高效液相色譜法測定加味逍遙丸芍藥苷的含量測定

魏 龍

（株洲市中心醫院，湖南 株洲 412000）

高效液相色譜法測定加味逍遙丸芍藥苷的含量測定

魏 龍

（株洲市中心醫院，湖南 株洲 412000）

目的 探討高效液相色譜法測定加味逍遙丸含芍藥苷的含量。方法 應用Dikmond C18：色譜柱，進行定量分析。柱溫：室溫；流動相：乙腈-0.1%磷酸(14∶86)；流速：1.0mL/min；檢測波長：220nm。結果 芍藥苷進樣濃度在5.81～57.389μg/mL(r=0.9998)范圍內與其峰面積顯示良好的線性關系，重現性試驗RSD為0.2%。結論 本法方法準確，重復性好，精密度高，便與測定加味逍遙丸中芍藥苷的含量，有效控制該制劑的質量。

高效液相色譜法；加味逍遙丸；芍藥苷

由茯苓、柴胡、甘草、薄荷、牡丹皮、白芍、當歸等中藥組成的具養血健脾，清熱舒肝的作用的中成藥加味逍遙丸，臨床應用廣泛。經證實具有確切的療效，作用安全穩定，主要用于兩脅脹痛、脾弱肝郁、倦怠食少、肝脾不和、脹痛臍腹、月經不調、頭暈目眩[1,2]。本實驗對加味逍遙丸中芍藥苷的含量運用高效液相色譜法進行測定，其質量標準得到了有效的控制，結果精確，方法快捷、簡便，可以用于控制制劑質量，報道如下。

1 藥品與儀器

1.1 藥品

加味逍遙丸（湖南雙鶴新特藥有限公司，國藥準字Z15020181，批號：120601，120602，120603）；芍藥苷對照品（批號：20120412，供含量測定用，購自寶雞市辰光生物科技有限公司）。水為新制多重蒸餾水，甲醇（濟南市旺億化工貿易有限公司）為色譜純，磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉等其他試劑為分析純。

1.2 儀器

DIONEX-P680液相色譜儀（美國），SPD-10AvP紫外檢測器；77251定量閥；photoLab 6600 紫外可見分光光度計（德國）；FA1604分析天平（沈陽鑫科之杰儀器化玻有限公司）；TD-300W超聲波清洗機（北京泰元達創科技有限公司）。Chromeleon色譜工作站，EX324ZH電子分析天平（ d = 0101g，美國）。

1.3 色譜條件

Dikmond C18色譜柱，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑C18（4.5mm ×150mm，5μm，北京京科瑞達科技有限公司）；流動相：乙腈-0.1%磷酸（14∶86）；流速：1.0mL/min；檢測波長：220nm；柱溫：室溫，進樣量：20μL。理論板數按芍藥苷峰計算不低于4000。

1.4 供試品溶液的制備

加味逍遙丸碾碎1g，過篩孔內徑0.150mm（100目篩），精密稱重后，放入錐形瓶中，精密加入50%甲醇水溶液50mL，密塞，精密稱重，超聲處理（頻率45Hz，功率240W）30min提取1h，冷卻，精密稱重，用50%甲醇溶液補足丟失的重量，濾過，搖勻，取續濾液，可得到供試品溶液。對照品溶液的制備，取經60℃干燥至恒重的芍藥苷對照品適量，精密稱重，加流動相中制成每1mL含60μg芍藥苷對照品，可得到對照品溶液。

1.5 線性關系實驗

取經60℃干燥精密稱重的芍藥苷對照品12.25mg，放入50mL棕色10mL量瓶內，加流動相溶解稀釋，搖勻；從上述溶液中分別精密吸取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0mL放入5個10mL量瓶中，加流動相稀釋并定容。精密吸取對照品溶液各10μL，注入色譜儀，記錄色譜峰圖[3]。

1.6 精密度實驗

精密吸取濃度為35.2μg/mL的芍藥苷對照品溶液，注入高效液相色譜儀，連續進樣6次，測得芍藥苷峰面積。

表2 精密度實驗結果

表3 穩定性實驗結果

1.7 穩定性實驗

取含芍藥苷的供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，10，12h進樣10μL，測得芍藥苷峰含量[4]。

1.8 重復性實臉

取同一批號加味逍遙丸（批號：120601），按照供試品溶液的制備方法平行制備6份，精密吸取10μL，色譜條件下平行測定6次。

1.9 樣品含量測定

取加味逍遙丸樣品3批（批號分別為：050601，050602，050603），按照供試品溶液的制備，按上述色譜條件測定并計算含量[5]。

1.10 統計學分析

SPSS等軟件處理，計數資料的組間比較應用卡方檢驗或fisher確切概率法，多因素分析應用Logistic回歸。計量資料符合正態分布者應用平均數及標準差表示，不符合正態分布者用中位數及25%、75%位數表示。

2 結 果

2.1 線性關系實驗

對照品濃度與對應峰面積（Y）進行回歸，回歸方程為：Y=1837.4C-11.447，r=0.9998。芍藥苷在5.81～57.389μg/mL的濃度范圍內與峰面積呈正比關系，見表1。

表1 線性關系實驗結果

2.2 精密度實驗

測得芍藥苷峰面積的RSD為0.98%，見表2。

2.3 穩定性實驗

表明芍藥苷在供試品溶液內放置12h穩定，芍藥苷峰含量的RSD=0.72，見表3。

2.4 重復性實臉

芍藥苷含量的RSD為1.28%（n=5），表明本法的重復性好，見表4。

表4 重復性實臉結果

2.5 樣品含量測定

選取加味逍遙丸樣品3批（批號分別為：120601，120602，120603）按照供試品溶液的制備，按上述色譜條件測定并計算含量，見表5。

表5 加味逍遙丸中芍藥苷含量(n=3)

3 討 論

由茯苓、柴胡、甘草、薄荷、牡丹皮、白芍、當歸等中藥組成的具養血健脾，清熱舒肝的作用的中成藥加味逍遙丸，臨床應用廣泛。經證實具有確切的療效，作用安全穩定，主要用于兩脅脹痛、脾弱肝郁、倦怠食少、肝脾不和、脹痛臍腹、月經不調、頭暈目眩。其中白芍具有散淤止痛、清熱涼血作用。具有鎮靜、保肝、鎮痛、瀉下、抗菌功效。其主要藥效成分為芍藥苷。本文應用高效液相色譜法測定了芍藥苷的含量[6,7]。

結果顯示，在芍藥苷進樣濃度在5.81～57.389μg/mL（r=0.9998）范圍內與其峰面積顯示良好的線性關系，重現性試驗RSD為0.2%。穩定性較好。

在2005年版《中華人民共和國藥典》中，擬訂了逍遙丸的質量控制標準為芍藥苷在藥物中的含量。明代薛己編撰的《內科摘要》中方劑“逍遙丸”基礎上加味而成[8]。有研究表明，以阿魏酸作為指標對含量測定條件，當流動相pH值約為2.5時，抑制阿魏酸的拖尾，當流動相pH值＜2.5時C18柱效下降較快，為考慮方法的耐用性。所以選擇芍藥苷為含測指標更合理、結果更準確[9,10]。

本實驗在流動相選擇乙腈-0.1% 磷酸（14∶86）作為芍藥苷含量測定的流動相，理論塔板數高。研究表明，甲醇-0.5%冰醋酸理論塔板數少，甲醇紫外吸收波長與芍藥苷的檢測波長相近，干擾大。而使用磷酸鹽緩沖溶液可明顯改善芍藥苷峰形，理論板數均符合相關要求。

綜上所述，采用高效液相色譜法測定芍藥苷含量，結果表明，本法簡單準確，重現性好，穩定性強，可以有效地控制加味逍遙丸的質量。

[1] 吳斌,孫亞捷,府碧蔚.2006年深圳市藥品不良反應監側報告分析[J].藥物流行病學雜志,2008,17(1):35-38.

[2] 盛紅彬.藥品不良反應監側中藥師的臨床思維[J].中國藥師,2006,9(10):947-948.

[3] 焦少珍,韓鳳梅,陳勇.RP-HPLC法同時測定加味逍遙口服液中梔子苷、芍藥苷和丹皮酚的含量[J].湖南大學學報,2007,29(2):196-197.

[4] 楊麗.HPLC法測定千金止帶丸中芍藥苷的含量[J].中國藥事,2007,21(6):422.

[5] 常麗影,赫玉芳,南敏倫.高效液相色譜法測定胃康靈膠囊中芍藥苷的含量[J].時珍國醫國藥,2005,16(7):596.

[6] 黃文瑜.高效液相色譜法測定香附丸中芍藥苷的含量[J].湖北中醫學院學報,2007,9(2):31-32.

[7] 張家富,盂相,邢安之.HPLC法測定白芍不同飲片中芍藥苷的含量[J].安徽醫藥,2005,9(8):588-589.

[8] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社,2005:428.

[9] 林惠.加味逍遙丸中芍藥苷的含量測定[J].醫藥導報,2009,6(28): 144-145.

[10] 焦玉,萬宏,黃德紅,等.高效液相色譜法測定消腫止痛洗劑中芍藥苷的含量[J].湖北中醫藥大學學報,2011,13(5):33-34.

R282.710.3

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1671-8194（2013）29-0047-02