脾虛證客觀化研究進展

張繼偉

·綜述·

脾虛證客觀化研究進展

張繼偉

證候客觀化研究一直是中醫研究領域中的熱點和焦點，脾虛證客觀化研究取得了很大成就。本文從診斷標準、動物模型和客觀指標3個方面進行綜述。指出目前存在診斷標準未統一、動物模型的合理性和準確性尚需提高、缺乏特異性的客觀指標、實驗研究未與臨床實踐相結合幾個方面問題，并提出相應對策。

脾虛證； 動物實驗； 客觀化

脾為后天之本，脾臟病以虛證為主。脾虛證是一組能夠比較集中地反映脾的生理功能不足的綜合征候群，包括脾氣虛、脾陽虛、脾陰虛及脾虛兼證等多種證型［1］。20世紀80年代以來，證候客觀化研究一直是中醫研究領域中的熱點和焦點，目前脾虛證客觀化研究取得了很大成就，也達成了一些共識。本文擬從診斷標準、動物模型建立和實驗室指標等三個方面對脾虛證客觀化研究現況作一綜述，為下一步研究提供依據。

1 脾虛證診斷標準

中醫“客觀化研究的前提是必須有科學的方法”［2］，科學合理的診斷標準是所有研究的基礎。有學者認為證候診斷標準的欠缺在很大程度上阻礙了中醫科研和臨床的發展，阻礙了中醫藥現代化的進程，因此建立統一、客觀、可行的證候診斷標準是目前中醫藥研究的關鍵之舉［3］。脾虛證客觀化研究也不例外，規范的診斷標準是研究結果可重復、可橫向比較的基礎。

1987年衛生部藥政局頒布《中藥治療脾虛證的臨床研究指導原則》［4］，該文件以氣虛癥狀、脾虛癥狀及次癥的不同組合診斷脾氣虛證，再以脾氣虛為基礎來診斷其他證候，比如脾虛中氣下陷診斷標準為脾氣虛診斷標準＋內臟下垂或久瀉不止、或滑精等一項；脾氣虛夾濕診斷標準為脾氣虛診斷標準＋大便溏瀉或舌苔白膩等；脾不統血診斷標準為脾氣虛診斷標準＋慢性出血；脾陽虛診斷標準為脾氣虛診斷標準＋陽氣虛診斷；脾陰虛診斷標準為脾氣虛診斷標準＋陰氣虛診斷。1993年中華人民共和國衛生部發布《中藥新藥臨床研究指導原則》，書中“中藥新藥治療脾虛證的臨床研究指導原則”一節基本沿襲了1987年《中藥治療脾虛證的臨床研究指導原則》中的內容，2002年國家藥品監督管理局修訂發布《中藥新藥臨床研究指導原則（試行）》，書中脾氣虛診斷標準改為主癥和次癥的形式，不再單列脾虛癥狀和氣虛癥狀，內容也進行了精簡，更便于研究操作。

除上述普適性脾虛證證候診斷標準外，還有以疾病為依托的某種疾病特異性脾虛證診斷標準。1994年國家中醫藥管理局發布《中醫病證診斷療效標準》，包括中醫內、外、婦、兒、眼、耳鼻喉、肛腸、皮膚、骨傷等9科406個痛證，均涉及到脾虛證的診斷與療效標準。《中藥新藥臨床研究指導原則（試行）》、大部分《中醫內科學》類出版物也采用以疾病為綱的模式。

此外，各級期刊中還可檢索到各研究單位、研究者個人等結合自己的研究制定了一系列診斷標準。近年來，隨著多學科知識的交融，計算機、數理統計等更多地滲入到中醫學領域中來，為中醫證候診斷標準的研究提供了新的途徑。如楊維益［5］在醫案統計的基礎上將脾氣虛證診斷標準量化。

2 脾虛證動物模型

脾虛證動物模型是脾虛證客觀化研究中重要一環。在中醫理論指導下，把人類脾虛證的某些特征在動物身上進行模擬復制，使其具有與人體脾虛證相同或相似的癥狀和病理改變。脾虛證致病因素多樣，包括苦寒傷脾、勞倦傷脾等，因此可以從不同角度建立所需的脾虛證動物模型。

2.1 脾氣虛證動物模型

根據造模的理論依據和導致脾氣虛的原因不同，該證候造模又有不同方法。造模成功的標志多采用《中藥新藥臨床研究指導原則》脾氣虛診斷標準。

2.1.1 苦寒傷脾動物模型 根據“苦寒之藥損其脾胃”的觀點，采用苦寒瀉下之藥損傷脾胃。早在1980年，北京師范大學生物系［6］就利用大黃水浸煎劑灌胃來復制脾氣虛證動物模型。

2.1.2 過酸傷脾動物模型 《素問·生氣通天論》云：“味過于酸，肝氣以津，脾氣乃絕。”據此，有人利用飲食偏嗜來復制動物模型。彭成等［7］采用給予大鼠食醋1 ml／100 g灌胃，連續10天，制備脾虛大鼠模型。之后曹小玉等［8］也成功復制該模型。彭成等［9］還發現通過偏食苦味也能造成脾虛動物模型，不論黃連苦寒法，還是杏仁苦溫法，模型小鼠都表現出脾氣虛癥狀及病理學變化。經四君子湯反證治療，以上各種病變均得以糾正。由此還提出了苦溫亦敗胃，豐富了中醫理論。

2.1.3 勞倦傷脾動物模型 依據《景岳全書》“脾胃之傷于外者，惟勞倦最能傷脾”，通過訓練大鼠游泳致力竭的方法成功建立了脾氣虛大鼠模型。該方法所致脾虛程度較輕，常作為長期脾虛造模的首選方法或作為復式造模法的一部分［10］。

2.1.4 多因素傷脾動物模型 臨床實際中，導致每種疾病證候的致病因素往往不是單一的，而是多因素綜合作用的結果，據此，陳小野［11］提出了用多因素多途徑的方法來造脾氣虛模型。曲長江等［12］比較了單用大黃瀉下、單用勞倦過度以及二者聯合應用造模，認為單獨應用均可復制脾氣虛模型，但二者聯用，復因素脾虛造模法優于單因素脾虛造模法。

2.1.5 西藥傷脾動物模型 劉士敬等［13-14］依據西藥的副作用，獨辟蹊徑，分別利用胃飼秋水仙堿和X射線照射腹部來復制脾氣虛大鼠模型。兩種方法均可以出現一系列典型的脾氣虛癥侯候群，符合脾氣虛證的一些生化、組織學指標相應變化。

臨床上脾氣虛證往往是飲食失宜、勞倦過度、久病大病等多因素所致，因此復合因素造模更接近臨床實際。如同諸多脾虛證候診斷標準是以脾氣虛為基礎，脾虛動物模型也多建立在脾氣虛動物模型基礎上。目前脾氣虛動物模型已經比較成熟。

2.2 脾不統血證動物模型

彭成等［15］依據中醫理論，結合現代科學研究方法，在偏食法塑造“脾氣虛證動物模型”的基礎上，用過酸法模擬成“脾不統血黑便證（上消化道出血）動物模型”、醇酒法模擬成“脾不統血便血證（下消化道出血）動物模型”、破血法模擬成“脾不統血肌衄證（肌膚出血）動物模型”。

鄭真等［16］在形體醫理學有關脾胰一體說指導下，利用抗血小板抗血清損傷脾臟聯合二乙基二硫代氨基甲酸納損傷胰腺外分泌功能制備脾不統血豚鼠模型，結果顯示該模型從癥狀、體征及血液檢查均符合中醫脾不統血表現，認為該模型合理、可行，更能體現脾不統血的實質。

劉宏瀟等［17］則是聯合現代醫學免疫法腹腔注射抗血小板抗血清，結合中醫苦寒瀉下法灌胃番瀉葉水浸劑，建立脾不統血證小鼠模型。并將其應用于特發性血小板減少性紫癜的實驗研究。

2.3 脾陽虛證動物模型

除李湛民等［18］采用苦寒瀉下、嚴桂珍等［19］采用苦寒瀉下加饑飽失常法建立脾陽虛動物模型外，王昕等［20］根據脾喜燥惡濕，“濕盛則內攻于脾胃”，“秋傷于濕，其即病者，濕氣通脾，故為濡瀉”的理論，使大鼠居住在陰冷潮濕環境中，外濕傷脾大鼠脾陽虛證模型存在多層次脾氣虛等指標改變。

羊燕群等［21］探索以每日游泳、隔日注射利血平、隔日灌胃番瀉葉的方法建立大鼠脾陽虛模型，有很好的穩定性和可重復性及較高動物存活率，可以將該脾陽虛大鼠模型用于脾陽虛“證”本質的研究及相應的方藥研究。

以上方法中，單純采用某種因素制備脾陽虛動物模型的方法存在著動物死亡率高、停止造模后動物恢復快等問題。聯合運用勞倦、苦寒瀉下和西藥副作用等損傷脾陽的造模方法具有成功率高、模型持續時間長的優勢。

2.4 脾陰虛證動物模型

對脾陰虛動物模型的制備，多數是在制備脾氣虛動物模型的基礎上，加用傷陰藥物。呂愛平等［22］根據飲食不節、勞倦過度導致脾氣虛證的理論，采用單日喂甘藍＋游泳至耐力極限；雙日傷陰藥（吳茱萸、肉桂）灌胃。在此基礎上，具體措施各有不同。劉景峰等［23］采用3種復合造模因素：飲食不節：單日喂甘藍，雙日胃飼豬油脂；疲勞過度：游泳至耐力極限；藥物損傷：附子、肉桂、吳茱萸溫熱傷陰。王曉明等［24］采用單日喂飼甘藍＋滾帶式跑步機快跑，雙日豬油脂＋生理鹽水灌胃，共7天。從第8天起，單日不變，雙日用豬油脂＋甲狀腺素、利血平灌胃。

3 脾虛證客觀指標研究

脾虛證客觀化指標的研究僅僅圍繞脾的生理功能展開，試圖揭示脾的生理功能失常與某種或某些客觀化指標的相關性。

3.1 脾主運化

脾主運化，將水谷精微輸散到全身各臟腑組織，脾失健運則機體的消化、吸收、運輸等功能減退，說明中醫學“脾”的主要生理功能及病理表現與現代醫學消化系統的關系密切，有研究資料表明脾虛時消化系統的功能處于紊亂狀態［25］。

劉金元等［26］和王小榮［27］在制備脾虛證動物模型時，發現造模后的小鼠身上有消化道病理形態學的改變。曲瑞瑤等［28］將脾虛大鼠模型與正常對照組相比，發現脾虛大鼠胃電慢波振幅顯著減小，快波振幅也減小，胃運動明顯減弱。

在脾虛證患者和動物身上存在著微量元素的改變，提示微量元素的含量及代謝異常和中醫脾虛證存在著一定的關系［29-30］，抑或是脾虛運化失常，導致微量元素含量異常。

3.2 脾主統血

脾主統血，是指脾氣有統攝、控制血液在脈中正常運行而不逸出脈外的功能。說明脾虛與微循環系統、血液流變學密切相關。陳達理等［31］發現脾虛患者存在著高凝狀態，馬山等［32］發現脾虛模型組小鼠TXB2明顯升高，而6-Keto-PGF1а則明顯下降，從而導致患者常有血液高凝狀態，易合并血栓形成，阻塞腸粘膜微循環，造成粘膜缺氧損傷。

3.3 脾主肌肉

脾主肌肉，脾主四肢，肌肉的壯實及其功能發揮之間有著密切的聯系［33］。80年代，劉友章教授就提出了脾主肌肉與細胞線粒體有密切的關系。楊維益等［34］發現，脾氣虛大鼠骨骼肌肌纖維明顯變細則提示脾氣虛時骨骼肌的形態方面會有變化。

3.4 “四季脾旺不受邪”

脾主運化，為“后天之本”、“氣血生化之源”。脾的功能正常，氣血充足，人體維持正常的生命活動，則體健無病；反之，則氣血生化乏源，百病由生，故云“脾之為衛”，據此認為脾與免疫系統功能有密切聯系。在脾虛動物模型上，可以觀察到免疫器官的改變［35］和細胞免疫功能的改變。在脾虛患者及動物模型的機體變化中，紅細胞免疫、體液免疫、局部免疫功能均呈低下狀態，這表明中醫學概念的脾不僅僅是現代醫學上的形態固定、單一的脾臟器官，它具有更廣泛的免疫學內涵［36］。張世平等［37］應用免疫遺傳技術研究了脾虛證與人類白細胞抗原（HLA）的相關性，發現脾虛證與HLA-B22有顯著關聯，提示脾虛的本質可能與免疫遺傳因素有一定的關系。

3.5 脾在液為涎

脾“開竅于口”、“在液為涎”。陳治水等［38］對臨床158例脾虛型結腸炎患者唾液淀粉酶進行測定，發現脾虛患者唾液淀粉酶活性明顯低于健康人組，在酸刺激后表現更為明顯，從而認為脾的運化功能強弱與唾液淀粉酶有著密切的聯系。

以上任何一項研究結果都只能表示脾虛證的一個側面，如唾液淀粉酶的活性僅能反映脾的運化功能，尚缺乏脾虛證本身特異性和敏感性強的指標。微生物、生化、免疫、遺傳等方面的檢查技術是脾虛證客觀指標研究的有力支持。隨著生物技術的進步，新的指標將會被逐步挖掘和篩選。

4 問題與展望

脾為后天之本，氣血生化之源，因此，脾在中醫學理論及臨床實踐中占有重要地位。現有研究通過觀察人體指標及動物模型對脾的實質及客觀化進行探索，取得了一定的成績，為脾虛證的研究提供了客觀工具，但仍存在著諸多問題需要進一步深入探討。

4.1 診斷標準需盡快統一

雖然政府部門和專業組織相繼出臺了一系列脾虛證診斷標準，然而，迄今為止尚沒有被臨床廣泛認可的標準。由于脾虛證診斷標準多種多樣，導致不同研究選取的研究對象存在很大異質性。顯而易見，研究結果難以被重復驗證，不同研究結果無法合并分析，造成科研人力、物力、財力的極大浪費。究其原因，對脾虛證概念的規范化和客觀化等方面的預處理并不完善，導致不同診斷標準對同一證候診斷一致性差，包括相對規范和權威的診斷標準也沒有達到真正統一，使得研究者應用時無所適從。因此，盡快建立科學、統一、便于執行的診斷標準并推廣應用是脾虛證客觀化研究的當務之急。

4.2 動物模型的合理性和準確性尚需提高

中醫學科研中采用動物實驗，可以把很多人體上非常復雜的問題簡單化，可以進行各種因素的細微探討，而這是臨床研究難于做到的［39］。現有脾虛證動物模型的制備方法都有明確的中醫理論基礎，有一定的合理性，而且涉及脾氣虛、脾陽虛、脾陰虛、脾不統血等多種證候，可以應對不同需要。由于動物實驗本身的局限性和中醫模型復制的困難，脾虛證動物模型還存在需要解決的問題。（1）中醫證候的形成往往不是單一病因造成，而一種病因也可以導致多種證候；（2）動物與人差別巨大，生冷寒涼、飲食不潔、起居無常等導致人類脾虛的因素在動物身上未必能起到類似作用；（3）造模動物所體現的究竟是機體本身的虛證，還是刺激后的應激反應，不得而知；（4）還有非常重要的一點就是動物是否具有思維尚有爭議，脾虛證動物模型制備難以體現出思志傷脾；（5）人類脾虛證的形成不是“一蹴而就”的過程，動物模型多是急性損傷。因此，雖然現有動物模型都有明確的理論基礎，但合理性和準確性仍需要仔細考量。為了取得盡可能理想的造模效果，應該探索出最佳病因組合，以中醫理論為指導，選擇符合中醫致病因素的造模方法，注重多因素慢性病程及自然發病、證病結合等多方面復制脾虛動物模型，尋找能嚴重損傷模型動物機體內在正氣的造模方法，提高動物模型的穩定性和重復性，這將是脾虛動物模型研究工作的重點［40］，而且隨著現代基因技術的發展，基因缺陷動物可能會為造模帶來便利和突破。

4.3 缺乏特異性的客觀指標

雖然現有文獻提示脾虛證存在血液、消化道、免疫等多方面異常，但多數研究結果是通過動物實驗取得的。由于動物模型本身存在上文所述的不足，導致現有研究結果可能無法真實反映脾虛證的特點。尋找有一定特異性的客觀指標，應該是以后研究的方向。而現有文獻報道的客觀化研究結果，可作為進一步篩查特異性客觀指標的基礎，探索二者是否存在著密切相關性。而新技術、新方法的不斷涌現，為發現脾虛證特異性客觀指標開拓了美好前景。

4.4 實驗研究未與臨床實踐緊密結合

臨床療效是醫學實踐的最終目的，從臨床中發現問題，通過研究工作進行探索，最終仍要服務于臨床。雖然某些基礎研究可能無法馬上應用于臨床實際，無法預測其臨床意義，但對于脾虛證研究的結果還是應在現有條件下積極進行臨床驗證，而不是單純為研究而研究。

綜上所述，脾虛證的研究有賴于科學技術的進步，有賴于研究思路的開拓，有賴于對經典文獻的挖掘。筆者相信，在不久的將來，關于中醫脾虛證客觀化將有更多的研究結果出現，進入到一個更深的層面，大家拭目以待。

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Research progress of objectification of spleen deficiency syndrome

ZHANG Ji-wei.College of Phar-macy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China

ZHANG Ji-wei，E-mail：zhangjiwei＠yeah.net

Syndrome objectification has been a hot topic and focus in the field of traditional Chinesemedicine research，moreover，objective study on the syndrome of spleen deficiency hasmade greatachievements.This paper summarizes3 aspects including diagnostic criteria，animalmodel and objective indexes.This paper points out that at present there exist several problems：diagnostic criteria are not uniform，the rationality and accuracy of animalmodel still need to be improved，the specific objective indicators are not sufficient，and experimental studies do not integratewith clinical practice.At last，it puts forward corresponding countermeasures.

Spleen deficiency syndrome； Animal experiment； Syndrome objectification

R241.6

A

10.3969／j.issn.1674-1749.2013.09.024

2013-06-05）

（本文編輯：黃凡）

250355濟南，山東中醫藥大學藥學院

張繼偉（1980－），女，2012級在讀博士研究生，講師。研究方向：治則治法理論與臨床應用研究。E-mail：zhangjiwei＠yeah.net