原發性高血壓4個相關候選基因多態性與天津漢族人群原發性高血壓的關系

張 凱，毛用敏

(1天津醫科大學，天津300070;2天津市胸科醫院)

目前發現至少150種原發性高血壓(EH)候選基因，對這些候選基因的研究大多局限于單個基因，而對涉及多系統、多基因的協同研究報道較少。2011年11月～2012年10月，我們觀察了天津市漢族人群中 SELE rs5361 A/C、eNOS rs1799983 G/T、GNB3 rs5443 C/T和AGT rs699 C/T 4個EH相關基因多態性，并探討了4個基因多態性與天津市漢族人群EH的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇同期天津市胸科醫院收治的EH患者177例(EH組)，均符合1999年WHO/ISH高血壓治療指南分類標準，即收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90 mmHg，并排除其他繼發性因素。其中，男95例、女82例，年齡(57.45±9.83)歲。同期選擇該院健康體檢者212例(對照組)，均無高血壓及其他心血管疾病治療史，無高血壓家族史。其中，男104 例、女108 例，年齡(55.25 ±9.73)歲。所有研究對象為天津市漢族人。

1.2 方法

1.2.1 DNA制備 取所有研究對象外周靜脈血3 mL，枸櫞酸鈉抗凝，按照天根血液基因組DNA提取試劑盒說明書方法提取基因組DNA。所得DNA溶液濃度在 30 ～200 ng/μL，OD260/OD280為1.7 ～2.0。

1.2.2 SELE rs5361 A/C、eNOS rs1799983 G/T、GNB3 rs5443 C/T和AGT rs699 C/T基因多態性分型 采用貝克曼—庫爾特公司的SNPstream基因分型系統的單堿基引物延伸—微陣列芯片法分型方法，嚴格按照貝克曼—庫爾特公司提供的標準操作進行。使用引物設計工具(http://www.autoprimer.com)設計每個SNP位點的一對PCR引物和一個用于單堿基延伸步驟的探針?；蚨鄳B性分型的主要步驟:PCR擴增與純化、單堿基延伸和芯片雜交反應。

1.2.3 統計學方法 采用SPSS16.0軟件軟件，計數資料以百分數表示，比較采用χ2檢驗、Fisher精確概率法。采用 PHASE v2.1［1，2］軟件進行單體型構建及頻率估計。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組基因型和等位基因頻率分布 經χ2檢驗，兩組基因型頻率符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，具有群體代表性。其基因型和等位基因頻率見表1～4。

2.2 兩組單體型分析比較 每種單體型在兩組間的分布比較差異無統計學意義(P均＞0.05)。見表5。

3 討論

表1 兩組SELE rs5361 A/C基因型和等位基因頻率比較

表2 兩組eNOS rs1799983 G/T基因型和等位基因頻率分布比較

表3 兩組GNB3 rs5443 C/T基因型和等位基因頻率分布比較

表4 兩組AGT rs699 C/T基因型和等位基因頻率比較

表5 兩組SNPs單體型分析比較(頻率值)

迄今為止，已報道的EH候選基因至少150余種。但EH是一種多因素復雜疾病，其發生是環境因素和遺傳因素共同作用、多個微效基因相互累加的結果，而且基因變異的性質和等位基因的頻率在不同人群之間存在較大的差異［3］。盡管國內外關于EH相關基因的報道很多，但研究結果多不一致且可重復性差。王佐廣等［4］發現，SELE rs5361在男性和女性EH之間存在明顯的相關性;李東寶等［5］發現，eNOSrs1799983與中國漢族人EH發病相關，并與GNB3 rs5443等位基因對EH的發生具有協同作用;王丹［6］發現AGT rs699多態性與山西地區人群患EH相關。而其他研究［7～10］卻得到相反的結論。此外，目前EH相關基因的研究多為單個位點的變異分析，同時對多個基因進行檢測分析的報道較少。

本研究采用基因芯片技術和病例對照研究方法，同時檢測4個 EH相關基因的 SNP位點，即SELE rs5361 A/C、eNOS rs1799983 G/T、GNB3 rs5443 C/T和AGT rs699 C/T，并對其頻率及單體型進行分析。結果發現，EH組與對照組中，4個EH相關基因的基因型和等位基因頻率比較差異無統計學意義;單體型分析結果顯示，兩組檢出的單體型主要有15種，在EH組中只有11種，但分布比較差異無統計學意義。說明檢測的4個EH相關基因與天津漢族人群EH發病無關。

本次研究雖然分析了多個EH候選基因，但是每個候選基因的位點僅為一個。而一個位點的變異能否對基因產物的表達產生較大的作用，仍有較大的爭論。因此，與EH相關基因多態性對EH的影響有待進一步探討和研究。

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