冰凍解凍紅細胞的制備、保存及臨床應用

郝晶茹

（吉林市紅十字中心血站，吉林 吉林 132000）

冰凍解凍紅細胞的制備、保存及臨床應用

郝晶茹

（吉林市紅十字中心血站，吉林 吉林 132000）

目的 通過探討10份-65℃以下保存冰凍紅細胞制備解凍紅細胞的方法，并對其影響質量的相關因素進行分析。方法 使用ACP215血液處理機制備冰凍解凍紅細胞。結果 應用該方法制備的解凍紅細胞經檢測，紅細胞回收率、殘留白細胞、殘留血小板、殘留甘油含量、上清游離血紅蛋白量及體外溶血試驗等質量因素差異均無顯著性且均達到了國家標準。結論 該方法適用于臨床上稀有血型患者的輸血需求。操作簡便，高效，冰凍紅細胞保存時間長，質量穩定，有效提高了臨床用血的安全性。

冰凍紅細胞；解凍紅細胞；制備；安全

人類Rh（D）血型系統是紅細胞血型中僅次于ABO血型的重要血型系統，Rh（D）陰性者約占總人群數的3‰～5‰，而血液常規保存期為21～35d，為避免Rh（D）陰性血液常因臨床無需要而造成浪費，滿足Rh（D）陰性患者的臨床用血需要，避免延誤臨床急癥搶救時間，我站開展了Rh（D）陰性紅細胞冷凍保存項目。該方法使長期保存紅細胞的一種理想方法，降低或完全停止了紅細胞代謝活動，使保存期長達10年，為稀有血型患者提供了臨床急救血液保障，也填補了吉林地區供血的空白，血站的實力也上了一個新臺階[1-6]。

過去，Rh（D）陰性血液臨床預約時，招募、體檢、采血、檢驗耗時長。現在，遇有臨床Rh（D）陰性搶救用血，2h可將解凍的Rh（D）陰性解凍紅細胞供給臨床，為搶救患者爭取了寶貴時間。目前我站已經建立了Rh（D）陰性冰凍紅細胞儲備庫，不僅保證了臨床搶救用血需要，而且使血站的供血實力更上了一個新臺階。

1 冰凍、解凍紅細胞的制備方法

1.1 材料與方法

1.1.1 試劑、耗材及主要設備

①試劑及耗材：紅細胞懸液或全血1袋、 復方甘油溶液（北京博德桑特輸采血器材科技開發中心）、9%氯化鈉溶液（四川南格爾生物醫學公司）、800毫升轉移袋（四川南格爾生物醫學公司）、加甘油管路（美國血液技術公司）、去甘油管路（美國血液技術公司）、0.9%生理鹽水（山東威高集團）。②主要設備：ACP215全自動血液處理機（美國血液技術公司）、超低溫冰箱（-65℃以下，日本三洋公司生產）、CR-7大容量低溫離心機（日立公司）、血液解凍機（長沙儀器儀表有限公司）、全自動無菌接管機（德國費森尤斯公司）、庫爾特血細胞計數儀。

1.2 制備方法

1.2.1 甘油化方法：將紅細胞懸液或全血離心去上清，將濃縮少白細胞紅細胞移至800mL轉移袋中，使用ACP215血液處理機，設定甘油化程序，使滴速先慢后快，加入復方甘油溶液，邊加邊振蕩，1單位紅細胞加甘油160mL（2單位紅細胞加甘油320mL）。在室溫靜止30min，使甘油充分與紅細胞混合，輕離心去除多余的甘油溶液，排氣并搖勻。將甘油化的紅細胞裝盒，使袋體保持平整，打印冰凍紅細胞標簽粘貼在袋體上做好標識，送-65℃以下低溫冰箱速凍保存。

1.2.2 去甘油：將冰凍紅細胞用血液解凍機在37℃水浴中解凍冰凍紅細胞，不斷搖動使血袋與水充分接觸，加速其融化，完全融化至無冰晶。但不能用力，以避免紅細胞受到機械性損傷，融化后置室溫靜置10min，使用ACP215血液處理機，加入9%NaCl溶液洗滌，平衡再用0.9%NaCl溶液反復洗滌。成品為解凍懸浮紅細胞供臨床應用。

1.3 流程圖

（CPDA-1）全血或紅細胞懸液→離心移出血漿及上清液→濃縮少白細胞紅細胞→加甘油（室溫靜止平衡半小時，離心去除多余甘油保存）→甘油化紅細胞→置-65℃以下冰箱保存→冰凍紅細胞→37℃水浴解凍→加9%NaCl溶液→0.9%NaCl反復洗滌→去甘油化紅細胞→加0.9%NaCl溶液240mL制備成 解凍紅細胞。

1.4 使用ACP215血液處理機制備的去甘油紅細胞檢測結果，見表1。

表1 使用ACP215血液處理機制備的去甘油紅細胞檢測結果()

表1 使用ACP215血液處理機制備的去甘油紅細胞檢測結果()

觀察指標(n=10)解凍懸浮紅細胞質量標準紅細胞回收率86.34±3.54紅細胞回收率≥80%殘留血小板0.79±0.23殘留血小板≤1%殘留白細胞0.73±0.16殘留白細胞≤1%上清血紅蛋白0.94±0.15上清血紅蛋白≤1g/L殘余甘油含量4.36±0.57殘余甘油含量≤10g/L體外溶血實驗6.49±0.38體外溶血實驗≤50%細菌培養陰性陰性

2 制備冰凍、解凍紅細胞的注意事項

2.1 保養液為CPDA-1的血液制劑在6d內制備冰凍，這是保持冰凍紅細胞活性的基礎。在加入甘油時一定要使血液制劑的血袋始終保持震蕩狀態，讓甘油緩慢均勻的和紅細胞混合。甘油加完畢后一定要靜止30min。另外，加甘油前和加完甘油都要排盡血袋內空氣，如果血袋內氣泡太多形成大的氣泡的過程中，小氣泡不斷破裂，這樣對紅細胞是一個損害。血袋內有空氣，在冰凍的過程中也易損壞血袋。甘油化是細胞外環境有低滲到高滲的過程，若加入甘油速度過快，可造成紅細胞內外滲透壓來不及轉換，造成紅細胞內滲透壓驟降而水腫，最終導致溶血。

2.2 將冰凍的紅細胞制備成解凍甘油紅細胞關鍵的第一步是在-65℃以下冰箱取出紅細胞后要迅速浸入37～40℃水浴中，水浴箱的水一定要浸沒血袋，要不斷搖動，使血袋與水充分接觸，加速其融化，但不能用力去擠壓血袋。減少紅細胞在溶化過程中的機械損傷，溶化好的血袋要在室溫靜止10min，讓紅細胞得到充分休息，增強紅細胞的抗破壞能力。解凍紅細胞經復溫、洗滌后應在24h盡快輸注。

3 適應證

解凍紅細胞主要應用于突發事件下的血液供應、腫瘤放化療，患者自體血的回輸，稀有血型患者、從事輻射工作人員、戰備貯存等。

4 討 論

經過解凍洗滌的紅細胞由于去除了絕大部分白細胞、血小板和血漿蛋白，減少了輸血反應（發熱反應、HLA同種免疫反應等）。對于血液病、陣發性睡眠性血紅蛋白尿、腎功能異常以及心功能不全的患者輸用很有益處。輸入人體后氧的釋放能力比常規方法保存的血液要好。另外，解凍紅細胞由于去除了細胞代謝產物，抗凝劑，即使大量輸注也可避免以及減少肝炎等傳染病的傳播。解凍紅細胞質量穩定，但制備方法簡便高效，在臨床應用中意義重大。

[1] 楊冬燕,段恒英,王娟娟,等.全自動細胞處理系統制備冰凍紅細胞的關鍵控制點及效果評價[J].重慶醫學,2009,38(9):1078-1079.

[2] 馬慶,陸瑤,徐雪瑾,等.紅細胞深低溫長期保存效果的探討[J].中國輸血雜志,2007,20(1):45-47.

[3] 王惟.冰凍紅細胞的特點和制備、保存及臨床應用[J].中外醫療,2012,31(23):37.

[4] 孫迪,楊建,吳曉黎,等.紅細胞在-65℃保存過程中代謝及體外功能變化的探討[J].檢驗醫學與臨床,2011,8(3):312-314.

[5] 中華人民共和國國家標準《全血與成分血質量標準》[S].GB 18469-2001.

[6] 沈莉,李建民,梁曉虎,等.過濾后血液制備冰凍紅細胞的質量探討[J].河北醫藥,2008,30(12):2001-2002.

R331.1+41

B

1671-8194（2013）28-0057-02