頭孢克洛膠囊人體藥代動力學與相對生物利用度研究

丁青山，陳鐵鋒，周志凌，麥麗萍，陳秀云，楊敏，余細勇

（廣東省醫學科學院廣東省人民醫院科教處，廣東廣州510080）

頭孢克洛膠囊人體藥代動力學與相對生物利用度研究

丁青山，陳鐵鋒，周志凌，麥麗萍，陳秀云，楊敏，余細勇

（廣東省醫學科學院廣東省人民醫院科教處，廣東廣州510080）

目的研究頭孢克洛膠囊的相對生物利用度，評價該試驗制劑的生物等效性。方法對20名男性健康受試者采用隨機交叉雙周期給藥方式，分別口服單劑量參比制劑和頭孢克洛試驗制劑500 mg，通過反相高效液相色譜法測定血藥濃度，計算兩者的相對生物利用度和藥代動力學參數，評價該制劑的生物等效性。結果按lnAUC0-t計算，與參比制劑相比，單劑量口服受試藥的相對生物利用度為（97.5±10.0）%。試驗制劑頭孢克洛膠囊和參比制劑頭孢克洛膠囊之間lnAUC0-T、lnAUC0-∞經雙向單側t檢驗，AUC0-T、AUC0-∞的[1-2α]置信區間在參比制劑相應參數的80%～125%范圍內，表明兩種制劑在吸收程度具有生物等效性；lnCmax經方差分析和雙向單側t檢驗，Cmax的[1-2α]置信區間在參比制劑相應參數的75%～133%范圍內，表明兩種制劑在吸收的峰值濃度上具有生物等效性；Tmax經非參檢驗，兩制劑間差異無統計學意義，表明兩制劑在達峰時間上具有生物等效性。結論頭孢克洛的兩種膠囊制劑具有相似的人體藥代動力學特點，生物利用度也相同。

頭孢克洛；生物利用度；高效液相色譜法

頭孢克洛(Cefaclor)是第二代頭孢菌素類抗生素，其作用機制是通過抑制細菌細胞壁的合成來發揮作用。體外試驗證實，頭孢菌素類的殺菌作用是使轉肽酶失活，干擾細菌細胞壁最終階段的合成，阻止黏肽原的交聯。頭孢克洛在臨床上廣泛用于與肺炎雙球菌或鏈球菌有關的上呼吸道感染和對細菌性急性支氣管炎、急性皮膚感染癥、急性單純性膀胱炎等的治療。頭孢克洛膠囊是頭孢克洛的常用制劑，在《藥品注冊管理辦法》中的注冊分類為化學藥品第6類，為了研究頭孢克洛膠囊的藥動學特征和相對生物利用度，筆者建立了一個靈敏、快速、可靠的高效液相色譜法(HPLC)來測定血漿中頭孢克洛濃度，并以市售頭孢克洛膠囊作對照，比較不同制劑中的藥動學特性，對兩制劑進行生物等效性評價。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑實驗主要使用儀器：HP-Chemstation數據處理工作站；HP-1050液相色譜儀；ZT-Ⅰ微型臺式真空泵(由紹興衛星醫療設備制造有限公司制造生產)。實驗主要試劑：(1)頭孢克洛對照品：中國藥品生物制品檢定所，批號：30481-200904，純度為94.1%；(2)N-乙酰普魯卡因胺對照品(內標)：SIGMA，批號：A-5513，純度為99%；(3)水為重蒸去離子水；(4)乙酸鈉、冰醋酸為分析級，由廣州化學試劑廠提供；(5)甲醇和乙腈，均為默克公司生產之色譜純。受試制劑為廣東華南藥業集團有限公司研制的頭孢克洛膠囊(規格：0.25 g；批號：091101；有效期至2011年11月13日)；參比制劑為禮來蘇州制藥有限公司生產的頭孢克洛膠囊(規格：0.25 g，批號：L01634；有效期至2012年7月31日)。

1.2 色譜條件色譜柱為Sino Chrom ODS-BPC 18(4.6 mm×150 mm，5μm)；流動相為乙腈：10 mmol/L；醋酸鈉緩沖液(冰醋酸調pH值為3.6)=9:91，流速為1 ml/min；柱溫為40℃；紫外檢測波長：264 nm。

1.3 樣品處理方法取含藥血漿0.25 ml至1.5 ml的EP離心管中，依次加入內標工作液20μl、10%的三氯醋酸溶液100μl，快速旋渦振蕩3 min，離心5 min，吸取上清液20μl進樣分析。

1.4 方法學確證[1]

1.4.1 特異性同時對6個不同個體的空白血漿、空白血漿加標準品以及用藥后的血漿樣品色譜圖進行考察。

1.4.2 標準曲線和定量下限分別配制濃度為30 mg/L、20 mg/L、10 mg/L、2 mg/L、0.5 mg/L、0.25 mg/L、0.1 mg/L的帶藥血漿樣品，按前項樣品處理方法進行處理。以血漿頭孢克洛濃度(C)作為橫坐標，以測得的頭孢克洛峰面積與內標峰面積之比(Y)作縱坐標繪制標準曲線。血漿樣品頭孢克洛定量下限濃度為0.1 mg/L(S/N＞5)，平行對5個濃度為0.1 mg/L的含藥血漿樣品處理后進行色譜分析，并計算其準確性和相對標準偏差(RSD)。

1.4.3 精密度與準確度分別配制高(20 mg/L)、中(2 mg/L)、低(0.25 mg/L)三種濃度質控樣品，各濃度制備5份樣品，分別在采用1 d內重復3次和分散于2周內重復3次的方式測定其濃度，計算日間、日內誤差。

1.4.4 穩定性觀察高、中、低三個不同濃度的質控樣品分別在室溫(24 h)、-20℃(4周)條件下的穩定性，每個濃度制備樣品5份，結果用偏差(RE)表示。穩定性=(測定值/加入值)×100%。

1.4.5 提取回收率同時考察高、中、低三種不同濃度質控樣品的提取回收率，每種濃度制備樣品5份。

1.4.6 樣品測定質控每種分析批生物樣品測定時均應建立新標準曲線，并隨行測定高、中、低三種不同濃度的質控樣品。各濃度至少雙樣本。

1.5 生物利用度試驗[1]

1.5.1 受試者基本情況2010年8月入選的20名受試者在被告知所有與藥物有關的可能的不良反應后，自愿簽署知情同意書。體重：55～79 kg，平均(64.33±5.78)kg；年齡：21～30歲，平均(25.50±2.28)歲；身高：164～184 cm，平均(171.75±4.71)cm；BMI：19.61～23.88，平均(21.77±1.21)。受試者均無藥物過敏史，無肝、腎疾病史，精神狀態良好，全面體格檢查均正常或異常但無臨床意義。受試者在受試前兩周內未服過任何藥物，從開始試驗直至試驗結束期間，不吸煙、不喝酒，不飲用其他任何飲料。

1.5.2 試驗方法采用隨機、雙周期兩制劑自身交叉對照的單次給藥試驗設計方法。符合入選標準的健康成年受試者20例于試驗前1 d晚上18：00入住Ⅰ期病房，禁食過夜(10 h以上)，于次日早晨空腹站立位服用受試制劑或參比制劑2粒(500 mg)，用250 ml溫開水送服。受試者于服藥前(0 h)和服藥后5 min、10 min、20 min、30 min、45 min、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h、4.0 h、6.0 h、8.0 h、10.0 h共15個時間點抽取靜脈血，每次取血4 ml，置于肝素化的試管中，離心10 min后分離血漿置-20℃儲藏，用于血藥濃度檢測。

1.6 統計學方法所有數據均用均數±標準差(x-±s)表示。采用DAS3.1軟件包對Cmax、Tmax和AUC0-T和AUC0-∞進行生物等效性分析，Cmax采用對數值，等效標準范圍為75%～133%；Tmax采用實測值進行非參檢驗；AUC0-T、AUC0-∞均采用對數值，等效標準范圍80%～125%。相對生物利用度(F)采用下列公式進行計算：

2 結果

2.1 方法學我們所建立的血漿頭孢克洛的測定方法快速、特異性強、準確可靠，完全符合生物等效性研究和藥代動力學研究的要求。頭孢克洛和內標不受代謝物和血漿內源性物質干擾。定量下限(LLOQ)為0.1 mg/L。代表性標準曲線回歸方程為：y=-0.003+0.158x(r=0.998，權重系數為1/x2)。該研究所建立的方法具有較高的精密度和準確度，日間或日內差均小于5.5%。穩定性試驗結果亦表明樣品在室溫放置24 h或-20℃保存4周條件下有良好的穩定性，準確性在90.7%～105%。在酸性條件下蛋白沉淀提取回收率在71.4%～84.5%區間之內。

2.2 頭孢克洛藥代動力學與相對生物利用度所有的受試者在實驗期間未發現有其他不良反應，實驗結束后進行肝腎功能復查均表現正常。單劑量口服頭孢克洛膠囊試驗制劑或參比制劑血藥濃度-時間曲線見圖1。單劑量頭孢克洛給藥后,受試藥與參比藥的藥動學參數如表1所示。按lnAUC0-T計算，與參比制劑相比，單劑量口服受試藥的相對生物利用度為(97.5±10.0)%。

表1 參比制劑和受試制劑的藥代動力學參數（n=20）

圖1 頭孢克洛血藥濃度-時間曲線(n=20，R為參比藥，A為受試藥)

3 討論

研究結果顯示，頭孢克洛膠囊試驗制劑與參比制劑在人體的吸收速度和吸收程度差異無統計學意義，兩藥具有生物等效性。除達峰時間(Tmax)外，本研究中得出的頭孢克洛藥代動力學參數與文獻比較[2-5]并無太大的差異。造成達峰時間差異的原因可能與藥物本身有關，不同劑型(膠囊或分散片)、不同批次的藥物崩解吸收速度可能有差異，間而影響到吸收速度，產生達峰時間差異；另外采血時間點的設置也會造成這種差異，頭孢克洛口服吸收快，如果在吸收相采血時間點寬，會影響達峰時間的精確計算；還有不同試驗群體個體吸收差異也會造成達峰時間峰的差別。

單劑量給藥后,受試藥與對照藥的AUC0-T、AUC0-∞和Cmax三個藥動學參數進行方差分析，其結果顯示：AUC0-T、AUC0-∞和Cmax三個藥動學參數制劑間差異無統計學意義(P＞0.05)，服藥周期對三個參數亦無明顯影響(P＞0.05)，AUC0-T、AUC0-∞和Cmax三個藥動學參數均存在明顯的個體間差異(P＜0.05)。將AUC和Cmax兩個藥動學參數對數轉換后，進行雙向單側t檢驗,AUC0-T和AUC0-∞等效判斷標準為(0.8，1.25)，Cmax等效判斷標準為(0.75，1.33)。統計結果顯示，AUC0-T的置信區間為93.0%～101.1%，AUC0-∞的置信區間為93.0%～101.0%，Cmax的置信區間為82.8%～108.7%，均符合等效標準；Cmax、AUC0-T和AUC0-∞三個參數的雙向單側t檢驗結果同樣符合等效標準；Tmax經非參檢驗結果合格。因此，受試藥與參比藥比較具有生物等效性。

[1]國家藥典委員會.藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗指導原則(中華人民共和國藥典二部2010年版)[M].中國醫藥科技出版社,2010,附錄:195-199.

[2]劉亞妮,呂永寧,舒舟,等.頭孢克洛分散片健康人體藥動學與生物等效性評價[J].醫藥導報,2010,29(5):597-600.

[3]周燕文,劉倩,蘭聰賢.頭孢克洛膠囊健康人體藥動學及生物等效性研究[J].廣西醫科大學學報,2006,23(2):272-274.

[4]魏振滿,丁晉彪,劉峰群,等.頭孢克洛膠囊及分散片在健康人體內的生物等效性研究[J].中國藥業,2008,17(15):11-12.

[5]石焱,羅佳波,隋淼,等.頭孢克洛片在健康受試者體內的藥代動力學和生物等效性[J].解放軍藥學學報,2008,24(3):207-209.

Relative bioavailability and bioequivalence study of cefaclor capsule in Chinese healthy volunteers

DING

Qing-shan,CHEN Tie-feng,ZHOU Zhi-ling,MAI Li-ping,CHEN Xiu-yun,YANG Min,YU Xi-yong.Education Department,Guangdong General Hospital,Guangdong Academy of Medical Sciences,Guangzhou 510080,Guangdong, CHINA

ObjectiveTo study the relative bioavailability of cefaclor capsule in Chinese healthy volunteers and evaluate the bioequivalence.MethodsA single oral dose 500 mg of test and reference formulations was given to 20 healthy volunteers in a randomized cross-over study.The concentrations of cefaclor in plasma were determined by HPLC.ResultsThe relative bioavailability of lnAUC0～Twas（97.5±10.0）%.Two formulations were bioequivalent.The 90%confidence interval of AUC0～Tand AUC0-∞were in the range of 80～125%;Cmaxwas in the range of 75～133%,so the two tablets were bioequivalent.ConclusionThere were similar human pharmacokinetic characteristics and same bioavailability in human subjects between two capsules of cefaclor.

Cefaclor;Bioequivalence;HPLC

R978.1

A

1003—6350（2013）05—0633—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.05.0273

2012-09-19)

余細勇。E-mail:gamsmail@163.com