武靴藤中皂苷的分離與結構鑒定

張新勇　霍立茹　劉麗芳　王宇新

[摘要]目的 對我國廣西的蘿藦科武靴藤屬植物武靴藤Gymnema sylvestre葉進行化學成分研究。 方法 采用硅膠柱色譜、低壓柱色譜和反相中壓柱色譜等方法進行化學成分的分離純化，依據理化性質和波譜數據進行結構鑒定。 結果 共分離得到9個化合物，其中4個皂苷前文已發表。其余5個化合物經波譜解析和理化常數測定為3個皂苷和2個皂苷元，分別是12-異丁烯基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖-28-O-β-D-吡喃葡萄糖-齊墩果酸酯[12-isobutylene-3-O-β-D-glucopyranosyl（1→6）-β-D-glucopyranosyl oleanolic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester，1]，12-異丁烯基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖-28-O-β-D-吡喃葡萄糖（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖-齊墩果酸酯[12-isobutylene-3-O-β-D-glucopyranosyl（1→6）-β-D-glucopyranosyl oleanolic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl（1→6） -β-D-glucopyranosyl ester，2]，12-異丁烯基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖（1→6）吡喃木糖-28-O-β-D-吡喃葡萄糖-齊墩果酸酯[12-isobutylene-3-O-β-D-glucopyranosyl（1→6）-β-D-glucopyranosyl（1→6）-β-D-xylopyranosyl oleanolic acid 28-O-β-D- glucopyranosyl ester，3]，齊墩果酸（oleanolic acid，4）和長刺皂苷元（longispinogenin，5）。 結論 化合物均為首次從原植物中分離得到。

[關鍵詞]武靴藤；皂苷；齊墩果酸；長刺皂苷元

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）09-33-05

糖尿病是由遺傳和環境因素相互作用而引起的常見病，臨床以高血糖為主要標志，常見癥狀有多飲、多尿，多食以及消瘦等，糖尿病可引起身體多系統的損害。引起胰島素絕對或相對分泌不足以及靶組織細胞對胰島素敏感性降低，引起蛋白質，脂肪，水和電解質等一系列代謝紊亂綜合征，其中以高血糖為主要標志。據國際糖尿病聯盟（IDF）估計，截止到2007年我國糖尿病患病人數約為3980萬，2025年預計將達到5930萬[1]。中年人成為高發人群， 平均發病年齡為45歲， 呈年輕化的趨勢。醫學上稱這些人為糖耐量減退者。糖尿病是代謝紊亂造成的全身慢性進行性疾病，屬于中醫消渴范疇。隨著人們生活水平的提高及生活方式的改變，全世界糖尿病患者人數與日俱增，已成為繼惡性腫瘤及心血管疾病之后的第三大疾病，嚴重威脅著人類的健康。

近年來研究發現，中草藥的降低血糖作用有比較突出的特點，表現為多靶點、多機制以及多功能、協同性等優勢，而且具有副作用小、作用持久等特點。武靴藤早在我國漢代就已在民間作為治療消渴癥而廣泛使用，而印度則廣泛用于治療胃病以及作為利尿劑和抗糖尿病藥物使用[2-3]。產于我國西南地區的民間草藥武靴藤一方面具有阻止葡萄糖進入細胞內的作用，另一方面能抑制腎上腺素刺激肝臟而制造葡萄糖的功能，從而降低體內血糖水平，而且其還能促進胰島細胞的分泌作用，從而提高血液中的胰島素含量，進而起到降糖作用[4]。其不僅能改善葡萄糖水平，還可促使胰腺中的胰島細胞的修復再生。是可供開發的為數不多的具有降糖潛力的中草藥之一。

1 實驗材料

藥材：為蘿藦科武靴藤屬植物武靴藤Gymnema sylvestre Retz. Schult. 產地：云南騰沖。

儀器：氫譜和碳譜為Bruker ACF-300核磁共振光譜儀測定，分子量測定用英國WG公司ZAB-HS快原子轟擊質譜儀（FAB），熔點測定為Yancco微量熔點儀，紅外測定為美國伯樂公司的FTS-60型紅外儀，

試劑：柱色譜160～200目粗孔硅膠和400目薄層色譜用硅膠（青島海洋化工廠），中壓柱色譜用填料硅膠采用日本富士球形（10 μm）C18鍵合反向硅膠。

2 提取和分離

2.1 皂苷的分離

武靴藤15 kg，甲醇浸泡24 h，提取液回收有機溶劑后，得濃縮溶液，再用極性有機溶劑萃取，得萃取液，再回收有機溶劑后，得藥材提取物，然后拌硅膠，上樣，以CHCl3-CH3OH梯度洗脫，取其中CHCl3-CH3OH（95︰5）組分拌細孔硅膠，進行低壓柱色譜（0.8 MPa），分離得到9個皂苷化合物，其中4個化合物已另文發表[1]。上述CHCl3-CH3OH（90︰10）組分用反相C18中壓柱進行層析分離，甲醇-水（20︰80-80︰20）梯度洗脫，分得三個皂苷成分。

2.2 苷元的分離

取武靴藤皂苷若干，用適量甲醇-水溶液溶解，再以稀鹽酸溶液水解，回流10 h，放冷，再滴稀堿溶液；然后減壓濃縮，得皂苷水解產物。殘留物石油醚反復洗滌，干燥，得粗皂苷元部分。苷元用適量環己烷加熱溶解，濾過；環己烷溶液經濃縮、拌樣后進行硅膠柱色譜，洗脫劑為環己烷-苯混合溶劑梯度洗脫，得純苷元，經結構解析為齊墩果酸和長刺皂苷元。中和后的水解溶液，經高效薄層層析并與標準糖對照分析，顯示為葡萄糖、木糖成分。

3 皂苷的結構解析

4 皂苷元的鑒定

化合物4和5經鑒定分別為齊墩果酸（oleanolic acid）和長刺皂苷元 （longispinogenin），與文獻一致[8-9]。

5 討論

近年來研究發現，中草藥的降低血糖作用溫和持久，副作用小，且作用機理具有多效應、多位點及多功能等特點。武靴藤植物作為草藥在印度民間廣泛使用，具有多種用途，分別用于治療胃病、糖尿病和利尿劑。武靴藤主要分布于我國西南地區，如廣西、云南、四川、貴州等省份，在我國南方地區民間也作為治療消渴癥的草藥常有使用。

我們分別就采自廣西和云南的武靴藤植物進行了化學成分研究，從中分得的主要有效成分均為皂苷類化合物，而且其苷元母核主要是齊墩果酸和長刺皂苷元；其糖基主要有葡萄糖、葡萄糖醛酸和木糖成分。

我們對武靴藤水提取物、醇提取物及其分離的皂苷成分的藥效研究表明，均顯示了較好的降糖活性，下一步我們將進一步按照新藥申報資料的有關技術要求進行降糖活性方面的體內實驗，力爭將其開發成新藥應用于臨床。

[參考文獻]

[1] 周文銳，劉麗梅.谷胱甘肽過氧化物酶-1在糖尿病及其血管并發癥中的研究進展[J].上海醫學，2007，30（12）：942-945.

[2] Sastri BN.In the wealth of India，raw materials[J].Delhi：CISR，1956，29（5）：275.

[3] Gharpurey KG.Indian Med[J].Gaz，1926，61（3）：155.

[4] Aoki T，Shido K，Takahashi Y，et al.Structures of 3，28-O-bisglycosidic triterpenoid saponins of Fatsia japonica [J]. Phytochemistry，1981，20（7）：1681-1686.

[5] 張新勇，霍立茹，劉麗芳，等.武靴藤葉化學成分研究[J].中草藥，2011，42（5）：866-869.

[6] Cioffi G，Vassallo A，Lepore L，et al. Antiproliferative oleanane saponins from Polysciasguilfoylei [J]. Nat Prod Communications，2008，3（10）：1667-1670.

[7] Calis I.Saponin，Sapogenol II.The main saponin from the roots and rhizomes of Primula auriculata，P. Megaseifolia and P.longipes（Primulaceae）[J].Doga，1989，13（2）：111-120.

[8] Thompson MJ，Dutky SR，Patterson GW，et al.NMR spectra of C-24 isomeric sterols [J].Phytochemistry，1972，11（5）：1781-1790.

[9] Mahato SB，Pal BC.New triterpenoid extractives from Lemaccreocereus chichipe[J]. J Chem Soc，1987，57（3）：629.

（收稿日期：2013-04-11）