番茄紅素對刀豆蛋白誘導的小鼠肝纖維化的影響

袁永翀　趙凱

[摘要]目的 觀察對刀豆蛋白誘導鼠肝損干預前后的肝纖維化半定量計分（SSS計分）變化和小鼠肝臟大體形態及病理學HE染色結果變化，探討番茄紅素對刀豆蛋白誘導的小鼠肝纖維化的影響。 方法 昆明小鼠64只，隨機分為4組：正常組8只、模型組8只、預防組8只及治療組40只，治療組按治療時間（1～5周）分為5組，每組8只。刀豆蛋白A（Con A）經腹腔注射8周建立肝纖維化小鼠模型。預防組在建模的同時、治療組在建模成功后予番茄紅素20 mg灌胃給藥，每天1次，觀察肝纖維化半定量計分變化水平，同時觀察小鼠肝臟大體形態及病理學HE染色結果，并與正常組及模型組比較。 結果 預防組及治療組肝病理學染色結果好轉明顯。 結論 番茄紅素能有效對抗實驗小鼠肝纖維化，抑制了肝纖維化的發展速度，并可能逆轉肝纖維化。

[關鍵詞]番茄紅素；肝纖維化半定量計分；小鼠肝臟病理學；HE染色

[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）09-30-03

肝硬化（hepatic cirrhosis）是臨床常見的慢性進行性肝病，由一種或多種病因長期或反復作用形成的彌漫性肝損害，肝硬化的主要發病機制是進行性纖維化。刀豆蛋白誘導的小鼠肝纖維化模型已經被許多研究證實與HBV致肝纖維化的發病機制類似，本研究試圖探討在刀豆蛋白誘導的小鼠肝纖維化模型下用番茄紅素干預治療，探討番茄紅素預防和治療肝纖維化的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

（1）實驗用昆明小鼠：體重分別在18～22 g的小鼠64只，來自江蘇大學醫學院動物實驗中心，均在實驗中心短期喂養1周適應后開始試驗。（2）番茄紅素及Con A試劑：購自上海英軒醫藥有限公司的番茄紅素純度為99%；購自sigma公司實驗用的Con A。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗小鼠分組 所有實驗小鼠隨機分為正常對照組（N組8只）、模型組（M組8只）、建模同時即給予番茄紅素灌胃組簡稱預防組8只和建模后給予番茄紅素灌胃組簡稱治療組40只一共四大組；治療組分別按番茄紅素灌胃時間分為1～5組，每組8只。

1.2.2 實驗小鼠的處理 正常對照組每周1次腹腔注射PBS；模型對照組每周1次腹腔注射Con A-PBS溶液20 mg/kg；預防組按模型組造模，同時予番茄紅素20 mg灌胃給藥，每天1次；治療組按模型組造模8周后停止注射Con A，然后每天1次給予番茄紅素20 mg灌胃。

1.2.3 實驗小鼠的處死 所有小鼠的處死方法均為摘除眼球取血，將取血后的小鼠給予頸椎脫臼方法處死，正常對照組、模型對照組及預防組于第8次注射后處死然后取出肝臟。治療組分別于治療1、2、3、4、5周后每次處死8只小鼠（灌胃后24 h）。

1.3 試驗小鼠觀察指標及檢測

（1）半定量計分系統（SSS）：分析肝纖維化半定量計分（2）肝組織病理學檢查：采用HE染色、進行病理學檢查。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 小鼠的一般情況

在正常對照組和預防組小鼠日常飲食、活動正常，沒有明顯變化；模型對照組及治療組小鼠在建立肝纖維化模型階段即出現日常飲食、活動減少，而治療組隨著番茄紅素灌胃時間（治療時間）的延長，試驗小鼠逐漸恢復飲食、活動增加。治療期間未出現小鼠死亡發生和明顯不良反應。

2.2 各組肝纖維化半定量計分變化

3 討論

肝硬化是我國的常見病、多發病，乙型肝炎病毒（HBV）的慢性感染是造成肝硬化的主要原因。肝纖維化是發展為肝硬化的必由階段，是肝硬化的前期表現。肝纖維化是指由各種致病因子所致肝內結締組織異常增生，導致肝內彌漫性細胞外基質過度沉淀的病理過程它不是一個獨立的疾病，而是許多慢性肝臟疾病均可引起肝纖維化。目前研究表明肝纖維化可以逆轉，因此對肝纖維化治療的研究，具有重要的現實意義和社會意義。

在我國乙型肝炎病毒（HBV）的慢性感染是造成肝硬化的主要原因，肝纖維化是發展為肝硬化的必由階段。Con A誘導小鼠肝纖維化與HBV致肝纖維化的發病機制類似[1]。用Con A誘導小鼠肝纖維化來研究乙型肝炎病毒導致肝纖維化是一種理想選擇。肝細胞炎癥壞死是肝纖維化與肝硬化的啟動因素，又是其向前進展的推動因素，其中脂質過氧化在肝細胞損傷誘導的肝纖維化病理中有重要作用。

我們已經觀察到番茄紅素能有效對抗實驗小鼠肝纖維化，本實驗結果顯示番茄紅素預防組及治療組肝纖維化程度明顯減輕，治療組隨著治療時間的延長，纖維組織增生和炎細胞浸潤逐漸改善。

番茄紅素是一種是所有類胡蘿卜素中最有效的單線態氧淬滅劑[2]，其中尤以抗氧化，防止心血管疾病，提高免疫力和抗癌作用突出，目前認為：（1）番茄紅素具有清除活性氧及抗脂質過氧化作用，特別是番茄紅素能夠使肝微粒體還原型輔酶Ⅱ，細胞色素P450，還原型輔酶Ⅱ等活性下降 [3]；并可能通過抑制肝臟的脂質過氧化反應達到保護肝臟功能的作用[4]。從而減輕了肝細胞和肝臟結構的破壞，抑制肝纖維化的發展；（2）一些研究提示肝細胞凋亡可能是許多肝病肝細胞死亡的共同通路，凋亡細胞的死亡可能與肝纖維化或硬化發生有關[5]，并明確了肝纖維化的細胞學基礎在于肝星狀細胞（HSC）活化，肝細胞損傷尤其是肝細胞凋亡小體直接刺激HSC 活化等[6]，成為肝纖維化治療的熱點。番茄紅素是否可能以通過改變肝細胞異常凋亡率或改善肝細胞凋亡失衡，從而抑制了肝纖維化的發展速度，目前還沒有明確結論，我們將進一步檢驗和討論。

總之，番茄紅素作為一種有益營養成分，經濟實用，有望作為人群抗肝纖維化食品或藥物加以推廣。

[參考文獻]

[1] 李鴻立，田聆，魏于全，等.刀豆素蛋白A誘導小鼠肝纖維化模型的建立[J].免疫學雜志，2004，20（5）：390.

[2] 楊甲平，齊寶寧.番茄紅素對CCl4致大鼠慢性肝損傷的保護作用[J].現代中醫藥2009，29（6）：64-66.

[3]潘紅志，常東，那立欣，等.番茄紅素對鎘損傷大鼠氧化應激影響[J].微量元素與健康研究，2007，24（2）：6-7.

[4] 張煒，范鈺，朱麗群，等.番茄紅素對小鼠肝纖維化的治療作用[J].時珍國醫國藥，2008，14（7）：219-221.

[5] 劉梁英，李孝生，萬曉強.川守嗪和大黃酸對肝細胞增殖和凋亡的影響[J].中華肝臟病雜志2006，14（3）：219-221.

[6] 周滔，劉成海.肝細胞凋亡在肝纖維化中的作用[J].肝臟，2007，12（6）：503-505.

（收稿日期：2013-03-27）