海口地區(qū)兒童感染流感嗜血桿菌的分布情況及耐藥性分析

黃育敏，涂志華

流感嗜血桿菌(Hemophilus influenzae,Hi)是一種苛養(yǎng)革蘭陰性菌,常寄居于正常人呼吸道，當人機體抵抗力下降時，可引起人類呼吸道感染，兒童原發(fā)呼吸道感染之后可以繼發(fā)本菌引起的中耳炎、腦膜炎和菌血癥等。隨著流感嗜血桿菌分離率的不斷提高和其耐藥性的不斷上升，其致病性已受到普遍關注。現對2010—2011年海口地區(qū)兒童感染的流感嗜血桿菌進行回顧性分析，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

1.1.1標本來源收集2010年1月—2011年12月海口地區(qū)住院患兒臨床送檢標本2 730份，包括痰液、咽拭子、血液、腦脊液、胸腹水等標本，共分離非重復流感嗜血桿菌158株。

1.1.2儀器及試劑全自動細菌鑒定儀分析儀VITE32及配套試劑，購自法國梅里埃公司。

1.1.3藥敏紙片和培養(yǎng)基氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢呋辛、頭孢他啶、左氧氟沙星、阿奇霉素、復方新諾明和Ⅴ+Ⅹ、Ⅴ、Ⅹ 因子、頭孢硝噻吩(Nitrocefin)紙片為英國Oxoid 公司產品；巧克力培養(yǎng)基和嗜血桿菌試驗培養(yǎng)基(HTM)藥敏平板購自廣州迪景生物有限公司，質控菌株為ATCC49247。

1.2方法

1.2.1細菌培養(yǎng)和鑒定標本接種于巧克力平板，置5%二氧化碳(CO2)、35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24 h，挑取透明或半透明、扁平、濕潤的露滴狀疑似菌落做革蘭染色和衛(wèi)星試驗，同時進行Ⅴ、Ⅹ、Ⅹ+Ⅴ因子需求試驗進行篩選，全部菌株用VITEK32系統(tǒng)鑒定到種。

1.2.2β-內酰胺酶測定用Nitrocefin 紙片按說明書測定被試菌株的β-內酰胺酶。

1.2.3藥敏試驗采用臨床實驗室標準協會(CLSI)推薦的紙片擴散法(Kirby-Bauer)進行，根據CLSI 2010年頒布的判斷標準進行藥敏結果判斷[1]。

1.3統(tǒng)計學方法采用世界衛(wèi)生組織(WHO)提供的WHONET 5.6軟件進行耐藥性統(tǒng)計分析，耐藥率比較采用SPSS 11.0軟件進行χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1流感嗜血桿菌檢出分布情況158株流感嗜血桿菌主要分離自痰標本125株，占79.1%；其次為咽拭子18株(占11.4%)、腦脊液5株(占3.2%)、血標本4株(占2.5%)和其他標本6株(占3.8%)。見表1。

2.2β-內酰胺酶檢出情況158 株流感嗜血桿菌中，用Nitrocefin紙片法檢測有15株產β-內酰胺酶,產酶率為9.5% (15/158)，藥敏紙片法檢測氨芐西林的耐藥率為10.8%(17/158)；其中產酶株對氨芐西林全部耐藥，非產酶株中有2株對氨芐西林顯示耐藥，但兩種方法檢測氨芐西林的耐藥性比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.15,P>0.05)。

2.3藥敏結果158株流感嗜血桿菌對復方新諾明的耐藥率高達74.1%，對其他6種常用抗菌藥物均呈較低的耐藥水平，耐藥率均<11%。見表2。

表1　流感嗜血桿菌在各種標本中的分布情況

表2158株流感嗜血桿菌對7種常用抗菌藥物的敏感性〔n(%)〕

Table2The sensitivity of 158 strains of Haemophilus influenzae to 7 common antibiotics

抗菌藥物流感嗜血桿菌耐藥率 敏感率 氨芐西林17(10.8)138(87.3)阿莫西林/克拉維酸16(10.1)142(89.9)左氧氟沙星12(7.6)146(92.4)復方新諾明117(74.1)41(25.9)頭孢呋辛15(9.5)143(90.5)阿奇霉素10(6.3)148(93.7)頭孢他啶11(7.0)147(93.0)

3　討論

流感嗜血桿菌是兒童呼吸道感染的常見的條件致病菌，但當患兒機體免疫力低下時可進一步引起敗血癥、腦膜炎等嚴重全身性感染。本組數據顯示：2 730份患兒臨床送檢標本中共分離非重復流感嗜血桿菌158株，陽性率為5.8%，因該菌人工培養(yǎng)時需要特殊的Ⅴ因子和Ⅹ因子，因此培養(yǎng)較為困難，導致該菌臨床檢出率較低。本研究結果可見流感嗜血桿菌主要分離自痰標本,高于許浦生等[2]報道；其次為咽拭子、腦脊液和血標本等。

本研究藥敏結果顯示，流感嗜血桿菌對氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、左氧氟沙星、頭孢呋辛、頭孢他啶、阿奇霉素的耐藥率均小于11%，這些藥物對流感嗜血桿菌具有較好的抗菌活性，可作為臨床治療的首選藥物。阿莫西林/克拉維酸、頭孢呋辛、頭孢他啶對β-內酰胺酶均有抑制或抵抗作用，但作用方式有區(qū)別，克拉維酸是β-內酰胺酶不可逆的競爭型抑制劑；頭孢呋辛屬第二代頭孢菌素，對多種β-內酰胺酶較穩(wěn)定；頭孢他啶屬第三代頭孢菌素，對β-內酰胺酶高度穩(wěn)定，三者隨著對β-內酰胺酶穩(wěn)定性的升高，對流感嗜血桿菌的敏感率也相應升高，分別為89.9%、90.5%、93.0%，此數據可作為抗菌藥物選擇參考。

國內外對流感嗜血桿菌的耐藥性研究始于20世紀70年代，發(fā)現耐氨芐西林的主要耐藥機制是細菌產生了質粒介導的β-內酰胺酶，80年代初發(fā)現了不產β-內酰胺酶的氨芐西林耐藥株。其耐藥率呈現出明顯的地區(qū)差別,在2.3%～58%之間[3-6],并有逐年上升的趨勢。本研究結果顯示對耐氨芐西林耐藥率為10.8%,與俞桑潔等[5]和汪復等[6]的報道接近,但明顯低于陳慧莉等[7]和柯永堅等[8]的報道。該菌β-內酰胺酶的產生率為9.5%，明顯低于胡艷華等[9]的報道，藥敏顯示β-內酰胺酶陽性株對氨芐西林全部耐藥，有2株β-內酰胺酶陰性而對氨芐西林耐藥(BLNAR)菌株出現，但兩種方法對氨芐西的耐藥性檢出無差異，因此用β-內酰胺酶檢測來快速預測對氨芐西林的耐藥性還是可行的。

1CLSI.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[S].2010，M100-S20.

2許浦生,許建邦,王艷明.綜合醫(yī)院下呼吸道感染病原菌分離及動態(tài)變化[J].廣東醫(yī)學,2010,31(5):623-626.

3Stratchounski LS,Kretchikova OI,Reshedko GK,et al.Antimicrobial susceptibility of nasopharyngeal isolates of Haemophilus influenzae from healthy children in day-care centers:Results of multicentre study in Russia[J].Int J Antimicrob Agent,2001,18(4):347-351.

4Kwak YH,Jung HS,Park SE,et al.Serotype and antimicrobial susceptibility in clinical isolates of Haemophilus influenzae from Korean children in prevaccination era[J].J Korean Med Sci,2000,15(6):616-622.

5俞桑潔,沈敘莊,袁林,等.兒童社區(qū)獲得性呼吸道感染的肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌耐藥性監(jiān)測[J].中國抗感染化療雜志,2005,5(5):297-300.

6汪復,朱德妹,胡付品,等.2009 年中國CHINET細菌耐藥性監(jiān)測[J].中國感染與化療雜志,2010,9(5):325-334.

7陳慧莉,范紅,陶傳敏,等.連續(xù)3年流感嗜血桿菌對常用抗生素的耐藥性監(jiān)測[J].華西醫(yī)學,2007,22(2):246-247.

8柯永堅,朱紅軍,肖亮生,等.流感嗜血桿菌耐藥性分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2010,6(28):575-576.

9胡艷華，劉東華，魯艷.孝感地區(qū)兒童呼吸道流感嗜血桿菌感染現狀[J].中華全科醫(yī)學,2011,9(10):1549-1550.