五藤痛風飲對急性痛風性關節炎大鼠模型IL-1β、NO的影響

徐 靜 王曉璐 郭 慧 李 慧 梁 華*

（黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040）

五藤痛風飲對急性痛風性關節炎大鼠模型IL-1β、NO的影響

徐 靜 王曉璐 郭 慧 李 慧 梁 華*

（黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040）

目的 本實驗研究五藤痛風飲對高尿酸血癥并急性痛風性關節炎模型大鼠的IL-1β、NO指標的影響。方法 將Wister大鼠60只隨機分為6組，分別為空白對照組、模型對照組、五藤痛風飲高劑量、五藤痛風飲中劑量、五藤痛風飲低劑量、西藥對照組。每天給大鼠喂特制的酵母飼料，同時灌胃給腺嘌呤和治療藥各1次，連續給藥7d。于第5天除空白組外其余大鼠按照國外Coderre等經典方法略作改進造模，第7天給藥后采血、取關節液和滑膜，比較6組IL-1β、NO方面的變化。結果 五藤痛風飲高、中劑量組均可降低實驗大鼠的IL-1β水平，與模型組對照組比較，高劑量P＜0.01有極顯著差異，中劑量P＜0.05有顯著差異。結論 五藤痛風飲可以降低高尿酸血癥并急性痛風性關節炎模型大鼠的IL-1β、NO的分泌，對關節有治療和保護作用。

急性痛風性關節炎；尿酸鈉；IL-1β；NO

痛風是由尿酸鈉結晶沉積在關節周圍而引起的炎性反應，高尿酸血癥是其表現的主要特征。隨著人們生活水平的提高，高嘌呤、高蛋白食物攝入和飲酒量的增多，痛風的發病率也明顯上升。正確的使用中藥方劑既能有效的降低尿酸含量和炎癥因子的水平，又能保護腎臟減少不良反應。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗材料

①動物：Wister清潔級大鼠60只，體質量200g。北京維通利華實驗動物技術有限公司提供。②藥物。五藤痛風飲：忍冬藤、海風藤、雞血藤、絡石藤、青風藤、穿山龍、土茯苓、威靈仙等飲片組成。按比例配，加水煎煮，濃縮成濃度為7.2g/mL（高劑量用量）。陽性對照藥：秋水仙堿（西雙版納版納藥業有限責任公司），每片含秋水仙堿0.5mg，批號120313。配制成0.03mg/mL。尿酸鈉：SIGMAALDRICH公司，規格：5g/瓶，CAS：1198-77-2。配制成25mg/mL。腺嘌呤：SIGMA公司，制成10mg/mL的乳濁液，現用現配。特制酵母飼料：酵母干粉（英國OXIOD公司）與普通大鼠飼料混合，制成含量為10%的酵母飼料。氯化鈉注射液：500mL/瓶，批號：120517A3，哈爾濱三聯藥業有限公司提供。③試劑與儀器。試劑盒：NO、白介素-1β（IL-1β）ELISA試劑盒均由RD公司提供。儀器：KDC-40低速離心機、酶標儀、KQ-500E型醫用超聲波清洗器。

1.2 實驗方法

1.2.1 試劑的制備：尿酸鈉溶液的制備：取250 mg尿酸鈉晶體顆粒加入9mL生理鹽水，1mL吐溫80加熱攪拌，制成濃度為25mg/mL的尿酸鈉溶液。

1.2.2 動物分組：將Wister清潔級大鼠60只在相同環境條件下飼養2周，適應環境后隨機分為6組，分別為空白對照組、模型對照組、陽性藥對照組、五藤痛風飲高劑量、五藤痛風飲中劑量、五藤痛風飲低劑量。模型制備：除空白對照組外，每天各組大鼠喂特制的酵母飼料，同時上午定點按10mL/kg的劑量灌胃，即腺嘌呤和治療藥各2mL各一次，連續給藥7d。于第5天除空白組外其余各組大鼠按照國外Coderre等經典方法[1-5]略作改進造模，即給藥后30分鐘，立即以乙醇消毒局部，選大鼠右踝關節外側后方為穿刺點，針口斜面朝前方向與脛骨成45度夾角刺入踝關節腔，以6號針頭向關節腔一次性注入25mg/ mLMSU溶液0.2mL，以關節囊對側膨起為注入標準。第7天給藥后30分鐘后，10%水合氯醛麻醉，頸動脈取血，脫頸處死大鼠后取肝臟、腎臟和踝關節滑膜組織，制備血清和組織勻漿-70℃保存待測[6]。

1.2.3 數據處理與統計分析：用SPSS 13.0統計軟件進行數據分析。所有計量資料用（）表示。多組間均數比較采用單因素方差分析，兩組間均數比較采用t檢驗。

2 實驗結果

2.1 對血清中白介素-1β（IL-1β）的影響

由表1可見，模型對照組IL-1β的水平明顯高于空白對照組，具有極顯著差異（P＜0.01），說明造模成功。五藤痛風飲高、中、低劑量組和陽性對照組IL-1β的水平均低于模型對照組。其中，陽性對照組和高劑量組具有極顯著性差異（P＜0.01），說明兩組均有明顯抑制炎癥因子IL-1β的分泌。中劑量組與模型對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），但沒有高劑量組效果明顯。

2.2 對血清中一氧化氮（NO）的影響

由表1可見，模型對照組NO的水平也明顯高于空白對照組，具有極顯著差異（P＜0.01），說明造模成功。五藤痛風飲高、中、低劑量組和陽性對照組NO的水平均低于模型對照組。其中，陽性對照組和高劑量組具有極顯著性差異（P＜0.01），說明兩組均有明顯降低NO的含量。中劑量組與模型對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），但沒有高劑量組效果明顯。

3 討 論

痛風又稱“高尿酸血癥”，是由于嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄障礙所致的代謝性疾病。主要表現為急性關節炎反復發作、痛風石形成和關節畸形，嚴重者可導致骨關節病變和關節活動障礙與畸形，以及在病程后其出現腎尿酸結石和痛風性腎實質病變[7-8]。目前有些報道已經證實，急性痛風性關節炎因子是MSUC，當MSUC沉積到關節周圍時，可誘使炎癥細胞聚集到其周圍發生吞噬反應，且吞噬細胞破裂釋放出多種致炎因子，如白介素-1、白介素-6、白介素-8、NO、TNF-α、LTB4等[9]。快速降低或抑制這些因子的分泌，使炎癥得到緩解，從而有效的治療急性痛風性關節炎這一疾病。本實驗所用的五藤痛風飲是臨床常用方，具有利水滲濕、祛風通絡、清熱解毒、消腫止痛指之功。為進一步闡明五藤痛風飲抗炎的藥理作用，本實驗研究了其對急性痛風性關節炎模型大鼠的影響。實驗結果表明，五藤痛風飲有抑制急性痛風性關節炎大鼠血液中細胞因子IL-1β、NO的分泌和局部血管擴張，從而降低炎性反應保護關節[10]，為臨床提供參考依據。見表1。

[1] CoderreTJ,Wall PD.Ankle joint urate arthritis in rat:analternativeanimal model of arthritis to that produced by freund sadjuvant. [J] Pain,1987,28(3):379.

表1 五藤痛風飲對痛風性關節炎大鼠血清NO、IL-1β的影響（n=10，）

表1 五藤痛風飲對痛風性關節炎大鼠血清NO、IL-1β的影響（n=10，）

注：與正常組比較P＜0.05為顯著性差異，用Δ表示，P＜0.01為極顯著性差異，用ΔΔ表示；與模型組比較P＜0.05為顯著性差異，用*表示，P＜0.01為極顯著性差異，用**表示

組別數量(n) 劑量IL-1β(pg/mL)NO(umol/l)空白對照組10—51.33±13.888.66±2.28模型對照組10—101.32±18.78ΔΔ13.67±2.88ΔΔ五藤痛風飲高劑量107.2g/mL70.79±17.54**10.09±1.35**五藤痛風飲中劑量103.6g/mL81.74±18.37*11.22±1.46*五藤痛風飲低劑量101.8g/mL90.56±15.4712.27±1.95陽性對照組100.03mg/mL68.32±16.90**9.65±1.92**

[2] Coderre TJ,Wall PD.Ankle joint arthritis in rats:provide ausefull tool for the evaluation of analgesis and anti-arthritisagents[J]. Pharm Biochern Be-hav,1988,29(3):461.

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[5] 趙樑.中藥治療痛風性關節炎的實驗研究[D].廣州:廣東中醫藥大學,2002.

[6] 周敏,董娜,韓玉生,等.痹清膠囊對大鼠急性痛風性關節炎白細胞介素12及誘導型環氧化酶表達的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2008,(11):53-55.

[7] 陳心智,黃曉巍,歐喜燕.痛風安膠囊對高尿酸血癥大鼠血尿酸水平影響的實驗研究[J].長春中醫藥大學學報,2007,23(2):8-9.

[8] 王德軍,梁華.針刀治療痛風石對血尿酸指標影響的臨床研究[J].中醫藥學報,2010,38(3):110-111.

[9] 黃敬群,孫文娟,王四旺,等..尿酸鈉致急性痛風性關節炎模型大鼠與槲皮素的抗炎作用[J].中國組織工程研究,,2012,16(15):2815-2819..

[10] 周敏,萬麗鶴,溫薇.痹清膠囊抗尿酸鈉誘導大鼠足腫脹的急性關節炎的研究[J]中醫藥信息,2008,25(1):73-75.

R593.22

B

1671-8194（2013）22-0086-02

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