抑郁狀態對大鼠胃潰瘍愈合質量及EGF、EGFR的影響

李紅艷　王道坤　段永強

【摘要】 目的 探討抑郁狀態對實驗大鼠胃潰瘍愈合質量及EGF、EGFR的影響及作用機制。方法 除空白對照組大鼠外，剩余動物于乙酸誘導胃潰瘍模型成功后，隨機分為模型對照組及抑郁狀態組；給予抑郁狀態組大鼠慢性不可預見性應激刺激21d，空白對照組及模型對照大鼠正常飲水，飲食，不予任何刺激。21d后殺檢，肉眼及鏡下觀察潰瘍愈合情況，檢測血清、胃組織EGF及EGFR的含量。結果 鏡下觀察空白組大鼠胃黏膜完好無損，模型對照組大鼠胃潰瘍愈合情況較抑郁狀態組良好。模型對照組大鼠EGF及EGFR的含量均高于抑郁正常組（P<0.05）。結論 抑郁狀態可降低胃潰瘍愈合質量，其作用機制與抑制EGF及EGFR作為保護性因子的表達有關。

【關鍵詞】 抑郁狀態；胃潰瘍；表皮生長因子；表皮生長因子受體

胃潰瘍（gastric ulcer，GU）是內科常見病，多發病。目前潰瘍病的近期愈合率顯著提高，但復發率仍居高不下。潰瘍愈合高質量組與低質量組，1年潰瘍復發率分別為4.5%和75%^[1]。因此，提高潰瘍愈合質量，對于緩解患者痛苦，降低潰瘍復發率等都具有十分重要的意義。抑郁癥是一種以顯著而持久的心境低落為主要臨床表現的精神疾病，給患者帶來極大的痛苦和心理傷害^[2]。隨著生活節奏的日益緊張，社會工作競爭的日益增加，抑郁癥的患病率已在逐年上升^[3]。現代醫學認為胃潰瘍形成后，如果不良情緒刺激仍未解除，病情會進一步加重^[4]。本實驗通過觀察大鼠胃潰瘍愈合情況及檢測胃組織中表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）及表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）水平，欲探討抑郁狀態對實驗大鼠胃潰瘍愈合質量的影響機制。

1 材料與方法

1.1 動物 SPF級Wistar大鼠52只，雌雄各半，體重（200±30）g，由甘肅中醫學院實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（甘）2011-0001-0001166。

1.2 試劑與儀器 冰乙酸，分析純，w/%≥99.5，天津市百世化工有限公司產品，批號20120618；水合氯醛，分析純AR，天津歐博凱化工有效公司產品，批號20120115；EGF試劑盒，購自北京中杉金橋生物技術有限公司產品，批號20120601A。ES-1000E電子天平，長沙湘平科技發展有限公司生產；TGL-13低溫電動離心機，金壇市富華儀器有限公司產品；HY-4氣浴恒溫振蕩器，金壇市富華儀器有限公司產品；Bio-rad 680酶標儀，美國BIO-RAO產品；Reiehert-Jung 820-Ⅱ型超薄切片機，德國Reiehert-Jung公司產品；OYLMPUS生物顯微鏡，日本OLYMPUS光學儀器有限公司產品。

1.3 胃潰瘍模型的建立 冰乙酸誘導大鼠胃潰瘍模型的制備。隨機數字表法分出10只大鼠作為空白對照組動物，其余42只大鼠參照文獻^[5]的造模方法。劍突下0.5 cm縱向切開腹壁約2 cm，自肝后找到胃，暴露胃體于外并在胃前壁體竇交界處靠胃竇側漿膜面，用微量注射器注入0.03 mL冰乙酸，然后將胃還納入體內，逐層縫合，碘伏消毒皮膚創口。

1.4 動物分組 確定胃潰瘍模型制備成功后，按隨機數字表法將剩余的40只大鼠分為模型對照組及抑郁狀態組2組，每組20只，均標準飼料喂養，自由飲水。

1.5 抑郁狀態模型的建立 采用Willner^[6]不可預測性長期溫和應激刺激造模方法并略加改進，抑郁狀態組大鼠接受21 d應激刺激，包括晝夜顛倒、禁食24 h、禁水24 h、4℃冷水強迫游泳5 min、40℃高溫環境1 h、倒立束縛2 min、夾尾1 min、勻速震蕩5 min、墊料潮濕24 h、單籠飼養24 h，以上10種不同的應激因子順序隨機，每天抽取2-3種刺激，同種刺激不連續出現，使動物無法預料刺激的發生。空白對照組及模型對照大鼠正常飲水，飲食，不予任何刺激。

1.6 標本采集與處理方法 在抑郁狀態組大鼠末次應激刺激后，所有大鼠禁食不禁水24 h，腹主動脈采血5 mL于真空管內，傾斜放置30 min后，放入低速離心機，以3000 r/min，離心30 min，取上清2 mL，入-20 ℃冷藏；剝離胃，結扎幽門，于十二指腸和食管處結扎胃，100 g/L 甲醛10 mL至賁門注入胃腔，固定30 min；以潰瘍病灶或潰瘍瘢痕平行于胃長軸方向的最長徑為中心取材，100 g/L 甲醛固定，備用制作病理切片。于潰瘍周圍取一塊組織放入生理鹽水中沖洗，吸干，用電子天平稱取0.3-0.4 g，加入9倍量的生理鹽水，低溫快速勻漿制成100 g/L 的組織勻漿液，將勻漿液移入離心管中，3000 r/min，離心30 min，取上清液，-20℃冷藏保存。

1.7 檢測指標 觀察大鼠一般情況；肉眼及鏡下觀察潰瘍愈合情況，采用ELISA法檢測血清及胃組織EGF含量及免疫組化SP法檢測胃組織EGFR的含量。

1.8 統計學方法 實驗數據以Mean士Std.Error表示，SPSS17.0軟件進行One-way ANOVA的樣本均數多重比較的F檢驗，P<0.05有統計學意義。

2 結 果

2.1 一般情況對比 除空白對照組大鼠外，其余大鼠于造模后均出現精神差，主動活動減少，進食減少，被毛無澤，糞便干溏不調等。以上情況均于造模后第5天開始逐漸好轉。

2.2 大體標本觀察 空白對照組：未見明顯胃腸脹氣，胃內基本無殘留食物；胃黏膜呈淡紅色，皺襞連續，光整無破壞。模型對照組 腹腔可見偶明顯胃腸脹氣，較抑郁狀態組為輕；漿膜面少許粘連；胃內潴留物量約占1/5胃容量、有輕度異味；胃竇區黏膜皺襞欠完整，周圍可見糜爛點及小范圍瘢痕收縮，部分可見潰瘍周圍黏膜水腫。抑郁狀態組：腹腔可見明顯胃腸脹氣，范圍至回腸末端，漿膜面有明顯組織粘連；胃內潴留物量約占3/5胃容量、有明顯異味；胃竇處黏膜均有一圓形或橢圓形潰瘍，潰瘍中心蒼白，表面覆污濁腐苔，周圍明顯充血水腫。

2.3 光學顯微鏡下觀察 空白對照組：胃竇黏膜黏膜層結構完整，腺體排列整齊，黏膜下層未見炎性細胞浸潤，漿膜層完整。抑郁狀態組：潰瘍造模處黏膜缺損，部分已及肌層，腺體正常結構消失；表層可見大量壞死組織；潰瘍邊緣黏膜炎性細胞浸潤嚴重；黏膜下層可見新生肉芽組織，新生血管數量較少。模型對照組：潰瘍病灶處可見新生胃上皮細胞，但排列欠整齊，病灶周圍偶見少量壞死組織；黏膜全層有少量炎性浸潤；新生肉芽組織較多。

2.4 ELISA法檢測血清及胃組織EGF的結果 MG大鼠中血清及胃組織中EGF含量均較BG、DG增高，差別有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.5 免疫組化SP法檢測胃組織EGFR的含量 高倍鏡下可見EGFR陽性標本，表現為棕黃色顆粒。主要表達在黏膜層與黏膜下層中。

空白對照組大鼠腺細胞間散在少量的棕黃色顆粒。抑郁狀態組大鼠新生上皮細胞及肉芽組織中僅見極少量棕黃色顆粒。模型對照組大鼠新生上皮細胞及肉芽組織中可見較多的棕黃色顆粒。

3 討 論

古代中醫文獻中并無“胃潰瘍”的記載，據其臨床癥狀，多屬中醫學“胃脘痛”范疇，亦與“痞滿”“吞酸”等病證相關。對本病病因的認識，歷代文獻多有記載，大體可歸納為4類：六淫傷中、飲食不節、情志內傷及脾胃虛弱。如《黃帝內經素問·舉痛論篇第三十九》寒邪致病的特點^[7]：“寒氣客于胃腸之間，膜原之下，血不得散，小絡急引故痛”。如李東垣在《東垣試效方·心胃及腹中諸痛門》^[8]中指出飲食不節的病因：“夫心胃痛及腹中諸痛，皆因勞役過甚，飲食失節，中氣不足，寒邪乘虛而入客之，故卒然而作大痛”。對胃脘痛的辨證治療，首位醫家當推漢代張仲景。以“按之不痛為虛，痛者為實”的原則辨其虛實，這兩大辨證原則均為后世治療本病的準繩。其創制的許多方劑如黃芪建中湯，小建中湯，芍藥甘草湯等皆為后世治療胃脘痛的常用效方。

抑郁癥屬現代醫學中精神病的范疇，在中醫古代文獻中無本病名記載。根據抑郁癥臨床表現，一般將其歸于“郁證”“臟躁”“百合病” “不寐”等病的范疇中。對于本病病因的認識，在《黃帝內經素問·疏五過論》^[7]中將其總結為：“離絕菀結，憂恐悲怒，五臟空虛，血氣離守”，認為本病是因為情志因素刺激的情況下，五臟不養，氣血虧虛離散而致。情志病發生后可影響其他疾病的發生或預后，如唐容川在《血證論·臟腑病機論》^[9]中指出：“木之性主乎疏泄，食氣之胃，全賴肝木之氣以疏泄之，則水谷乃化。設肝木不能疏泄水谷，滲泄中滿之證在所不免”，他認為肝氣郁結，就會影響脾胃功能，出現中滿不消、腹脹、泄瀉等病證。這說明抑郁狀態的持續存在會影響胃腸道正常生理功能，而產生一系列疾病或加重已有的胃腸道癥狀。

EGF具有促進上皮增殖，組織修復和細胞保護作用，在保護胃黏膜免受損傷因子破壞，維持胃腸黏膜完整性方面起著非常重要的作用^[10]。EGF都要通過結合其受體EGFR發揮生物學效應。

本實驗證明，抑郁狀態下的大鼠血清及胃組織EGF的含量、EGFR表達減少，明顯低于模型對照組；胃潰瘍面積明顯大于模型對照組。EGF作為保護性因子，結合其受體EGFR可加快潰瘍愈合速度，提高組織修復能力，保證潰瘍愈合質量。在胃黏膜經冰乙酸燒灼形成潰瘍后，無應激刺激的大鼠機體內EGF及EGFR明顯增高，從而加速潰瘍愈合速度、提高潰瘍愈合質量。抑郁狀態可降低乙酸性大鼠胃潰瘍愈合質量，減慢胃潰瘍愈合時間。

本研究突出中醫學中的“整體觀念”和“情志致病”的原始創新，為臨床認識和治療疾病提供一定的實驗研究依據探討其作用機制并為其治療胃潰瘍提供實驗依據。

參考文獻

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