產ESBLs酶大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性分析

黃育敏

（海南省婦幼保健院檢驗中心，海南海口570206）

產ESBLs酶大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性分析

黃育敏

（海南省婦幼保健院檢驗中心，海南海口570206）

目的了解下呼吸道感染產ESBLs酶大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐藥特性，為臨床抗菌藥物合理使用提供依據。方法采用VITEK-32對大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌進行菌株鑒定，采用K-B法進行藥敏試驗及采用確證試驗進行ESBLs測定。結果我院下呼吸道產ESBLs大腸埃希菌陽性率為27.1%，產ESBLs肺炎克雷伯菌陽性率為40.5%；這兩種菌對亞胺培南和美羅培南顯示100%敏感，對頭孢西丁、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星也有較高的敏感性。對其余的抗菌藥物耐藥率均較高，相同藥物中產ESBLs菌的耐藥率均比非產ESBLs的高。結論根據我院的藥敏結果分析，建議對大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌臨床經驗用藥可選用碳青霉烯類抗生素。

大腸埃希菌；肺炎克雷伯菌；耐藥性；ESBLs

產超廣譜β-內酰胺酶（Extended-spectrum β-lacta-mases，ESBLs）的大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌是下呼吸道感染的主要病原菌，同時也是醫院感染中最常見的條件致病菌。隨著頭孢菌素類抗生素廣泛應用，導致產ESBLs發生率逐年升高，給臨床治療帶來極大的困難。為此對海南省婦幼保健院2012年1月至6月兒科下呼吸道感染患兒痰標本分離出的非重復肺炎克雷伯菌111株及大腸埃希菌59株耐藥性進行回顧性分析，以期為臨床更有針對性地選擇抗菌藥物提供參考和幫助。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源2012年1月至6月，我院兒科送檢的下呼吸道感染患兒標本中分離出的非重復肺炎克雷伯菌111株及大腸埃希菌59株。

1.1.2 儀器與試劑VITEK-32鑒定儀、GNI+鑒定卡購自法國生物梅里埃公司。血瓊脂平板培養基、M-H藥敏平板購自安圖公司。

1.1.3 藥敏紙片氨芐西林、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢唑啉、頭孢噻肟(30μg)、頭孢噻肟/克拉維酸(30μg/10μg)、頭孢他啶(30μg)、頭孢他啶/克拉維酸(30μg/10μg)、頭孢呋辛、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢吡肟、頭孢西丁、亞胺培南、美洛培南、慶大霉素、阿米卡星、環丙沙星、復方新諾明、左氧氟沙星等抗生素紙片購自英國Oxoid公司。

1.2 方法

1.2.1 菌株鑒定將檢驗合格的痰標本接種于血平板及中國蘭平板，35℃培養18～24 h。可疑菌落進行分純，純化后的菌落用GNI+鑒定卡在VITEK-32鑒定儀上進行菌株鑒定。

1.2.2藥敏試驗采用K-B紙片擴散法，按照CLSI 2008 M100-S18相關標準判斷。

1.2.3 ESBLs檢測參照CLSI推薦的確證試驗進行：頭孢噻肟與頭孢噻肟/克拉維酸組合；頭孢他啶與頭孢他啶/克拉維酸組合，任一組藥物的抑菌圈的直徑差≥5 mm時，判定為ESBLs陽性株。大腸埃希桿菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603為陽性質控。

2 結果

2.1 陽性率在大腸埃希菌中產ESBLs陽性率為27.1%(16/59)，肺炎克雷伯菌中產ESBLs陽性率為28.8%(32/111)，總陽性率為28.2%(48/170)。

2.2 耐藥情況大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對碳青霉烯類藥物亞胺培南、美羅培南的敏感性均為100%，其次對阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢西丁的敏感率也較高，除頭胞西丁外，對其他頭孢類藥物耐藥率均較高。對同種藥物，產SEBLs菌對抗生素的耐藥性均高于非產SEBLs菌，見表1。

表1 大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對常用抗菌藥物的耐藥率（%）

3 討論

超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)于1983年在德國發現后，醫學領域專家對于該酶耐藥性方面的研究持續增溫。近年來由于臨床對抗菌藥物的不合理使用，尤其是第三代頭孢的大量使用，導致產ESBLs菌的耐藥性逐年增加。

ESBLs是由質粒介導的一類水解酶[1]，可通過質粒在細菌中傳播，是腸桿菌科細菌對β-內酰胺類藥物產生耐藥的主要原因之一，具有水解含氧亞氨基β-內酰胺類抗生素的能力，它能分解一、二、三代頭孢菌素和青霉素類抗生素，甚至可以分解第四代頭孢類抗菌藥物。

本研究對2012年1月至6月我院兒科送檢的下呼吸道感染患兒痰標本中分離出的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌進行耐藥性分析，產ESBLs菌株總陽性率為28.2%(48/170)，低于劉成偉等[2]報道的35.8%，與孟祥紅等[3]報道的28.14%接近，高于郭緒平等[4]報道的18.0%。產ESBLs大腸埃希菌陽性率為27.1% (16/59)，低于朱德妹等[5]報道的56.2%、蔣冬香等[6]報道的50.1%。產ESBLs肺炎克雷伯菌陽性率為28.8% (32/111)，低于朱德妹等[5]報道的43.6%、蔣冬香等[6]報道的37.2%。差異可能與各地收集的標本類型不同，也可能與各地習慣性用藥不同有關。

由表1可見，產ESBLs菌株對頭孢菌素、單環β-內酰胺類抗生素均呈高度耐藥，但對碳青霉烯類藥物均敏感，對阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢西丁亦有較高的敏感性。在同種藥物中產SEBLs菌株對抗菌藥物的耐藥性均高于非產SEBLs菌株，其中產ESBLs菌對氨芐西林的耐藥率高達100%，除對頭孢西丁的耐藥率較低外(12.5%～18.7%)，對二、三代頭孢菌素的耐藥率達71.8%～100%，但對含酶抑制劑的抗生素（如：哌拉西林/他唑巴坦）其耐藥率也僅為12.5%～21.9%。本研究還顯示產ESBLs菌株對左氧氟沙星、環丙沙星、復方新諾明、慶大霉素亦存在較高的耐藥率，這可能與產ESBLs菌不僅攜帶ESBLs質粒，同時還攜帶有對氨基糖甙類和喹諾酮類抗菌藥物的耐藥基因有關。

鑒于近年大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐藥性逐年增加，臨床對產ESBLs菌感染經驗性用藥時應避免使用頭孢類抗生素以及氨基糖甙類和喹諾酮類，應使用敏感率高的碳青霉烯類抗生素。產ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌是醫院感染的主要病原菌，除了應加強監測與合理使用抗菌藥物外，還應加強醫院內的隔離和消毒措施，減少醫院內交叉感染的發生。

[1]Bish Jacoby GA,Medeinos AA.A functional classification scheme for β-lacatamases and its correlateion with molecular structure[J]. An-timicrobAgents Chemother,1995,39:1211.

[2]劉成偉,李文桂,鄭行萍,等.產超廣譜β-內酰胺酶大腸桿菌和肺炎克雷伯菌的分布及耐藥性分析[J].中國病原生物雜志,2006, 12:404-406.

[3]孟祥紅,肖漓.產超廣譜β-內酰胺酶大腸桿菌和肺炎克雷伯菌的耐藥性研究[J].中國實驗診斷學,2006,1:55-57.

[4]郭緒平,李陽.產超廣譜β-內酰胺酶腸桿菌的分布及耐藥性分析[J].重慶醫學,2007,27(7):566-567.

[5]朱德妹,汪復,胡付品,等.2010年中國CHINET細菌耐藥性監測[J].中國化療與感染雜志,2011,9(20):321-329.

[6]蔣冬香,陳剛,王玉春,等.產ESBLs,大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌的臨床分布與耐藥性[J].中華醫院感染學雜志,2011,21(2): 371-373.

Drug resistance analysis of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae producing extended spectru beta-lactamases

HUANG Yu-min.Hainan Provincial Maternity and Infant Health Hospital,Haikou 570206,Hainan, CHINA

ObjectiveTo investigate the drug resistance of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae producing extended-spectrum β-lactamases(ESBLs),and then provide bases for clinical control and treatment of ESBLs bacteria infection.MethodsThe bacterial identification of E.coli and K.pneumoniae were performed on VITEK-32, antimicrobial susceptibility was tested by disc diffusion test(K-B method),and ESBLs was detected by confirmatory test.ResultsThe positive rate of E.coli producing ESBLs was 27.1%,and the positive rate of K.pneumoniae producing ESBLs was 40.5%,E.coli and K.pneumoniae had 100%susceptible rate to imipenem and meropenem,and they were susceptible to cefoxitin,piperacillin/tazobactam,amikacin,but to other antimicrobials,the resistance rate of them were high.To the same antimicrobial,ESBLs positive strains had higher resistance rate than ESBLs negative ESBLs strains.ConclusionAccord to the result of drug sensitive test,carbapenem antibiotics could be the best choice to control the infection due to E.coli and K.pneumoniae.

Escherichia coli;Klebsiella pneumoniae;Drug resistance;Extended-spectrum β-lactamases(ESBLs)

R378.2

A

1003—6350（2013）06—0858—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.06.0366

2012-10-09)

黃育敏。E-mail：hnhym20000@126.com