免疫球蛋白G在牙齦鱗狀細胞癌中的表達

蔡曉珊，朱洪光，牛 娜

(1濰坊市第二人民醫院，山東濰坊261041;2濰坊市人民醫院;3濰坊醫學院病理學教研室)

經典免疫學認為，IgG作為機體免疫系統中的最為重要的分子，僅由分化成熟的B淋巴細胞合成。近年來很多研究報道，非淋巴細胞包括上皮來源的癌細胞(肝癌、乳腺癌、鼻咽癌、卵巢上皮性癌、甲狀腺乳頭狀癌等)、增生性的上皮細胞、中樞神經系統神經元能夠產生IgG。但是IgG在牙齦癌中的表達及臨床病理學意義未有報道。2012年10月～2013年2月，我們應用免疫組化和原位雜交技術對IgG在牙齦鱗狀細胞癌中的表達和分布情況進行了研究。

1 材料與方法

1．1 材料 選取濰坊市人民醫院和濰坊市第二人民醫院2010年以來手術切除牙齦鱗狀細胞癌30例，其中高、中、低分化各10例;選取的蠟塊癌組織周邊均帶少許正常上皮組織。

1．2 方法

1．2．1 IgG在牙齦鱗狀細胞癌的表達檢測 IgG單克隆抗體購自SIGMA公司，原位雜交探針及相關試劑由濰坊醫學院牛娜博士提供，免疫組化PV9000試劑盒購自北京中杉試劑公司。免疫組化和原位雜交技術實驗步驟參照試劑說明書及相關文獻進行操作［1］。

1．2．2 結果判定 請三位病理醫師雙盲法閱片，按等級評分法，根據陽性染色強度和陽性細胞所占的百分比評估IgG的表達。免疫組化AEC顯色IgG的陽性染色為紅色，主要位于胞質。陽性結果判定根據以下兩方面的總分進行判斷:①按染色強度評分，0分為無色，1分為淡紅色，2分為淺紅色，3分為深紅色;②按陽性細胞所占的百分比評分，5個高倍鏡視野計數陽性細胞，陽性細胞率≤5%為1分，6% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分。兩者相乘分值＜3分為陰性(-)，3～4分為弱陽性(+)，5～8分為陽性(++)，9～12分為強陽性(+++)。原位雜交陽性信號為紫藍色，呈細顆粒狀。

1．2．3 統計學方法 采用SPSS13．0統計軟件，牙齦癌與正常上皮間IgG表達水平的比較應用秩和檢驗，牙齦癌中IgG的表達與癌組織分化程度的相關性采用等級相關分析。P≤0．05為差異有統計學意義。

2 結果

圖1 免疫組化原位雜交IgG表達特點

2．1 HE染色 正常牙齦組織各層結構清晰，牙齦癌組織的各層結構消失，癌細胞成團、索狀分布，高分化者有角化珠形成。在癌組織周邊有大量淋巴細胞浸潤，間質中可見小血管擴張充血。

2．2 免疫組化IgG表達特點 28例牙齦癌癌細胞胞質IgG染色呈現陽性反應，較強顯色多出現在低分化的牙齦癌病例中，且分布較均勻;高分化病例陽性顯色主要位于角化珠周圍。IgG在癌旁正常上皮內胞質也略有顯色，且在間質中的淋巴細胞呈強陽性表達(見圖1-①、②、③)。

2．3 原位雜交IgG的表達特點 在低分化鱗癌中IgG的陽性信號較強，主要位于胞質;間質中的淋巴細胞作為陽性對照，為強表達(見圖1-④、⑤)。

2．4 免疫組化IgG在牙齦癌組織和正常牙齦組織中表達水平的比較 在30例牙齦癌中有28例呈現IgG的陽性染色，且IgG在癌組織中的表達水平高于正常上皮組織，差異有統計學意義(Z=-2．140，P=0．032)。見表 1。

表1 IgG在牙齦癌和正常牙齦組織中表達水平的比較(例)

2．5 免疫組化IgG的表達強度與牙齦癌分化程度的關系 在牙齦癌組織中癌組織分化程度越低，IgG的表達強度越強。經Spearman等級相關分析表明，IgG的表達強度與牙齦癌的分化程度呈負相關(r=-0．509，P=0．004)。見表 2。

表2 IgG的表達強度與牙齦癌分化程度的關系(例)

3 討論

IgG是人體體液免疫系統中最為重要的蛋白。最近的研究已經表明，不僅成熟的B淋巴細胞能夠合成IgG，一些非淋巴細胞，包括腫瘤細胞和神經元等也能產生IgG。Niu等［2］研究發現，免疫球蛋白G及其受體在人體中央和外周神經系統中有廣泛的表達和分布。進而又應用免疫組化、原位雜交和RTPCR方法檢測到IgG抗體受體在眼內的上皮細胞和血管內皮細胞中有所表達［3］。以往對腫瘤免疫學的研究認為惡性腫瘤患者體內多存在機體免疫功能的異常，主要表現為細胞免疫受抑制，其效應細胞如NK細胞、LAK細胞、巨噬細胞功能減低，而在體液方面卻呈現出外周血IgG水平的升高。但是近年來的免疫學研究開始轉向腫瘤細胞本身。Kijanka等［4］研究發現，大腸癌患者血清免疫球蛋白IgG與正常人不同。大腸癌癌組織中IgG的表達水平與癌組織的分化程度、pTMN分期、淋巴結轉移情況及間質炎癥反應有明顯的相關性，腫瘤分化程度越低，IgG表達水平越高，此結果已從蛋白和RNA水平上均得到了證實［1］。另有國內學者應用免疫組化法檢測到IgG在卵巢上皮性癌組織中高表達，且表達強度與癌的病理分級呈正相關［5］。Chen等［6］研究發現，IgG輕鏈kappa在97．4%的肉瘤中表達，而在軟組織良性病變中僅有31．7%的表達;又通過原位雜交方法檢測到IgG1重鏈恒定區信使RNA的表達;且IgG在軟組織腫瘤中的表達與腫瘤的分級和增殖標記物(PCNA、Ki-67和 cyclin D1)有明顯的相關性。本研究從蛋白水平和RNA水平證明了IgG在牙齦癌癌細胞中的表達，進而發現IgG在癌組織中的表達較正常組織高，且其表達情況與腫瘤的分化程度呈負相關，即腫瘤分化程度越高，IgG表達越弱。提示IgG的表達與牙齦癌的發生、發展密切相關。

目前，對于非淋巴細胞產生的免疫球蛋白的功能研究甚少。Qiu等［7］用反義寡核苷酸和抗人的IgG抗體封閉了癌細胞產生IgG，均導致了細胞凋亡增加和腫瘤細胞生長抑制。之后，Qiu等［8］研究發現甲狀腺乳頭狀癌細胞可以產生IgG，且IgG能夠促進腫瘤細胞的生長和轉移。這與Niu等［1，9］的研究結果一致:IgG的表達與增殖標記物 (如cyclin D1、PCNA)、抗凋亡及核轉錄因子的表達呈正相關，與抗凋亡蛋白(如Bcl-2)的表達呈負相關;同時證實將腫瘤細胞分泌的IgG下調后可以促進腫瘤細胞凋亡，抑制其生長，其克隆形成能力和侵襲能力下降，提示腫瘤源性IgG為腫瘤維持其惡性行為所必需。

總之，越來越多的研究發現了IgG在生理和病理條件下的更多功能，這將為腫瘤的靶向治療提供更廣的應用前景。但腫瘤細胞產生的免疫球蛋白究竟通過何種機制影響腫瘤細胞的生長和凋亡，有待于進一步研究。

［1］Niu N，Zhang J，Huang T，et al．IgG expression in human colorectal cancer and its relationship to cancer cell behaviors［J］．Plos One，2012，7(11):e47362．

［2］Niu N，Zhang J，Guo Y，et al．Expression and distribution of immunoglobulin Gand its receptors in the human nervous system［J］．Int J Biochem Cell Biol，2011，43(4):556-563．

［3］Niu N，Zhang J，Sun Y，et al．Expression of IgG and its receptors in an immune privilege site:the eye［J］．Cell Mol Life Sci，2011，68(14):2481-2492．

［4］Kijanka G，Hector S，Kay EW，et al．Human IgG antibody profiles differentiate between symptomatic patients with and without colorectal cancer［J］．Gut，2010，59(1):69-78．

［5］張多加，黃晶．免疫球蛋白G在卵巢上皮性癌中的表達［J］．中國婦幼保健，2009，24(4):549-552．

［6］Chen Z，Huang X，Ye J，et al．Immunoglobulin G is present in a wide variety of soft tissue tumors and correlates well with proliferation markers and tumor grades［J］．Cancer，2010，116(8):1953-1963．

［7］Qiu X，Zhu X，Zhang L，et al．Human epithelial cancers secrete immunoglobuling with unidentified specificity to promote growth and survival of tumor cells［J］．Cancer Res，2003，63(19)，6488-6495．

［8］Qiu Y，Korteweg C，Chen Z，et al．Immunoglobulin G expression and its colocalization with complement proteins in papillary thyroid cancer［J］．Mod Pathol，2012，25(1):36-45．

［9］Zhang J，Zhang BG，Zhang XM，et al．SATB1 expression is associated with biologic behavior in colorectal carcinoma in vitro and in vivo［J］．Plos One，2013，8(1):e47902．