全自動毛細(xì)管電泳檢測11 519例血紅蛋白的結(jié)果分析＊

索明環(huán)，溫冬梅，張秀明，吳劍楊，陳亞瓊，徐全中（中山大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)中心，廣東中山 528403）

血紅蛋白病是我國長江以南發(fā)病率最高、危害最大的一類人類遺傳性溶血性血液病，目前為止該病還無有效的治療方法，通過產(chǎn)前篩查預(yù)防受累重型胎兒的出生是目前公認(rèn)最為有效的對策。血紅蛋白電泳是一種常用的血紅蛋白病篩查手段，通過電泳能夠定量檢測HbA、HbF、HbA2含量以及其他異常血紅蛋白，用于輔助診斷珠蛋白生成障礙性貧血（地貧）和異常血紅蛋白病［1－2］。現(xiàn)回顧本院2011年1月至2012年6月以來進(jìn)行血紅蛋白電泳檢測的資料，并計算其與基因檢測結(jié)果的符合率，以便對以后工作進(jìn)行指導(dǎo)，進(jìn)一步提高對血紅蛋白病的篩查效能。

1 資料與方法

1.1 研究對象 2011年1月至2012年6月來自本院和外院1歲以上進(jìn)行血紅蛋白電泳檢測的患者。收集患者資料，進(jìn)行總結(jié)歸類，計算疑似α、β地貧及異常血紅蛋白病患者數(shù)。經(jīng)過臨床醫(yī)生篩選，這些患者平均紅細(xì)胞體積（MCV）≤82fL和（或）平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCH）≤27pg/fL。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本準(zhǔn)備 乙二胺四乙酸二鉀（EDTA－K2）抗凝血或肝素抗凝血3mL，離心5min（5 000r/min），吸去血漿層及白細(xì)胞層，搖勻備用。

1.2.2 HbA2定量檢測 采用法國Sebia公司生產(chǎn)的Sebia Cappilarys 2型全自動毛細(xì)管電泳分析儀及廠家提供的配套試劑及配套質(zhì)控品。在9.8kV電壓、pH 9.4的緩沖液條件下，8條并聯(lián)的石英毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行血紅蛋白電泳，用415μm波長直接檢測血紅蛋白個組分的含量。檢測標(biāo)本前首先做7次室內(nèi)質(zhì)控。室內(nèi)質(zhì)控在控后進(jìn)行患者標(biāo)本檢測，每13例患者插入一個質(zhì)控品，保證檢測全過程都處于在控狀態(tài)。

1.2.3 基因檢測 全血基因組提取試劑盒和α、β基因診斷試劑盒均由深圳益生堂公司公司提供。擴(kuò)增儀為PT－2000PCR儀。檢測中國人常見的3種缺失型α地貧（－－SEA/αα，－α3.7/αα，－α4.2/αα）和中國人常見的β地貧17個位點突變基因型（41－42N，654N，－28N，71－72N，17N，CD26M，31N，27/28M，41－42M，654M，－28M，71－72M，17M，βEM，31M，IVS1－1M，43M，－32M，－29M，－30M，14－15M，CAP，IntM，IVS1－5M）。

1.2.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)［3］當(dāng) HbA2＜2.5和（或）出現(xiàn) HbH，Hb－Bart′s或Hb Constant Spring，并未出現(xiàn)其他異常血紅蛋白帶，初步判斷該患者疑似α地貧患者；當(dāng)2.5≤ HbA2≤3.5，并未出現(xiàn)異常血紅蛋白帶，初步判斷該患者非α，β地貧患者，HbA2＞3.5和（或）HbF帶升高，則初步判斷該患者為β地貧患者。出現(xiàn)異常血紅蛋白帶比如HbE、HbD、HbS、HbC、HbJK等則判斷為異常血紅蛋白病。

2 結(jié) 果

2.1 人群分布 2011年1月至2012年6月以來共檢測血紅蛋白電泳標(biāo)本11 519例，年齡分布在1～71歲，18～35歲占89%。其中男140例，占1.22%，女11 379例，占98.78%，患者主要來自產(chǎn)前診斷中心及血液內(nèi)科。

2.2 血紅蛋白電泳結(jié)果 11 519例患者中，通過法國Sebia毛細(xì)管電泳儀篩查出1 193例疑似血紅蛋白病患者，檢出率10.36%，其中疑似α地貧患者395例，占3.43%。疑似α地貧者中出現(xiàn)HbH帶2例，同時出現(xiàn)HbH和HbBart′s帶19例，出現(xiàn)Hb Constant Spring共7例。疑似β地貧患者755例，占6.55%。HbE變異體檢出18例，占0.16%，HbJ－K變異體檢出20例，占0.17%，HbN帶1例，HbD帶4例。見表1。

2.3 地貧基因檢測結(jié)果 血紅蛋白電泳篩查出的1 193例陽性患者中，有357例進(jìn)行了α地貧基因檢測，而與基因結(jié)果相符的僅有268例，符合率75.07%，而HbH的符合率達(dá)到100%。有419例進(jìn)行了β地貧基因檢測，408例與基因檢測結(jié)果相符，符合率達(dá)97.37%。但是16例血紅蛋白電泳篩查為β地貧的患者，基因檢測顯示該患者為α合并β地貧患者。有8例HbE變異體患者同時做了基因檢測，全部檢出CD26M，符合率100%，并且有1例同時合并了β地貧基因的其他變異。

3 討 論

血紅蛋白病是一組遺傳性疾病，如果夫妻雙方為同型地貧則有可能造成子代的重型地貧。重癥β地貧的兒童患有嚴(yán)重貧血、黃疸、脾臟腫大、骨變形、生長遲緩，需要輸血維持生命，通常在青春期前死亡。廣東省是該病的高發(fā)區(qū)，α地貧發(fā)生率8.53%，β地貧發(fā)生率2.54%，α合并β地貧發(fā)生率0.26%［4］。目前該病無有效的治療方法，主要通過產(chǎn)前診斷避免中、重型地貧兒出生。

血紅蛋白電泳是目前產(chǎn)前篩查地貧及異常血紅蛋白病的一種重要的方法。本實驗室采用了法國Sebia Capillarys 2電泳儀進(jìn)行血紅蛋白電泳檢測，具有較好的可靠性［5］。而通過對11 519例電泳結(jié)果的分析發(fā)現(xiàn)：（1）廣東地區(qū)α地貧發(fā)生率比β地貧要高，但通過血紅蛋白電泳篩查，α地貧發(fā)生率低于β地貧的發(fā)生率。這可能是因為一些標(biāo)準(zhǔn)型和靜止性α地貧患者其MCV、MCH及HbA2是正常的，通過血紅蛋白電泳不能篩查出這些患者，故致使α地貧發(fā)生率降低。另外本組資料顯示，α地貧發(fā)生率3.43%，β地貧發(fā)生率6.55%，與Xu等 的結(jié)果有所差異，這可能與調(diào)查人群不同有關(guān)。（2）毛細(xì)管電泳可以很好地篩查出異常血紅蛋白，這組資料中發(fā)現(xiàn)Hb Constant Spring條帶7例，HbE條帶18例，并且HbE與基因檢測的符合率可達(dá)到100%。而本實驗室并未開展非缺失α地貧及其他異常血紅蛋白基因檢測，無法計算符合率，下一步的工作是開展這些檢測來彌補(bǔ)這一缺陷。（3）本組資料顯示，α地貧與基因檢測的符合率僅有75.07%，而β地貧的符合率高達(dá)97.37%，該結(jié)果與文獻(xiàn)［6］報道基本一致。這可能是因為血紅蛋白電泳不能區(qū)分缺鐵性貧血，自身免疫性溶血性貧血或其他血紅蛋白合成障礙性疾病，也可造成MCV、MCH及HbA2的減低［7－8］。這說明毛細(xì)管電泳篩查β地貧的效能要優(yōu)于α地貧。（4）本組資料顯示16例電泳篩查為β地貧的患者，基因檢測顯示該患者為α合并β地貧患者，這說明當(dāng)HbA2升高時不能排除α合并β地貧的可能。

盡管如此，血紅蛋白電泳作為一種篩查指標(biāo)在篩查血紅蛋白病方面有著重要作用。《廣東省衛(wèi)生廳產(chǎn)前診斷技術(shù)管理實施細(xì)則》中明確了地貧產(chǎn)前診斷技術(shù)規(guī)范，包括了血細(xì)胞分析、血紅蛋白分析和基因診斷。血細(xì)胞分析用于初篩，進(jìn)一步進(jìn)行血紅蛋白分析，結(jié)果異常者才進(jìn)行基因診斷以便確診。實施細(xì)則中指出當(dāng)HbA2降低時，首先檢測血清鐵以排除缺鐵性貧血，當(dāng)血清鐵正常時才懷疑α地貧。按照這一流程，可以降低α地貧的誤篩率，提高血紅蛋白電泳的篩查效能。血紅蛋白病篩查是一個有序的過程，執(zhí)行好這3個過程，做好地中海貧血及異常血紅蛋白病的篩查是每個產(chǎn)前診斷中心重要任務(wù)之一。

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