特發性血小板減少性紫癜患者外周血T淋巴細胞亞群變化及臨床意義

肖惠煊　周建中　莫煥桐　王奕忠

[摘要] 目的 探討應用流式細胞檢測技術測定特發性血小板減少性紫癜患者外周血中血小板相關免疫球蛋白水平及T淋巴細胞亞群變化情況。方法 采用流式細胞儀檢測我院25例特發性血小板減少性紫癜患者（觀察組），對照組（正常健康者）25例，對兩組患者外周血中血小板相關免疫球蛋白水平及T淋巴細胞亞群變化比較分析。 結果 觀察組患者外周血中血小板相關免疫球蛋白水平均明顯高于對照組（P<0.05）；觀察組患者的CD3+，CD3+CD4+亞群明顯較對照組降低（P<0.05），而其CD3+CD8+亞群明顯較對照組升高（P<0.05），且CD3+CD4+/ CD3+CD8+比值顯著降低（P<0.05）。 結論 特發性血小板減少性紫癜患者外周血中血小板相關免疫球蛋白水平明顯增高，T淋巴細胞亞群變化明顯，與該病免疫機制有關。

[關鍵詞] 特發性血小板減少性紫癜；血小板相關免疫球蛋白；T淋巴細胞亞群；流式細胞儀

[中圖分類號] R554+.6；R446.63 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）09-124-03

免疫性血小板減少性紫癜（immune thrombocytopenic purpura，ITP），是較為常見的出血性疾病，由血小板自身抗體誘導血小板破壞引起的自身免疫性疾病，慢性ITP起病隱襲，癥狀多變，感染時除發現血小板減少外，可無明顯臨床癥狀和體征，出現皮膚瘀點和瘀斑[1]。目前臨床病情復雜的準確診斷有一定困難，外周血中血小板相關免疫球蛋白水平及T淋巴細胞亞群變化情況已成為ITP臨床診斷、指導治療季評估預后的只要指標，本研究通過應用流式細胞檢測技術測定特發性血小板減少性紫癜患者外周血中血小板相關免疫球蛋白水平及T淋巴細胞亞群變化情況，探討其臨床診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2011年9月～2012年9月入院治療的35例特發性血小板減少性紫癜患者，男15例，女20例，年齡17～54歲，平均（38.5±5.8）歲，均為出診患者，均符合《血液病診斷及療效標準》[2]的相關ITP診斷標準，排除其他免疫性疾病。對照組35例為正常入院進行體檢的健康人群，肝腎功能正常，無免疫性疾病，外周血細胞計數正常，男16例，女19例，年齡18～56歲，平均（38.9±5.5）歲，兩組患者在年齡、性別方面差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 熒光標記單克隆抗體：鼠抗人CD3- PECY5/CD4-FITC/CD8-PE三色標記和同型對照鼠抗人IgG1-PECY5/IgG1-FITC/IgG-PE均購自法國Immunotech公司。Beckman Coulter EPICS XL型流式細胞儀購自美國Beckman-Coulter公司。

1.2.3 T淋巴細胞亞群變化檢測 采取患者新鮮的100 μL抗凝血標本于樣品測定管內，標出處理采用CD41-PE進行熒光標記處理，然后分別以鼠抗人IgG（γ）-FITC、IgM（μ）-FITC及IgA（α）-FITC單克隆抗體標記血小板，并且用同型對照單克隆抗體同法標記并處理對照組樣本，洗滌后待上機檢測。將流式細胞儀調整最佳工作狀態后，以血小板設門，每份樣品收集檢測1000個細胞，分別讀取CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+亞群的百分比。

1.3 統計學處理

采用SPSS18.0統計學軟件對樣本檢測數據進行分析，結果采用（）形式表示，采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

3 討論

特發性免疫性血小板減少性紫癜是自身免疫性疾病，主要由血小板自身抗體誘導血小板破壞引起，主要臨床表現為出血，黏膜及皮膚出血，血小板減少，嚴重者如顱內出血可危及生命。根據患者具體發病年齡、臨床表現及血小板持續減少時間等，分為急性型和慢性型，急性型多見于兒童，常為自限性，慢性型好發于青年女性，多發病于20～50歲之間，女性發病率較男性高2～3倍，絕大多數慢性ITP患者缺乏前驅癥狀或病因。ITP的發病機制復雜多樣，慢性ITP起病隱襲，多數患者病因不清少數與感染有關。目前研究普遍認為是機體細胞免疫異常導致血小板自身抗體產生，單核-巨噬細胞系統中體液免疫介導的血小板破壞增加、骨髓巨核細胞損傷或功能異常使血小板產生降低，目前有更多的研究證實越來越多的淋巴細胞異常存在于患者體內，可能是ITP發病起重要作用[3]。血小板自身抗體可能來源于機體免疫系統針對血小板骨架蛋白或糖蛋白（platelet surface glycoproteins，GP）如GPⅡb/GPⅢa、GPIb/IX產生的自身抗體并結合在血小板膜上，也可能是血清中抗體分子或抗原-抗體復合物在血小板表面的粘著或覆蓋。目前很多研究結果也表明，ITP患者除自身體液免疫異常外，還伴有細胞免疫異常，T淋巴細胞亞群、細胞因子表達及功能改變與發病機制有密切關系，感染發生時，巨噬細胞上的Fc受體和C3b受體數量增多，親和力增高，使裹有PAIgG的血小板更易被破壞[4]。同時，細菌可直接損害巨核細胞，使血小板的產生減少。

臨床上對ITP患者的診斷技術主要以血小板相關免疫球蛋白（platelet-associated immunoglobin，PAIg）和T淋巴細胞亞群檢測為主，慢性ITP患者曾經接受長期多種治療（包括糖皮質激素、免疫抑制劑及脾切除術等），可抑制抗體產生，導致抗體滴度未達到檢測最低限。因此，血小板相關抗體的檢測對于初診患者的意義較大[5-6]。本研究通過應用流式細胞檢測技術測定特發性血小板減少性紫癜患者外周血中血小板相關免疫球蛋白水平及T淋巴細胞亞群變化情況進行分析討論，結果顯示觀察組患者外周血中血小板相關免疫球蛋白水平均明顯高于對照組（P<0.05）；觀察組患者的CD3+、CD3+CD4+亞群明顯較對照組降低（P<0.05），而其CD3+CD8+亞群明顯較對照組升高（P<0.05），且CD3+CD4+/CD3+CD8+比值顯著降低（P<0.05），與以往的相關研究結論基本一致。

綜上，通過應用流式細胞檢測技術測定特發性血小板減少性紫癜患者外周血中血小板相關免疫球蛋白水平及T淋巴細胞亞群變化情況的分析，ITP患者外周血淋巴細胞亞群水平存在異常情況，提示T細胞亞群水平及分布異常在發病過程起重要作用，患者體內細胞免疫和體液免疫紊亂，因此動態觀察外周血淋巴細胞亞群水平的變化對于了解ITP患者病情，判斷療效及預后均有一定意義[7-10]。

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（收稿日期：2013-04-08）