血清葡萄糖—6—磷酸異構酶在類風濕關節炎診斷中的價值

譚維賢

[摘要] 目的 探討血清葡萄糖-6-磷酸異構酶（GPI）在類風濕關節炎（RA）診斷中的臨床價值。 方法 采用ELISA法檢測GPI和抗環瓜氨酸肽抗體（抗CCP）；間接免疫熒光法檢測抗角蛋白抗體（AKA）；速率免疫散射比濁法檢測類風濕因子（RF）。共檢測65例類風濕關節炎（RA組）、85例其他風濕病患者（非RA組）和60例健康正常成人（正常對照組）。 結果 4項血清學指標比較，GPI和抗CCP在診斷RA中有著較高的靈敏度和特異性；RF的靈敏度雖然最高，但特異性卻最差。 結論 GPI對RA早期診斷有著重要的意義，且與抗CCP、AKA、RF無明確的相關性，GPI與RF聯合檢測更有利于RA的早期診斷。

[關鍵詞] 類風濕關節炎；葡萄糖-6-磷酸異構酶；類風濕因子；抗環瓜氨酸肽抗體；抗角蛋白抗體

[中圖分類號] R593.22 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）06-0108-02

類風濕關節炎（rheumatoid arthritis，RA）是由于自身免疫發生的一種關節疾病，其發病機制尚不清楚，隨病情發展可出現骨及骨骼肌的萎縮，最后導致關節強直。由于其致畸致殘率較高，因此，對于類風濕關節炎的防治重點在于早期診斷和早期治療，而對于已患病者而言，及時做到病情控制或改善預后則更重要。傳統的血清學指標被廣泛應用于RA的診斷中，其中類風濕因子（RF）的檢測具有較高的敏感性，但由于其特異性差，因此很難將其作為早期診斷提供可靠依據。近年來的研究發現，血清葡萄糖-6-磷酸異構酶（GPI）、抗環瓜氨酸肽抗體（抗CCP）和抗角蛋白抗體（AKA）等血清學指標與RA等自身免疫性疾病的關系密切，特別是在RA的早期診斷和預后判斷中具有重要價值[1]。為此，本研究檢測了65例RA、85例其他非RA風濕病患者和60例健康正常成人的GPI、抗CCP、AKA和RF等4項血清學標志物，以探討它們在類風濕關節炎診斷中的價值，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

RA組：類風濕關節炎患者65例，均為2009年1月～2010年8月期間我院皮膚科門診或住院患者，男33例，女32例，年齡18～70歲，平均（45±12）歲。所有研究患者均符合美國風濕病學會1987年修訂的診斷分類標準。非RA組：非RA的其他風濕病患者85例，符合國內和國際相應的診斷標準，均為同期我院皮膚科門診或住院患者，男39例，女46例，年齡17～72歲，平均（45±11）歲。其中系統性紅斑狼瘡（SLE）患者23例，強直性脊柱炎（As）患者32例，原發干燥綜合征（ss）患者l6例，混合性結締組織病（MCTD）患者l4例。正常對照組：選擇無自身免疫性疾病臨床體征及影像學表現、各種自身免疫性疾病血清學指標檢測陰性，且無肝、腎、心血管及糖尿病等疾病的健康體檢者60例作為健康對照，其中男29例，女31例，年齡24～67歲，平均（43±10）歲。

1.2 實驗方法

1.2.1 GPI檢測 采用上海北加生化試劑有限公司生產的雙抗體夾心法（ELISA）GPl檢測試劑盒。嚴格按照試劑說明書進行操作；其中包括6個GPI標準品（0、0.16、0.33、1.0、2.0、20 μg/mL）和陰、陽性對照；待檢血清1∶10稀釋，GPl值I>0.2 ug/mL為陽性。

1.2.2 抗CCP檢測 采用德國歐蒙醫學試驗診斷有限公司提供的體外定量檢測CCP（IgG型）抗體ELISA試劑盒。嚴格按照試劑說明書進行操作；待檢血清1∶100稀釋，結果>5 U/mL為陽性。如果抗體超過曲線范圍，將血清適度稀釋后重新進行檢測。

1.2.3 AKA檢測 AKA間接免疫熒光法（IIF）檢測試劑購自德國歐蒙醫學試驗診斷有限公司，待檢血清1∶10稀釋，熒光顯微鏡下觀察結果。食管組織角質層出現線性、板層狀的典型熒光染色者判斷為陽性。

1.2.4 RF檢測 采用美國貝克曼公司的IMMAGE特定蛋白分析儀及其配套速率散射比濁法試劑進行檢測。RF>30 U/mL為陽性。

1.3統計學方法

采用SPSS13.0統計軟件進行統計分析，應用χ2檢驗分析各指標陽性率之間的差別。計算GPI、抗CCP、AKA和RF的敏感性、特異性，率的比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 四項血清學指標的陽性檢出率（表1）。

2.2 四項血清學標志各自單獨對診斷RA的特異性比較

GPI（96.7%）、抗CCP（94.1%）和AKA（95.3%）對診斷RA具有很高的特異性；RF（76.0%）的特異性相對較低。

2.3 四項血清學標志聯合檢測對診斷RA的靈敏度和特異性比較

GPl、抗CCP和AKA分別與RF聯合檢測均可明顯提高RF對RA的診斷特異性；GPl與RF聯合檢測對RA的診斷特異性可達l00%，靈敏度也明顯高于其他組合。見表2。

3討論

類風濕關節炎（RA）是一種致畸很高的自身免疫性疾病[2]。RF是美國風濕病協會推薦用于RA分類診斷的唯一血清學指標，目前常用于RA的輔助診斷，其本質是抗變性IgG分子Fc片斷的自身抗體。由于RA的檢測技術簡便、而快速、且靈敏度高，因此在RA的診斷中得到了廣泛的應用。但是RF檢測結果的特異性不高，主要是由于SLE等多種自身免疫性疾病以及一些感染性疾病患者的血清中均可出現RF的增高的情況，而在某些正常的老年人中亦有一定的陽性率，因此極大地限制了PF在RA診斷中的臨床應用。本研究的結果也證實了這一點，4項血清學指標各自單獨診斷RA的比較中RF的敏感度最高，但特異性最差。近年來的研究發現，AKA、抗CCP及GPl等血清標志物在RA的早期診斷中具有較好的敏感度和很高的特異性[3]。

AKA是1979年YOUNG等[4]發現并命名的，是一組不溶性的纖維蛋白，為細胞骨架的一種構成成分，IgG型的AKA抗體對RA具有較高的特異性。AKA在RA患者血清和關節液中均可檢出，甚至在RA早期和臨床表現出現前即可呈陽性，且與RA病情的嚴重程度及活動性相關；而AKA檢測呈陽性往往提示RA預后不良。因此，AKA對RA的早期診斷和預后判斷都有意義，但由于AKA的檢測易受操作者的主觀因素影響，且抗原底物的個體差異性及其底物的獲取和保存不易，操作不易標準化等實際困難[5]，限制了AKA在RA輔助診斷中的推廣應用。

2000年荷蘭學者Schellekens等合成了CCP[6]，并利用ELISA方法在RA患者體內檢測到了抗CCP。在RA早期即可出現抗CCP，并已證實對骨侵蝕的發生有很高的預測價值[7]，通過檢測抗CCP可盡早對陽性患者進行干預、阻斷疾病的進展，有效減少骨侵蝕和關節破壞。本研究中RA組患者抗CCP的檢出率高達52.3%，僅次于RF和GPI，但其特異性明顯高于RF，對RA的早期診斷有重要作用。

GPI是一種多功能蛋白質分子，廣泛存在于人體各種組織細胞中，其主要功能是催化6-磷酸葡萄糖和6-磷酸果糖之間的轉化，是糖酵解、糖異生的主要酶類。同時GPI也具有細胞生長因子活性，可誘導髓樣干細胞向單核細胞及B細胞向漿細胞的分化。推測GPI的細胞生長因子活性可能對RA患者的血管增生、滑膜增殖和骨破壞起一重要作用，同時增加了RA的易感性[8]。GPI雖然是一種全身細胞普遍存在的具有自身抗原性的蛋白質，但在RA中的陽性率要遠高于其他自身免疫性疾病[9]。MATSU-MOT0等[10]用免疫組化的方法研究了GPI的定位分布，發現在各種組織的細胞內，GPI均勻分布，但在關節腔內，特別在軟骨表面，有一層薄而清晰的GPI沉著線。本研究中，單獨檢測GPI對診斷RA的靈敏度和特異性分別為67.7%和96.7%；聯合RF檢測后，盡管靈敏度有所下降，但特異性達到l00%。另有研究表明[11，12]，GPl濃度與RA患者關節腫脹和骨侵蝕性程度相關，而與RF、AKA及抗CCP無明顯相關性，提示GPI有可能成為獨立于RF、AKA和抗CCP之外的新的標記物，從而增強RA診斷的靈敏度和特異性，很有希望廣泛應用于RA的診斷及活動性的判斷，在一定程度上可以彌補RF的不足。用于檢測GPI的ELISA方法簡單、不需要特殊設備，非常適用于普通醫療機構的臨床實驗室推廣使用，具有廣泛的臨床應用和研究前景。

[參考文獻]

[1] 曾穎瑜，陶怡. 類風濕關節炎早期診斷的血清學檢查研究進展[J]. 廣東醫學，2008，29（3）：518-520.

[2] 姚茹冰，蔡輝. 類風濕關節炎早期診斷標準及方法的研究進展[J]. 實用醫學雜志，2006，22（21）：2561-2563.

[3] 許育兵，張速林. 聯合檢測抗CCP抗體、AKA與GPI在類風濕性關節炎診斷中的應用[J]. 華南國防醫學雜志，2009，23（5）：35-36，39.

[4] Young BJ，Mallya RK，Leslie RDG，et al. Antikeratin antibodies in rheumatoid arthritis[J]. Br Med J，2006，14：97.

[5] 陸紅，夏勇，周蔚，等. 四項指標聯合檢測在類風濕關節炎診斷中的應用[J]. 中國熱帶醫學，2009，9（1）：72-73.

[6] Schellekens GA，Visser H，Jong BA，et al. The diagnostic properties of rheumatoid arthritis recognizing a cyclic eitrul-linated peptide[J]. Arthritis Rheum，2005，43（1）：155-163.

[7] 王海，何建發，李榮藻. 抗環瓜氨酸抗體陽性的早期類風濕關節炎患者骨侵蝕的臨床觀察[J]. 實用醫學雜志，2007，23（15）：2361-2363.

[8] 趙冠飛，李永哲. 葡萄糖-6-磷酸異構酶與類風濕關節炎研究進展[J]. 中華風濕病學雜志，2007，11（12）：750-754.

[9] 陳鋒，江訓良，謝小兵，等. 血清葡萄糖-6-磷酸異構酶（GPI）與自身免疫性疾病（AID）相關性研究[J]. 實用預防醫學，2009，16（1）：235-237.

[10] Matsumoto，Lee DM，Goldbach-mansky R，et al. Low prevalence of antibodies to glucose-6-phosphate isomerase in patients with rheumatoid arthritis and a spectrum of other chronic autoimmune disorders[J]. Arthritis Rheum，2006，48（4）：944-954.

[11] 張旗，朱新興，伊心浩，等. 類風濕關節炎血清葡萄糖-6-磷酸異構酶治療前后變化特點[J]. 軍醫進修學院學報，2009，30（1）：15-17.

[12] 李慧穎，姜國平，呂英春，等. 葡萄糖-6-磷酸異構酶在類風濕關節炎中的診斷意義[J]. 吉林醫學，2009，30（11）：961-963.

（收稿日期：2012-11-16）