社）。將大鼠在清醒狀態下俯臥固定于大鼠固定架上，將醫用羊腸線剪成0.4-0.6cm數小段，用鑷子將其傳入7號注射針針頭中，然后將預先剪去針尖的2寸針灸針作為針芯緩慢插入注射針頭管中，組成一套。埋線時，穴位皮膚局部消毒后，將注射針頭刺入穴位，抵住毫針針尾，緩慢將針頭內羊腸線推入穴位內，待覺指下有空虛感后方可出針，并確認羊腸線已埋入穴位內，然后用消毒干棉球按壓針孔1分鐘。穴位埋線每周1次，共埋線8次。

1.5 行為學測定

（1）實驗過程中觀察各組大鼠的毛發、精神、活動、飲食、體重等一般狀態。所有大鼠每天計量飲食量和飲水量，每3天稱重1次。

（2）open-field法測定行為：本實驗所用敞箱為立柱體，高40cm，長寬均80cm，周壁為黑色，底面由面積相等的25個方塊組成，以大鼠穿越底面塊數為水平格數，大鼠的直立次數為垂直次數，以大鼠的理毛次數作為修飾次數，通過記錄大鼠在3分鐘內的水平格數、垂直次數和修飾次數來比較不同組大鼠在新異環境中自發行為表現的差異。在實驗結束后第1天進行敞箱實驗。

1.6 標本采集與制備

各組大鼠于第8周實驗結束后進行稱重取材。所有大鼠腹腔注射麻醉（6%水合氯醛0.3mL/100g）后迅速斷頭，于冰盤中迅速開顱取右側大腦半球，稱重后放于甲醛溶液中固定24小時，取大腦顳葉部分常規石蠟包埋、冠狀切片（片厚約4μm）、HE染色，光鏡下觀察大腦皮質形態學變化。

1.7 統計學分析

2 結果

2.1 一般情況

B組大鼠與A組大鼠相比，出現了精神倦怠、動作遲緩、反應遲鈍、毛發無光澤、飲食量減少和體重增長緩慢（P＜0.05）等表現；C組大鼠老化表現更加明顯（P＜0.01），部分大鼠甚至出現了便溏、尿頻、體重減輕等現象；D組大鼠的老化表現不明顯（P＜0.05）；體重增長差與A組之間比較無顯著性差異。詳見表1、圖1。

表1 體重增長差

圖1 各組大鼠體重增長情況比較

2.2 自發行為

與A組相比，B組、C組大鼠的水平活動次數、垂直活動次數和修飾次數都有明顯減少（P＜0.05，P＜0.01）；D組大鼠水平活動次數、垂直活動次數和修飾次數較C組有明顯增多（P＜0.05）。詳見表2、圖2。

表2 open-field法行為測定比較

圖2 各組大鼠open-field法行為評定得分比較

2.3 大腦皮質光鏡觀察（HE染色10×40）

光鏡下可見A組大腦皮質細胞排列密集，細胞形態正常，胞核、核膜、核仁清晰可見；B組大腦皮質細胞排列較稀疏，部分細胞出現固縮，體積減小；C組大腦皮質細胞明顯減少，細胞排列稀疏，細胞固縮嚴重，細胞間隙增大，甚至出現細胞核膜、核仁消失，體積減小，成均質一片；而D組與C組相比，大腦皮質細胞排列較密集，細胞形態有所改善。

3 討論

衰老是多基因（不變因素）和環境影響（可變因素）相互作用的亞臨床病理過程，這個過程的顯著變化之一就是生理功能減退和腦老化[4]。一方面，中醫學認為，“有諸于內，必形于外”，年老以后由于五臟衰退，氣血虧虛，可出現發白齒槁、耳聾目花、皮膚干枯、反應遲鈍、行動緩慢等外在行為的衰老表現，正如《內經》指出：“腎氣衰，發墮齒槁”、“精脫者耳聾”、“氣脫則目不明”。另一方面，大腦是人體的中樞器官，對生命活動有著極其重要的調控作用。腦為髓海，腎主藏精，肝主藏血，腎精肝血充足，腦髓得以充養，腦功能正常。然而隨著年齡的增長，人的大腦會出現生理性老化或病理性功能衰退，腦髓空虛，智力減退，亦在活動能力、思維能力、認知能力、協調能力和興趣愛好等自主行為能力方面出現減退。臨床上表現出健忘、反應遲鈍、動作不協調等癥狀，甚至喪失社會活動能力，生活不能自理，這是因為腦在形態和功能上發生了退行性變化。

同時，老年機體由于生理功能出現退化，很難適應各種超越平常狀態的內外界的變化，即會出現應激能力的下降。因此當各種慢性應激作用于老年個體后，就會加重老年個體在外貌特征、行為學、生理功能等方面的衰老變化和腦老化。有研究證明[5]，慢性應激對大鼠的體重和行為有重要影響，不僅可抑制大鼠體重增長，還造成大鼠排便、排尿增多，活動頻繁，恐懼、焦慮情緒增高。

中醫理論認為，慢性應激主要通過影響人的心、肝、腎、腦等功能，使機體出現氣血流通不暢，臟腑功能紊亂，陰陽失調，加速機體的衰老。本實驗選取腎俞、肝俞、內關、百會作穴位埋線治療。因為肝俞和腎俞為肝腎兩臟的背俞穴，是臟腑氣血的匯聚地，能補腎疏肝、理氣和血、調節陰陽、強腰健骨。內關為手厥陰心包經絡穴，有益氣養心、安神除煩、寬胸理氣等作用。百會為督脈穴位，為三陽五會，與腦髓關系尤為密切，具有協調百脈之功。穴位埋線四穴，可疏通經絡、調節平衡、益智復聰，提高抵抗力，改善學習記憶力。穴位埋線療法，是一種簡便易行的，融多種療法、多種效應于一體的復合治療方法[6]。具有省時方便、作用柔和持久的特點。穴位埋線通過對穴位的刺激可以增強臟腑功能，調節衰老機體的整體功能狀態，提高抗應激能力，從而起到延緩機體衰老的作用。

[1]Seckl JR.Gucocorticoids.ageing and nerve cell damage[J].JNeuroendocrinol，2000，12（8）：709-710.

[2]王曉英，包天桐.應激與衰老的實驗研究[J].中國自然醫學雜志，2001，3（4）：199-202.

[3]韓娟.慢性應激對大鼠下丘腦神經遞質的影響及中藥的調節作用[J].吉林中醫藥，2002，22（4）：54-55.

[4]趙剛，蔡定芳.應激糖皮質激素和海馬老化[J].國外醫學·老年醫學分冊，2002，23（3）：125.

[5]鄭暉，楊權，吳彩茹.慢性應激對大鼠行為和體重的影響[J].四川精神衛生，2004，17（2）：71-72.

[6]尹改珍，霍新慧.穴位埋線療法現代臨床應用[J].針灸臨床雜志，2006，22（10）：58.