PTTG和p27Kipl在肝癌中的表達及其臨床意義

蔡建平周湘鴻*

（1 河南省人民醫院肝膽外科，河南 鄭州 450014；2 河南省人民醫院心血管內科，河南 鄭州 450014）

PTTG和p27Kipl在肝癌中的表達及其臨床意義

蔡建平1周湘鴻2*

（1 河南省人民醫院肝膽外科，河南 鄭州 450014；2 河南省人民醫院心血管內科，河南 鄭州 450014）

目的 分析垂體腫瘤轉化基因（PTTG）和p27Kipl基因在原發性肝細胞性肝癌（HCC）中的表達及其臨床意義。方法 應用免疫組化S-P法檢測48例HCC及癌旁肝癌組織中PTTG蛋白、p27Kipl蛋白的表達情況。結果 HCC、癌旁和正常肝組織的PTTG蛋白陽性表達率分別是70.8%（34/48）、91.7% （44/48），二者之間的差異有統計學意義（P＜0.05），且PTTG蛋白在癌旁中的表達明顯高于在HCC中的表達（P＜0.05）；HCC、癌旁組織的p27kip1蛋白陽性表達率分別是20.8%（10/48） 83.3%（ 40/48），二者之間的差異有統計學意義（P＜0.05）。34例PTTG表達陽性組織中有10例見p27kip1表達陽性，而14例PTTG表達陰性組織中有9例見p27kip1陽性表達，二者比較差異有顯著性意義（P＜0.05）。結論 PTTG和p27Kipl異常表達與HCC的發展密切相關，在HCC的發展過程中起重要的作用。

肝腫瘤；垂體腫瘤轉化基因（PTTG）；p27Kipl基因；免疫組織化學

1 資料與方法

1.1 標本來源

收集河南省人民醫院2006年12月至2013年6月手術患者經病理學檢查證實為肝細胞癌標本48例，所有標本術前均未結受化療、放療，有完整病理學資料。男35例，女13例，年齡在28～80歲，平均62.5歲，18例有門脈癌栓，30例有完整包膜，18例包膜不完整或無包膜；小肝癌（≤5cm）28例，大肝癌（＞5cm）20例；術前肝內轉移32例，無肝內轉移16例。

1.2 主要試劑

兔抗人PTTG和鼠抗人p27kip1多克隆抗體，購自北京中杉金橋生物試劑有限公司。

1.3 實驗方法

采用免疫組織化學鏈霉卵白素-生物素-辣根過氧化物酶復合物（streptavidin peroxidase conjugated method，SP）法檢測PTTG、P27kip1蛋白表達，以試劑盒中已知陽性切片為陽性對照，以PBS液（pH=7.4）代替一抗為陰性對照。抗PTTG抗體稀釋度為 1∶20，抗p27kip1抗體稀釋度為1∶50，操作按試劑盒說明書要求步驟進行。

1.4 PTTG和P27kip1蛋白陽性表達的判定

用雙盲法對染色結果進行評估，PTTG以腫瘤細胞胞質內出現棕色顆粒為陽性細胞，P27kip1以細胞核出現棕黃色顆粒為陽性細胞，分別在400倍、200倍光鏡下至少觀察5個視野，計數100個細胞中腫瘤陽性細胞＞10%定義為陽性表達，≤5%為陰性表達。

1.5 統計方法

計量數據表示為均數±標準差（ ±s）表示，采用χ2檢驗及相關分析。數據用 SPSS 11.0統計軟件包進行處理。檢驗水準α=0.05。

2 結 果

2.1 PTTG蛋白在HCC 及癌旁肝組織中的表達

48例HCC癌組織PTTG蛋白陽性34例，陽性率70.8 %，癌旁組織中陽性44例，陽性率為91.7%，后者高于前者，差異有顯著性（P＜0.05）。癌組織中陽性細胞呈彌漫性、小巢狀或散在分布。在胞質內PTTG蛋白主要呈彌漫性全漿分布，有的呈包涵體狀，透明細胞性肝癌細胞中分布于胞膜下。

2.2 p27kip1蛋白在HCC 及癌旁肝組織中的表達

p27kip1蛋白陽性表達在20.8%（10/48）的肝癌組織內見到，陽性表達顆粒主要位于細胞核，在同一組織標本中p27kip1表達呈均一性，且隨著腫瘤惡性程度的增高，肝癌組織中p27kip1蛋白的表達明顯降低，而癌旁組織內為83.3%（40/48），其表達顯著高于腫瘤組織（P＜0.05）。

2.3 PTTG蛋白及P27kip1蛋白表達與肝癌患者臨床病理學參數之間的關系

見表1。

2.4 PTTG蛋白及p27kip1蛋白表達在HCC中的相關性

表1 臨床病理學參數與PTTG蛋白及P27kip1蛋白表達間的關系

34例PTTG表達陽性組織中有10例見P27kip1表達陽性（29.4%），而14例PTTG表達陰性組織中有9例見P27kip1陽性表達（64.3%），二者比較差異有顯著性意義（P＜0.05）。 經四格表pearson等級相關分析，肝癌組織中二者表達的列聯系數r=-0.308，說明二者有明顯負相關性（P＜0.05）。

3 討 論

1997年，Lin Pei等[1]利用差異顯示PCR、Northern Blot、DNA測序等分子生物學技術分離出垂體瘤轉化基因（PTTG），PTTG是一種強有力的腫瘤轉化基因，在多種腫瘤細胞及腫瘤組織中均有高表達。可通過多種機制參與腫瘤的形成與發展: 阻止姐妹染色體分離；誘導細胞轉化；促進其他原癌基因及促瘤因子的表達；促進b-FGF 參與的腫瘤血管生成等[2-6]。金中元等[6]利用免疫組織化學SP法和原位雜交技術檢測61例原發性肝細胞癌中PTTGG蛋白和mRNA的表達。結果發現，原發性肝細胞癌組織中陽性率為70.8%，明顯低于癌旁組織中陽性表達率91.7%，與原發性肝細胞癌的病理分級無關。另外 PTTG1 參與凋亡的調控并誘導染色體非整倍體形成等[6]。本實驗中PTTG 蛋白在HCC中陽性表達率為72.0%，顯著高于正常對照組（P＜0.01）。與患者性別、年齡、腫塊直徑及是否伴門靜脈癌栓無關，與是否伴肝內轉移有關。高頻率過度表達表明PTTG 蛋白在人肝組織癌變過程中可能起重要作用，這與金中元等研究結果相符[6]。

p27kip1是細胞周期負性調控因子，主要抑制Cy-clinE-CDK2和cyclind-CDK4等G1期激酶復合物，阻滯細胞于G1期，防止細胞過度增殖并與細胞凋亡有著密切的關系，是公認的抑癌基因[7]。Wang等[8]研究發現p27kipl通過磷酸化Statl抑制Ras系統信號轉導而抑制CDK，進而抑制細胞從G1期到S期的轉變。p27kip1絲氨酸10的磷酸化還與細胞運動相關，Wang等[9]體外研究證明p27ser10的磷酸化在惡性膠質瘤細胞的遷移中起重要作用。Katayose 等[10]報道，p27kip1的過度表達可以誘導細胞凋亡，認為p27Kipl可能在HCC發生早期起負調控作用。我們的結果顯示，p27Kipl在肝癌組織中的陽性表達率為20.8%，而在癌旁組織中的陽性表達率為80%，二者比較差異有統計學意義（P＜0.05）。與患者性別及年齡無關，而與腫塊直徑、門靜脈癌栓及是否伴肝內轉移有關。可以說明，p27Kipl蛋白低表達，對肝癌細胞的負調控作用減弱，促進腫瘤細胞生長。

PTTG和p27Kipl在腫瘤的發生、發展、浸潤和轉移等有密切關系，并且在腫瘤的增值和凋亡機制中起著關鍵作用。在人類多種惡性腫瘤中均可以檢測到PTTG和p27Kipl蛋白的異常表達，PTTG和p27Kipl的異常表達可能共同促進腫瘤的發生和進展。但是PTTG和 p27Kipl在HCC組織中表達的研究相對較少。本研究的結果顯示：經配對四格表Spearsman等級相關分析，肝癌組織中二者表達的列聯系數r=-0.308，說明PTTG和p27Kipl在肝癌中的表達有明顯負相關性（P＜0.05），推測二者可能共同參與肝癌的發生發展，聯合檢測PTTG和p27Kipl蛋白的表達對于預測HCC的惡性潛能、判斷預后和為肝癌的治療有望提供新的靶點，有一定的臨床價值和現實意義。

參考譯文

[1] Hershko D.Oncogenic Properties and Prognostic implications of the ubiquitin ligase Skp2 in cancer[J].cancer,2008,112(7):1415-1424.

[2] Ish ikawa H,Heaney AP,Yu R,et al.Hum an p itu itary tum or tran sform ing gene induces angiogensis[J].J Clin Endocrinol Metab,2 001,86(14):867-874.

[3] Genkai N,Homma J,Sano M,et al.Increased expression of pituitary tumor-transforming gene (PTTG)-1 is correlated with poor prognosis in glioma patients[J].Oncol Rep,2006,15(6): 1569-1574.

[4] FujiiT,NomotoS,KoshikawaK,et al.Overexpression of pituitary tumor transforming gene 1 in HCC is associated forming gene 1 in HCC is associated with angiogenesis and poor prognosis[J]. Hepatology,2006,43(6): 1267-1275.

[5] Kim DS,Franklyn JA,Smith VE,et al.Securin induces genetic instability in colorectal cancer by inhibiting double-stranded DNA repair activity[J].Carcinogenesis,2007,28(3):749-759.

[6] 金中元,鄭長黎,鄭暉.PTTG 蛋白和c-m yc 蛋白在原發性肝細胞癌中的表達[J].中國現代醫學雜志,2002,17(12):11-13.

[7] Solbach C,Roller M,Fellbaum C,et al.PTTG mRNA expression in primary breast cancer: a prognostic marker for lymph node invasion and tumor recurrence[J].Breast,2004,13(1): 80-81.

[8] Wang S,Raven JF,Durbin JE,et a1.Statl phosphorylation determines Ras oncogenicity by regulating p27kip1[J]. PlosOne,2008,3(10):3476.

[9] Wang D,He F,Zhang L,et al.The role of p27 (Kip1) phosphorylation at serine 10 in the migration of malignant glioma cells in vitro [J].Neoplasma,2011,58(1):65-73.

[10] Katayose Y,Kim M,Rakkar AN,et a1.Promoting apoptosis: A novel activity associated with the cyclin-dependent kinase inhibitor p27 [J].Cancer Res,1997,57(24):5441-5445.

Expression of PTTG and p27Kipl Protein in Hepatocellular Carcinoma and Its Significance

CAI Jian-ping1, Zhou Xiang-hong2
(1 Department of Hepatobiliary Surgery, Henan Provincial People’s Hospital, Zhengzhou 451000, China; 2 Department of Cardiology, Henan Provincial People’s Hospital, Zhengzhou 451000, China)

Objective To investihate the expression of PTTG and p27Kipl protein in primary hepatocellular carcinoma(HCC). Methods The expression of PTTG and Survivin in 48 cases with HCC and their neighboring noncancerous tissues were obtained. Immunohistochemistry was used to detect protein expressions of PTTG and P27kip1.Results The positive rate of PTTG in cancer tissues and their neighboring noncancerous tissues was 70.8%(34/48),91.7 %(44/48) respectively, with significant difference (P＜0.05). The expression of PTTG in cirrhosis tissue was higher than that in cancer tissue(P＜0.05). The positive rate of p27kip1 in cancer tissue and their neighboring noncancerous tissues was20.8%( 10/48),83.3%(40/48)respectively,with significant difference among them (P＜0.05). The expression of p27kip1 in their neighboring noncancerous tissues was higher than that in cancer tissue and normal tissue(P＜0.05). Conclusion The malexpression of PTTG and p27kip1 is closely associated with the development of HCC.

Liver neoplasms; PTTG; p27Kipl; Immunhistochemistry

R735.7

B

1671-8194（2013）29-0031-02

*通訊作者:E-mail: zhouxianghongsuc@163.com