重組質粒在洋蔥表皮細胞的轉化

趙軍鋒，高英杰，劉玉良，曹 穎

?

重組質粒在洋蔥表皮細胞的轉化

趙軍鋒，高英杰，劉玉良，曹 穎

(河北師范大學 生命科學學院，河北 石家莊 050024)

采用基因槍法，將SCaM4-Citrine、PepA-mRFP和ECBP21-mRFP 3種融合蛋白基因轉化到洋蔥內表皮細胞．同時，將SCaM4-Citrine、PepA-mRFP基因以及SCaM4-Citrine、ECBP21-mRFP基因分別等量混合，共轉化入洋蔥內表皮細胞，23℃光照培養18~ 22h，利用激光共聚焦顯微鏡可觀察到大量融合蛋白的表達，基因槍轉化技術獲得成功．并發現，對于洋蔥表皮細胞來說，幼嫩部分的細胞轉化率比老的高，并且槍擊壓力為7 580 kPa或9 300 kPa時為最適壓力．

洋蔥；基因槍；轉化；重組質粒；激光共聚焦顯微鏡

植物的基因轉化是有目的地將外源基因或DNA導入植物，使之整合、表達并遺傳．基因轉化通常有以下幾種途徑：以農桿菌介導的基因轉化系統，它依賴于Ti質粒作為載體，但其具有狹隘的寄主范圍限制；利用原生質體為受體，用PEG、電擊、脂質體或顯微注射直接將外源基因導入植物原生質體，然而植物原生質體再生難度大，周期長；用花粉管通道將外源DNA導入胚囊，轉化受精卵或其前后的細胞，但這種方法效率低、重復性差；基因槍轉化系統．其基本原理是將外源DNA包被在微小的金屬顆粒(如金、鎢等)表面，利用火藥爆炸，高壓放電或高壓氣體作為驅動力，使金屬顆粒高速射入細胞或組織，從而將顆粒上的外源DNA帶入細胞，其中部分DNA整合到細胞染色體上得以表達，完成基因的轉化過程．這種方法既可以用于瞬時表達，也可以用于恒定表達．與上述幾種方法相比，基因槍轉化技術具有以下幾個優點：克服了農桿菌介導轉化的寄主限制；……