南安市部分規模化養雞場雞新城疫血清學調查與分析

黃文生 洪小珠 陳澤金 黃延招 傅霞珠 黃瑞芬 陳美足

（福建省南安市動物疫病預防控制中心 福建南安 362300）

雞新城疫（ND）又稱亞洲雞瘟，俗稱雞瘟。是雞的一種烈性病毒性傳染病，被國際獸醫局列為對動物危害最大的A 類傳染病。患雞常呈急性敗血癥狀。主要特征是呼吸困難、便稀、神經紊亂、黏膜和漿膜出血。死亡率高，對養雞業為害嚴重。1926年首先發現于印度尼西亞，不久又在英國新城發現，世界各國均有流行記載。有強毒株和弱毒株兩類。病毒分為低毒力型（即緩發型）、中等毒力型（即中發型）、強毒力型（即速發型）3 型。多數高強度毒力株常屬嗜內臟型新城疫病毒。雞科動物都可感染該病，家雞最易感，雛雞比成年雞易感性更高。

2012年10月至2013年5月，自南安市碼頭、梅山、洪瀨、康美、柳城、豐州、霞美、官橋等8個鎮的規模養雞場采集了1 390 份雞血清樣品，應用酶聯免疫吸附試驗進行血清學檢測，目的是掌握南安市養雞專業戶雞新城疫血清學流行情況，以便更好地防控雞新城疫，為養雞專業戶提供科學的預防途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血清 隨機選擇轄區內已免疫和未免疫雞新城疫疫苗規模化養雞場的雞，局部消毒處理后，用一次性5 mL 采血器翅靜脈采血，室溫靜置1～2 h，3 000 r/min 離心15 min，分離血清，備用。

1.1.2 診斷試劑 廣州市健侖生物科技有限公司生產的雞新城疫抗體檢測試劑盒。試劑盒中包括預包被板48T/96T、酶結合物（1 號液）、濃縮洗滌液（2 號液）、底物（3 號液）、顯色劑（4 號液）、樣本稀釋液（5 號液）、終止液（6 號液）、陽性對照品、陰性對照品、不干膠膜等。

1.2 試驗方法與步驟

1.2.1 試驗方法 酶聯免疫吸附測定法。

1.2.2 操作步驟

1）洗滌液配制。用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2 號液）按1：10 稀釋，如取50 mL 濃縮液與450 mL 蒸餾水或去離子水充分混勻，即為工作洗滌液。

2）樣本稀釋。用樣本稀釋液（5 號液）將待檢血清樣本按1：100 稀釋，如取5 uL 樣本與495 uL 樣本稀釋液，混勻。陰性、陽性對照品不用稀釋，直接加樣。

3）加樣反應。每次試驗設陰性對照2 孔、陽性及空白對照各1 孔（分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100 uL）。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100 uL。37 ℃避光反應30 min 后，甩去孔內液體，每孔注滿工作洗滌液洗滌3 次，每次均需停留1 min后再甩凈，拍干。

4）加酶反應。除空白對照孔外，每孔加酶結合物（1 號液）1 滴。37 ℃避光反應30 min 后，甩去孔內液體，如上洗滌，拍干。

5）顯色反應。加底物液（3 號液）和顯色劑（4 號液）各1 滴，混勻，37 ℃避光顯色10 min。加終止液（6 號液）1 滴，終止反應（加終止液后，藍色會變為黃色）并判讀結果。

1.2.3 結果判定 陰性對照呈無色或淺黃色，陽性對照呈明顯黃色，表示試驗有效。以空白對照調零，用酶標儀于450 nm（630 nm 作參比波長）讀取吸光度（A 值）。待檢孔A 值大于陰性對照A 值平均值的2.1倍者判為陽性。如陰性對照A 值的平均值低于0.08 時按0.08 計算。

結果判定：樣品OD630值大于0.42，判為陽性；樣品OD630值在0.38～0.42，判為可疑；樣品OD630值小于0.38，判為陰性。

2 結 果

采用酶聯免疫吸附試驗的方法，對南安市的碼頭、梅山、洪瀨、康美、柳城、豐州、霞美、官橋等8個鄉鎮49個存欄3 000 羽以上規模養雞場采集分離到的1 390 份雞血清樣品進行雞新城疫抗體檢測。

2.1 免疫雞群抗體情況 采集免疫雞新城疫疫苗雞群血清樣品共810 份，進行抗體檢測分析，結果見表1。碼頭、梅山、洪瀨、康美、柳城、豐州、霞美、官橋雞的新城疫血清抗體陽性率分別為86.67%、91.67%、93.33%、90.67%、93.33%、90.00%、86.67%和93.33%。在檢測的27個養雞場810 份血清樣品中，平均陽性率為91.23%。其中，洪瀨、柳城、官橋鎮所檢雞場血清抗體陽性率最高，均為93.33%。

表1 免疫雞群抗體檢測結果

2.2 未免疫雞群抗體情況 采集未免疫雞新城疫疫苗雞群血清樣品總共580 份，進行抗體檢測分析，結果見表2。在所檢的22個養雞場580 份血清樣品中，其中碼頭、梅山、洪瀨、康美、柳城、豐州、霞美和官橋雞血清抗體陽性率分別為15.00%、14.67%、8.00%、6.67%、10.00%、15.00%、10.00%和2.5%，而碼頭、豐州地區出現抗體陽性最高，官橋抗體陽性最低。在檢測的22個養雞場中，雞新城疫血清抗體陽性率平均為8.45%。

表2 未免疫雞群抗體檢測結果

2.3 免疫不同疫苗后雞群血清抗體的分布情況

1）在二倍量飲水免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯活疫苗（La Sota 株+H120 株）及注射雞新城疫滅活疫苗的雞群中，挑選5個養雞場，采集血清樣品180 份進行抗體檢測，結果見表3。在采集的5個養雞場的30 份、60 份、30 份、30 份、30 份血清中，血清抗體陽性數分別為28、57、30、30和29，血清抗體陽性率分別為93.33%、95.00%、100.00%、100.00%和96.67%，抗體滴度很高，免疫力堅強，能夠有效阻止病毒對雞群的攻擊。

表3 免疫二聯活疫苗及滅活疫苗后雞群抗體檢測結果

2）從二倍量飲水免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯活疫苗（La Sota 株+H120 株）的規模化養雞場中隨機抽選5個場的120 份血清樣品，抗體檢測結果見表4。5個養雞場的120 份血清樣品中，陽性95 份，平均陽性率79.17%。5個養雞場的血清抗體陽性率分別為80.00%、75.00%、85.00%、80.00%和70.00%，說明二倍量飲水免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯活疫苗（La Sota 株+H120 株）也能產生有效免疫。

表4 免疫二聯活疫苗后抗體檢測結果

3 分析與討論

1）從血清學調查結果分析得出，該病血清學陽性雞在南安市部分養雞場中小范圍存在。在檢測未免疫雞群的580 份血清樣品中，陽性血清為49 份，平均陽性率為8.45%。這也意味著養雞場潛在暴發新城疫的風險，在生產過程中隨時有可能引起較大的經濟損失。在27個免疫過雞新城疫疫苗的養雞場的810 份血清樣品中，平均抗體陽性率為91.23%，說明免疫接種是防止該病發生的一種經濟又簡便的有效手段，是預防和控制該病的根本措施。

2）免疫雞新城疫疫苗后，平均抗體陽性率在91.23%以上，能夠對雞群產生較好的保護。二倍量飲水免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯活疫苗（La Sota 株+H120 株）及注射雞新城疫滅活疫苗對雞群可產生堅強的免疫力，平均抗體陽性率為96.67%。二倍量飲水免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯活疫苗（La Sota 株+H120 株）的平均抗體陽性率為79.19%，其原因有待進一步研究。

3）由表2 可以看出，養雞相對集中的地區，養殖設施簡單，肉雞交易、從業人員流動頻繁的地區，暴發流行該病的機會大，如碼頭、梅山、豐州地區，暴發的機會較大，官橋地區則相對較低。

4）調查發現，大部分養雞場戶主還是很清楚疫苗免疫接種是預防和控制該病的主要措施，并且也會按免疫程序進行疫苗免疫。但有個別養殖戶存在僥幸心理，不按免疫程序、免疫劑量的要求去實施。

5）筆者認為今后應加強對養雞場的技術培訓，規范免疫程序，積極推廣應用活疫苗+滅活苗的免疫程序和相應配套的血清學鑒別診斷方法，以對雞新城疫進行控制。養殖戶一定要注意，單純靠疫苗免疫接種是不能控制和消滅任何一種傳染病的，應該采取綜合防治措施。加強飼養管理，注意控制雞舍內的溫度、濕度、光照，保持空氣新鮮。在天氣突然變化時，飲水中應添加一些抗應激藥物，如維生素C、維生素E、電解多維等。提高飼料營養水平：可在飼料中添加2%大豆磷脂，并加大多維的使用量，提高飼料營養水平。

6）目前南安市的養雞從業人員文化素質相對較低，在養殖過程中缺乏專業的獸醫進行指導，主要靠經驗養殖，所以，在疫病防控方面是非常欠缺科學知識。為此，不僅要加強對該病的防控，還要盡早建立一整套培訓養雞業從業人員的課程，有效地預防和控制該病，為南安市雞新城疫防控提供科學依據和方法。