可舒膠囊對酒精性肝損傷大鼠血清中NF-κB和TNF-α的影響

曾 明，王金萍，丁媛媛，王占慶，邸曉輝

(本文編輯:張仲書; 英文編輯:王建東)

可舒膠囊是以李東垣《脾胃論》中的葛花解酲湯為基礎方，由我院研制的中藥復方制劑，具有解酒、降脂、保肝等作用，臨床應用效果確定。前期實驗發現，可舒膠囊可通過抗脂質過氧化反應防治酒精性肝損傷［1-2］，但其作用機制尚不明確。核轉錄因子 NF-κB(nuclear transcription factor-Kappa B，NF-κB)是一種核細胞基因轉錄中重要的調控因子，是應激與炎性反應的中樞調節物［3-4］。由于NF-κB是調控多種細胞因子基因表達的樞紐，它在酒精性肝損傷中的作用備受關注［5］。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)是一個重要的促炎因子和免疫調節因子，肝臟是TNF-α的重要靶器官。TNF-α主要由肝臟激活的枯否細胞產生，并作為一個關鍵因子參與酒精性肝損傷的發生與發展［6-7］。本研究擬觀察可舒膠囊對大鼠急性酒精性肝損傷血清中NF-κB和TNF-α水平的影響，探討酒精性肝損傷防治機制，為可舒膠囊臨床應用提供實驗資料和理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 健康雄性Wistar大鼠50只，體重150～200 g，由中國醫學科學院動物繁殖場提供(合格證號：SCXK11-00-0006)。高脂飼料：標準飼料加1%膽固醇、10%玉米油、5%豬油制成，由中國醫學科學院動物繁殖場提供。白酒紅星牌56°，北京紅星二鍋頭股份有限公司生產。可舒膠囊：北京軍區臨床藥物研究所自制，0.5 g/粒，批號080822，使用時用0.5% 羧甲基纖維素(CMC-Na)配制。另附TNF-α試劑盒和NF-κB試劑盒(南京建成生物工程研究所)、日立7150型全自動生化分析儀(日本)、MK型酶標儀(芬蘭)等。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組與給藥 大鼠適應性喂養1周后，將50只大鼠隨機分為5組：正常對照組、模型組、并將可舒膠囊干預組根據臨床劑量按體表面積換算，按生藥計量，分低劑量組(3.06 g/kg)、中劑量組(6.12 g/kg)、高劑量組(12.24 g/kg)，每組10只。模型組和可舒膠囊干預組：每日上午灌飲56°白酒，每天24 g/kg，下午分別灌胃0.5%CMC-Na及不同劑量的可舒膠囊，喂高脂飼料；正常對照組：每日上午灌胃生理鹽水，下午灌胃0.5%CMC-Na，給予正常飼料。給藥量均為1 ml/100 g，連續14 d。

1.2.2 標本采集 各組大鼠在最后一次給藥后禁食12 h，25%烏拉坦腹腔注射麻醉，無菌消毒下分離頸主動脈插管取血，離心半徑8 cm，3000 r/min離心10 min，分離血清，-20℃保存，以備測定之用。

1.2.3 酶學測定 取大鼠血清，全自動生化分析儀測定丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和天門冬氨酸轉移酶(AST)。

1.2.4 血清TNF-α和血清NF-κB的測定 嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3 統計學處理 應用SPSS 11.5軟件包進行統計分析，計量資料以均數±標準差()表示，先進行方差齊性檢驗，滿足“方差齊”要求的數據資料用單因素方差分析，組間比較采用LSD法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況觀察 正常對照組大鼠，食欲佳，被毛光滑，精神狀態好，體重增加。模型組大鼠精神萎靡，活動減少，食欲減退，皮毛無光澤，體重較前有所下降。可舒膠囊各干預組大鼠精神、食欲及活動狀態介于正常對照組與模型組之間。

2.2 血清ALT、AST值的比較 模型組與對照組比較血清ALT和AST值均明顯升高，差異有統計學意義(P＜0.01或P＜0.05)；可舒膠囊干預組與模型組比較血清ALT和AST值均降低，差異有統計學意義(P＜0.01或P＜0.05，表1)。

表1 各組大鼠血清ALT、AST值的比較()

表1 各組大鼠血清ALT、AST值的比較()

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

2.3 血清TNF-α和NF-κB含量的測定 與對照組相比，急性酒精性肝損傷大鼠血清中的 NF-κB和TNF-α水平均明顯升高(P＜0.01)。與模型組比較，可舒膠囊干預組，血清NF-κB和TNF-α含量明顯降低(P＜0.01，表2)。

表2 各組大鼠血清NF-κB與TNF-α水平比較()

表2 各組大鼠血清NF-κB與TNF-α水平比較()

注：與模型組比較，*P＜0.01；與正常對照組比較，#P＜0.01

3 討論

酒精性肝病在我國的發病率逐年上升，嚴重危害人們的健康。血清轉氨酶水平是臨床反映肝細胞損傷的敏感指標。本實驗模型組的ALT和AST較正常對照組明顯升高，說明酒精和高脂飼料疊加所誘導的酒精性肝損傷造模成功。

酒精性肝損傷的致病因素為長期大量的酒精攝入。但其發病機制尚不完全清楚。研究證實，長期酒精攝入可以使肝組織中NF-κB活化，活化后的NF-κB進入細胞核內與多種炎癥因子啟動子區域中κB 序列結合，促進炎癥細胞因子(TNF-α、L-1、IL-2、IL-6等)、黏附分子以及NO合酶等的轉錄，引起肝細胞的進一步炎癥、壞死、凋亡和纖維化形成［8-10］。此外，酒精在肝臟中代謝產生了大量自由基，當超出了機體的清除能力，則可抑制脂肪酸氧化，使肝內脂肪蓄積，又可導致肝細胞膜脂質過氧化，造成肝細胞損傷。同時，這些活性氧會使內毒素水平升高，炎癥介質釋放，這些物質又都可以使NF-κB活化，進而產生大量炎性介質，發揮炎性級聯放大作用，加重肝臟損害［11］。

TNF-α是最關鍵的促炎介質，對NF-κB的活化起正反饋調節作用，它既是NF-κB的激活物，也是其激活后的產物。TNF-α一方面具有直接的細胞毒作用，引起肝細胞壞死，另一方面又可引起微循環障礙導致肝細胞壞死，同時，還與其他炎性因子如IL-6相互激發，引起級聯放大反應，進一步加重肝損傷。

中醫藥治療酒精性肝損傷可以從多環節、多靶點調節機體生理平衡，且不良反應相對較小，近年來已逐漸得到認可［12］。本實驗結果表明，經可舒膠囊干預可抑制肝損傷造成的轉氨酶升高。可舒膠囊臨床用于治療酒精性肝損傷療效明確。與對照組相比，急性酒精性肝損傷大鼠血清NF-κB和TNF-α含量明顯升高，引起炎性損傷。與模型組相比，應用可舒膠囊后，各劑量組血清中NF-κB和 TNF-α水平含量明顯降低，且呈一定的劑量反應關系。通過抑制NF-κB的激活，減少炎癥因子的釋放，發揮抗炎及抗凋亡作用，從而有效防治酒精誘導的肝臟損傷，改善肝功能指標可能是可舒膠囊防治酒精性肝病的作用機制之一。

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