肺癌組織中NEP、APN的表達變化及意義

孫發政，種曉迪

(1棗莊市中區人民醫院，山東棗莊277100;2棗莊市立三院)

中性肽鏈內切酶 (NEP)是存在于細胞膜表面的Ⅱ型膜蛋白，屬含鋅金屬肽酶M13家族中的一員;氨基肽酶N(APN)也是一種是Ⅱ型膜蛋白，因能夠從肽、酰氨和芳酰氨的N端水解氨基酸而得名。既往，這兩種蛋白主要用于急性白血病和惡性淋巴瘤等血液系統腫瘤的診斷與鑒別，現發現其對非造血系統腫瘤的診斷、鑒別診斷也有重要指導意義。本研究采用免疫組織化學法檢測NEP、APN在肺癌、肺良性腫瘤及正常肺組織中的表達，并分析其與臨床病理參數之間的關系，為肺癌的診斷、鑒別診斷及預后判斷提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2004年7月～2010年12月在棗莊市中區人民醫院胸科經手術治療、術前均未行放化療及其他相關治療、病理診斷明確、病史完整的病例作為研究對象。肺癌73例，病理分型為鱗癌27例，腺癌30例，小細胞肺癌16例;TNM分期Ⅰ期15例，Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期40例;有淋巴結轉移41例，無淋巴結轉移32例。肺良性腫瘤組織26例，取自結核球11例，炎性假瘤6例，錯構瘤8例，纖維化結節1例。正常肺組織20例，取自距癌腫邊緣5 cm以上的正常肺組織，并經病理檢查證實無癌細胞。

1.2 方法

1.2.1 NEP、APN檢測方法 采用免疫組織化學染色SP法。根據病理結果，選取肺癌組織豐富的石蠟塊，連續切片，厚度4μm。脫蠟、水化、微波抗原修復;加入過氧化氫，正常非免疫動物血清封閉，孵育10 min;滴加一抗，4℃過夜;滴加生物素標記二抗，鏈霉菌抗生物素一過氧化物酶溶液，孵育10 min;DAB顯色，蘇木精復染。NEP、APN陽性細胞為細胞膜或細胞質呈棕黃色顆粒。依據染色程度及陽性細胞數判斷:無陽性染色及陽性細胞為-，著色淡或陽性細胞＜25%為+，著色適中或陽性細胞占25%～50%為++，著色深或陽性細胞≥50%為+++。+～+++者均判為陽性表達。

1.2.2 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件。構成比或率的比較采用χ2或 Fisher's檢。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NEP、APN在不同肺組織中的表達 肺癌組織中NEP、APN陽性表達率分別為32.88%(24/73)、41.11%(30/73)，肺良性腫瘤組織中分別為88.46%(23/26)、15.38%(4/26)，正常肺組織中分別為 95.00%(19/20)、5.00%(1/19);肺癌組織中NEP、APN陽性表達率與肺良性組織、正常肺組織比較，P 均 ＜0.01。

2.2 NEP、APN表達與肺癌臨床病理參數的關系NEP、APN表達與肺癌的臨床分期、組織分化程度及有無淋巴結轉移有關(P均＜0.05)，見表1。

3 討論

NEP有著廣泛的組織定位和作用底物，通過裂解生物活性肽，間接調解蛋白質代謝，對細胞生長、分化、增殖和凋亡具有重要的生理調節作用［1］。最新研究認為，NEP在不同組織中的表達及活性變化與某些疾病的發生和預后有一定聯系［2］。NEP減少可以引起神經源性肽分泌增加而降解減少，神經源性肽是導致肺癌發病的自分泌/旁分泌生長因子［3］。APN一般均勻地分布在細胞膜表面，當腫瘤細胞形成克隆時，APN分子自動遷移到細胞與細胞的接觸部位。腫瘤細胞通過該蛋白酶對基底膜成分(基膜和Ⅳ型膠原蛋白)的水解作用，進行組織消化穿透;同時誘導周圍間質細胞的肌纖維母細胞化，及間質中腫瘤血管的增生，促進腫瘤的浸潤和轉移［4］。

表1 NEP、APN表達與肺癌臨床病理參數的關系(例)

Shousha等［5］研究發現，在肝硬化發展中，出現NEP染色方面的變化具有重要臨床意義;隨著肝纖維化加重或廣泛腫瘤轉移，NEP染色逐漸下降，其病變機制尚不明確。而在肺癌患者的血漿及腫瘤中，APN 表達明顯升高［6，7］。本研究結果發現，NEP在肺癌組織中的陽性表達率明顯降低(32.88%)，且多為弱陽性;在肺良性腫瘤組織(88.46%)和正常肺組織組織(95.00%)中的表達率較高，多為強陽性。而APN在肺癌組織中的表達(41.10%)明顯高于肺良性腫瘤(15.38%)和正常肺組織(5.00%)，并且在肺良性腫瘤和正常肺組織中APN的表達多呈弱陽性。這一結果提示，NEP和APN表達及活性變化與肺癌的發生有一定聯系，同時檢測NEP、APN對于肺惡性腫瘤的診斷及與鑒別診斷有重要價值。Nahye Myong［8］在相關研究中，未發現吸煙和非吸煙人群中NEP表達存在顯著差異。本組研究發現，NEP、APN在吸煙者和非吸煙者腫瘤組織中的表達無明顯統計學差異。筆者認為，雖然吸煙是導致肺癌的重要誘因，但尚不能認為吸煙是導致NEP、APN在肺癌中表達降低或缺失的潛在機制。

有研究發現，NEP表達下降可促進前列腺癌、腎癌患者術后的局部復發［9］，而APN陽性表達的腫瘤患者往往惡性程度高、預后差［10］，本研究發現，NEP、APN表達與肺癌臨床分期、組織分化程度、淋巴結轉移有關(P均＜0.05)。即肺癌臨床分期晚、分化程度越低及有淋巴結轉移者，NEP表達陽性率越低;而APN表達正好相反，即肺癌臨床分期越晚、分化程度越低及有淋巴結轉移者，APN表達陽性率越高。這說明NEP、APN肺表達對肺癌惡性程度的判斷、預后評估及制定下一步治療方案有重要指導意義。

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