失神經(jīng)支配面肌超微結(jié)構(gòu)及形態(tài)學(xué)變化的研究

王峰　張寶林　馮瑞錚　余睿芳

[摘要] 目的 研究大鼠失神經(jīng)支配眼輪匝肌超微結(jié)構(gòu)及膠原纖維含量變化，為選擇最佳修復(fù)時(shí)機(jī)和制定治療方案提供理論依據(jù)。 方法 制作大鼠失神經(jīng)支配眼輪匝肌模型，分正常組，術(shù)后1、3 d，1、2、4、6周組標(biāo)本，透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)，Masson染色檢測(cè)膠原纖維與肌細(xì)胞面積比的變化。 結(jié)果 （1）不同時(shí)間組肌組織中膠原纖維與骨骼肌細(xì)胞面積比總體有差異（P<0.05），并且隨著失面神經(jīng)時(shí)間的延長(zhǎng)呈遞增趨勢(shì)；（2）失神經(jīng)肌組織超微結(jié)構(gòu)由正常的結(jié)構(gòu)功能，隨時(shí)間的延長(zhǎng)，肌纖維膜系統(tǒng)腫脹、排列紊亂、核固縮、線粒體腫脹變性、溶酶體增生等并進(jìn)一步加重。 結(jié)論 隨著失神經(jīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，膠原纖維增多、肌肉萎縮越明顯，肌組織失神經(jīng)損傷時(shí)間越長(zhǎng)，損傷越嚴(yán)重，應(yīng)在發(fā)現(xiàn)損傷后盡早修復(fù)，以恢復(fù)面神經(jīng)支配功能。

[關(guān)鍵詞] 失神經(jīng)支配；骨骼?。怀⒔Y(jié)構(gòu)；膠原纖維；大鼠

[中圖分類號(hào)] R622 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2013）09-18-02

各種原因造成的面癱是臨床上常見疾病，嚴(yán)重影響患者的身心健康。失神經(jīng)支配會(huì)導(dǎo)致骨骼肌細(xì)胞萎縮和功能障礙[1]，所以面部表情肌萎縮機(jī)制逐步得到了研究者的重視[2]，但有關(guān)于面肌失神經(jīng)支配后在不可逆萎縮時(shí)間程度改變的尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)報(bào)道。因此，我們建立動(dòng)物面肌失神經(jīng)支配模型，通過對(duì)其超微結(jié)構(gòu)及膠原纖維含量變化及其發(fā)生不可逆萎縮機(jī)制的研究，最終為臨床面神經(jīng)損傷性疾病判斷預(yù)后，選擇最佳修復(fù)時(shí)機(jī)和制定治療方案提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與模型的制備

1.2 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.1 肌組織Masson染色光鏡觀察 選用縱切面切片，用BI2000醫(yī)用圖像分析系統(tǒng)測(cè)定膠原纖維和肌細(xì)胞面積比。

1.2.2 肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)電鏡觀察 將眼輪匝肌，切成1 mm的小粒，浸入2%戊二醛前固定。再經(jīng)1%鋨酸后固定，丙酮系列脫水，618環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片機(jī)切片，片厚0.05?m。經(jīng)醋酸鈾和枸櫞酸鉛雙染色后，用JEM-1011透射電鏡觀察肌纖維超微結(jié)構(gòu)變化、照相。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 Masson 染色

2.2 透射電鏡

正常組肌肉肌原纖維排列整齊，Z線清晰，線粒體均勻分布于肌原纖維之間，排列規(guī)則，未見溶酶體。術(shù)后1周組肌細(xì)胞的線粒體、細(xì)胞核及肌質(zhì)網(wǎng)的改變不明顯。術(shù)后2周組肌細(xì)胞的線粒體及肌質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張，Z線較清晰，線粒體嵴變短，細(xì)胞核輕度擴(kuò)大，糖原顆粒減少，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)疏松，溶酶體少見。術(shù)后4周組，肌細(xì)胞線粒體較明顯腫脹，Z線模糊，線粒體嵴變短或消失，肌質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，細(xì)胞核變化不明顯，糖原顆粒減少，溶酶體增多，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)松散。術(shù)后6周組，肌絲肌節(jié)排列紊亂，肌質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張明顯，肌細(xì)胞線粒體退化數(shù)目減少，部分空泡化，糖原顆粒減少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)大，肌原纖維紊亂，有斷裂及融合的現(xiàn)象，細(xì)胞核略大，細(xì)胞核染色變淺，有空泡出現(xiàn)。

3 討論

骨骼肌的發(fā)生、功能和結(jié)構(gòu)的維持均受運(yùn)動(dòng)神經(jīng)支配和調(diào)節(jié)，一旦失去神經(jīng)支配，骨骼肌必然會(huì)出現(xiàn)體積變小、收縮功能喪失等肌萎縮變化[4]，通過對(duì)萎縮肌肉的組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)[5-6]，骨骼肌失神經(jīng)支配后肌纖維間膠原纖維增生，結(jié)締組織積聚，毛細(xì)血管及其他小血管被多層致密膠原圍繞，使其與相鄰肌纖維分離，極大地影響了血管床和肌纖維間的物質(zhì)交換，也影響了再支配過程中神經(jīng)軸突的長(zhǎng)入和延伸。Lu等[7]的研究表明，增生的膠原纖維可能是再生神經(jīng)重新支配骨骼肌的一個(gè)物理屏障，使神經(jīng)無法與變細(xì)的骨骼肌纖維接觸，造成失神經(jīng)骨骼肌功能恢復(fù)不佳。我們研究發(fā)現(xiàn)，隨肌組織失神經(jīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，膠原纖維增多，肌肉萎縮越明顯，可作為反映失神經(jīng)后肌肉形態(tài)學(xué)的重要變化的指標(biāo)。骨骼肌失神經(jīng)支配后數(shù)小時(shí)可出現(xiàn)神經(jīng)終板腫脹、線粒體破壞及突觸數(shù)量減少等。隨著失神經(jīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，這些改變進(jìn)一步加重，肌纖維進(jìn)行性萎縮變細(xì)，肌絲、肌節(jié)的排列在不同的部位存在不同程度的紊亂[8]，影響骨骼肌細(xì)胞的能量代謝，從而促進(jìn)了失神經(jīng)骨骼肌的萎縮[9]。

綜上所述，面肌失神經(jīng)支配后，隨著失神經(jīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，膠原纖維增多、肌肉萎縮越明顯，并且隨著失面神經(jīng)時(shí)間的延長(zhǎng)呈遞增趨勢(shì)。隨失神經(jīng)支配時(shí)間的延長(zhǎng)肌組織超微結(jié)構(gòu)逐漸紊亂且功能減退喪失，若得不到及時(shí)有效的補(bǔ)救措施，將導(dǎo)致不可逆性的損害。肌組織失神經(jīng)損傷時(shí)間越長(zhǎng)，損傷越嚴(yán)重，應(yīng)在發(fā)現(xiàn)損傷后盡早修復(fù)，以恢復(fù)面神經(jīng)支配功能。

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（收稿日期：2013-04-07）