XPD751基因多態性與晚期非小細胞肺癌化療敏感性及毒性的相關性探討

張亞平，薛宏波，凌揚，劉永萍，盛桂鳳

（蘇州大學附屬常州腫瘤醫院腫瘤內科1、藥劑科2，江蘇常州213001）

XPD751基因多態性與晚期非小細胞肺癌化療敏感性及毒性的相關性探討

張亞平1，薛宏波2，凌揚1，劉永萍1，盛桂鳳1

（蘇州大學附屬常州腫瘤醫院腫瘤內科1、藥劑科2，江蘇常州213001）

目的探討人類著色性干皮病D組基因(XPD)與接受含鉑方案化療的晚期非小細胞肺癌(NSCLC)患者的近期療效及毒副反應的關系。方法經病理確診的晚期非小細胞肺癌患者62例，接受含鉑方案化療至少2周期后評價療效，采用TaqMan探針實時熒光定量聚合酶鏈反應（PCR）法和直接測序法對患者外周血XPD第751位密碼子進行多態性分析，分析各基因型與晚期非小細胞肺癌患者近期療效及毒副反應的的相關性。結果XPD751基因多態性與NSCLC患者對鉑類藥物化療的有效率無關(P＞0.05，95%CI=0.292 4～4.359 4，OR=1.1290)。攜帶XPD751 Lys/Gln基因型患者其消化道反應較攜帶Lys/Lys基因型患者明顯(P＜0.05)。而在血液學方面的差異無統計學意義(P＞0.05)。結論XPD751基因多態性與NSCLC患者對鉑類藥物化療的敏感性無關，而對預測其毒副反應有一定價值。

非小細胞肺癌；XPD；化療毒副反應

肺癌中80%左右為非小細胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)[1]，在其治療中，鉑類藥物起著舉足輕重的作用。它通過與腫瘤細胞DNA形成鏈間及鏈內交聯而導致DNA損傷，引起細胞凋亡而發揮抗腫瘤作用。人類著色性干皮病D組基因(Xeroderma pigmentosum group D，XPD)參與核苷酸切除修復和基因轉錄，在DNA損傷修復中起著重要作用。其多態性可以導致活性改變，從而與鉑類敏感性相關。本實驗旨在研究NSCLC患者中XPD751與含鉑類藥物為主的化療方案之間的關系，現將結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2006年10月至2010年4月在我院腫瘤內科接受化療的62例晚期非小細胞肺癌患者，病例均經病理學檢查確診，CT掃描證實具有可測量的實體病灶存在。所有患者均為漢族人，年齡37～72歲，中位年齡58歲；男性38例，女性24例；病理類型：腺癌39例，鱗癌13例，腺鱗癌5例，支氣管肺泡細胞癌2例，神經內分泌癌2例及未分類非小細胞肺癌1例。血常規、肝腎功能在治療前均在正常范圍內，心電圖正常。預計生存期＞3個月以上。所有患者均在化療前抽取靜脈血2 ml，分離淋巴細胞基因組DNA供基因分析用。所有患者均知情并簽署知情同意書。

1.2 化療方案及療效評價所有患者均接受以順鉑為主的方案化療，采用NP方案化療的24例，TP方案化療的26例，GP方案的化療的8例，AP方案化療的4例。具體用法：NP方案：長春瑞濱25 mg/m2，d1、d8；順鉑25 mg/m2，d1～3。TP方案：紫杉醇175 mg/m2，分d1、d8、d15，順鉑25 mg/m2，d2、d9、d16。GP方案：吉西他濱1 250 mg/m2d1、d8；順鉑25 mg/m2d1～3；培美曲塞：500 mg/m2d1+DDP 25 mg/m2d1～3。所有藥物均靜脈滴注。

1.3 基因型分析所有患者抗凝外周血用QIAmp?DNA blood Mini kit(Qiagen,Hilden,Germany)提取基因組DNA。PCR擴增及探針由上?；倒竞铣?。PCR反應體系為12μl，含Taqman Universal PCR Master Mix(Applied Biosystems,Foster City, CA,USA)6μl，引物、探針濃度分別為900 nmol/L和300 nmol/L，50 ng的基因組DNA。在iCycler (Bio-Rad)熒光定量PCR儀上反應：50°C 2 min，95°C 10 min；繼而95°C 30 s，60°C 1 min.進行45個循環，儀器自動收集熒光信號，軟件分析給出SNP分型結果。同時所有標本送交上海基康公司直接測序。

1.4 評價標準所有患者必需進行至少2個療程以上治療方可按RECIST 1.0標準進行療效評定，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩定(SD)和進展(PD)。毒副反應按WHO抗癌藥物毒性分度標準分為0～Ⅳ度。

1.5 統計學方法采用SPSS13.0軟件進行雙尾卡方檢驗，當出現期望值＜5時用Fisher精確概率法進行計算，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 療效62例患者均完成2個周期化療，獲得PR 24例，SD 16例，PD22例，總有效率為38.7%。其中51例(82.3%)攜帶XPD751 Lys/Lys基因型，11例(17.7%)攜帶Lys/Gln基因型，未發現攜帶Gln/Gln基因型。在XPD751 Lys/Lys和Lys/Gln攜帶者中，化療有效(CR+PR)率分別為39.2%、36.4%，差異無統計學意義(P=0.860 2＞0.05，95%CI=0.292 4～4.359 4，OR= 1.129 0)，見表1。

表1 XPD751基因型與晚期NSCLC化療近期療效的關系[例(%)]

2.2 XPD751與化療毒副反應的關系化療前后不同XPD751基因型患者毒副反應的比較結果顯示：Ⅲ～Ⅳ度血液學毒性與患者攜帶的基因型無相關性(P＞0.05)。攜帶XPD751 Lys/Gln患者Ⅲ～Ⅳ度消化道反應較攜帶Lys/Lys患者明顯，差異有統計學意義(P＞0.05)，見表2。

表2 XPD751基因型與化療后毒副反應的關系（例）

2 討論

晚期NSCLC的治療目前仍以鉑類聯合第3代抗腫瘤藥物為主，鉑類藥物以順鉑最為常用。順鉑通過用細胞DNA形成順鉑-DNA加合物，影響DNA的復制與轉錄，從而導致DNA損傷。機體主要通過堿基切除修復(BER)、核酸切除修復(NER)、錯配修復(MMR)和重組修復(RR)等方式來修復損傷的DNA。有研究證明DNA修復基因的修復能力與肺癌的發病及耐藥相關[2]。對于正常人群，DNA修復基因可以降低肺癌的發病風險，而對于肺癌患者，DNA修復基因可以導致化療藥物的耐藥，而使化療療效降低。XPD為其中一個重要基因。XPD位于染色體19q13.2-13.3，在核苷酸修復系統中作為進化保守的DNA解旋酶，發揮5'→3'解旋酶活性，參與核苷酸切除修復和基因轉錄，在DNA損傷修復中起著重要作用。

XPD的多態性可以改變DNA修復能力，與鉑類藥物的敏感性密切相關[3]。一組對135例Ⅳ期的非小細胞肺癌患者接受鉑類藥物治療并分析其SNP的研究中發現，XPD第751密碼子的變異與疾病進展時間、化療效果之間存在相關性(P=0.03)[4]。而袁芃[5]研究未發現XPD Lys751Gln多態與化療敏感性有相關性。我們對62例患者的XPD751的基因型進行分析，發現Gln/Gln基因型缺如，這與劉永萍[6]的研究相同。在攜帶XPD751 Lys/Lys和Lys/Gln基因型中，化療有效率(CR+PR)分別為39.2%、36.4%，差異無統計學意義(P＞0.05)。

機體對DNA損傷修復能力的降低，可能使人體正常組織對鉑類藥物的損傷修復能力也降低，從而化療毒性可能會增加[7]。有研究顯示在白細胞下降大于Ⅱ度的骨髓毒性發生率在XPD751不同基因型中有顯著差異[8]，而有的研究[9]顯示：XPD156多態性與Ⅲ～Ⅳ度血液學毒性相關，而與Ⅲ～Ⅳ度胃腸道毒性無關。丁忠海[10]研究發現攜帶XPD751 Lys/Lys的患者中Ⅲ～Ⅳ度惡心嘔吐及脫發較攜帶Lys/Gln+Gln/Gln患者明顯(P＞0.05)，而血液學毒性方面差異無統計學意義。本文主要觀察了XPD Lys751Gln與含鉑藥物化療后的消化道反應及骨髓抑制情況，發現攜帶不同XPDLys751Gln基因的患者Ⅲ～Ⅳ度血液學毒性差異無統計學意義(P＞0.05)，而攜帶XPD 751 Lys/Gln患者Ⅲ～Ⅳ度消化道反應較攜帶Lys/Lys患者明顯，差異有統計學意義(P＜0.05)。這與前面的研究結果有差異，其原因可能與樣本量較少，只能做到檢測某一些特定人群有關。

目前的研究僅局限于機體的某個基因對化療藥物的影響，但在治療過程中，患者對藥物的反應性與很多因素相關，如對聯合藥物的敏感性、耐藥性等，這給臨床實際應用中帶來諸多變數。為了讓患者更獲益，我們還需要進一步擴大樣本量，不斷探索和研究。

[1]陸少鋒.周劑量多西他賽聯合順鉑治療非小細胞肺癌的安全性觀察[J].海南醫學,2009,20(9):202-203.

[2]Kirschner K,Melton DW.Multiple roles of the ERCC1-XPF endonuclease in DNA repair and resistance to anticancer drugs[J].Anticancer Res,2010,30(9):3223-3232.

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[5]袁芃.核苷酸切除修復系統基因遺傳多態與晚期非小細胞肺癌患者鉑類藥物敏感性關系[J].癌癥,2005,24(12):1510-1513.

[6]劉永萍.鉑類化療藥物相關基因多態性對含奧沙利鉑方案輔助化療胃癌患者療效的影響[J].中華醫學雜志,2011,91(4):256-259.

[7]Suk R,Gurubhagavatula S,Park S,et al.Polymorphisms in ERCC1 and Grade 3 or 4 toxicity in non-small cell lung cancer patients[J]. Clin Cancer Res,2005,11(4):1543-1538.

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[9]Wu WT,Zhang W,Qiao R,et al.Association of XPD polymorphisms with severe toxicity in non-small cell lung cancer patients in a Chinese population[J].Clin Cancer Res,2009,15:3889-3895.

[10]丁忠海.DNA修復基因XPD751基因多態性與肺癌化療敏感性關系的研究[J].中華腫瘤防治雜志,2008,15(7):522-525.

Correlation between the polymorphisms in XPD751 gene and sensitivity and toxicity of chemotherapy in advanced non-small cell lung cancer

ZHANG Ya-ping1,XUE Hong-bo2,LING Yang1,LIU Yong-ping1,SHENG

Gui-feng1.Department of Oncology1,Department of Pharmacy2,Changzhou Tumor Hospital Affiliated to Soochow University,Changzhou 213001,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo study the relationship between the polymorphisms in XPD751 gene and sensitivity and toxicity of chemotherapy in advanced non-small cell lung cancer(NSCLC).MethodsA total of 62 patients with advanced NSCLC were routinely treated by cisplatin or carboplatin-based chemotherapy.The clinical response was evaluated after at least 2 cycles.Single nuclear polymorphisms(SNPs)in XPD Lys751Gln were assessed with 5'nuclease allelic discrimination assay(TaqMan)by real-time polymerase chain reaction and direct sequencing.The genotypes were tested for the association with clinical response and toxic reactions of platin-based chemotherapy in advanced NSCLC.ResultsThe response rate of chemotherapy showed no significant correlation in NSCLC patients with the polymorphisms in XPD751 gene(P＞0.05,95%CI=0.292 4～4.359 4,OR=1.1290).There was statistically significant difference between patients with XPD751Lys/Gln genotype and those with Lys/Lys genotype in grade 3 or 4 gastro-intestinal toxicity(P＞0.05),but with no significant difference in grade 3 or 4 hematologic toxicity(P＜0.05). ConclusionPolymorphisms in XPD751 gene may have no significant impact on the sensitivity of chemotherapy in NSCLC patients,but it provides evidence on severe toxicity.

Non-small cell lung cancer;XPD;Toxic reactions of chemotherapy

R734.2

A

1003—6350（2013）05—0648—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.05.0278

2012-10-28)

江蘇省衛生廳資助項目(編號：P200935)；常州市衛生局重大項目(編號：ZD200913)；常州市科技計劃項目(編號：CS20109013)

劉永萍。E-mail：liuuongping026@yahoo.com.cn