乙肝病毒大蛋白與乙肝病毒核酸檢測在抗病毒治療中的作用

耿坤靜 董愛英 王玉紅 武志強 盧淑蘭 劉書蘭 王麗

中國慢性乙肝患者感染者約占全世界的1/3［1］，乙型肝炎在中國感染率高，而且容易慢性化，引起肝硬化和原發性肝癌，已經成為危害人類健康的社會性問題。慢性乙肝患者主要以抗病毒治療為主，因此，本研究通過乙肝患者抗病毒治療不同階段HBV-LP、HBV-DNA、PreS1Ag和HBV-M檢測結果，探討各檢測指標間的相關性及臨床作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年3月至2010年4月在河北省保定市傳染病醫院住院和門診的符合抗病毒治療條件、并接受抗病毒治療的慢性乙型肝炎患者120例，給予核苷(酸)類似物抗病毒治療。其中男79例，女41例;年齡16～55歲，平均年齡32.5歲。均符合2005年中華醫學會肝病學會與感染病聯合制定的中國慢性乙型肝炎防治指南的診治標準。120例患者在接受治療0、3、6、9和12個月時，分別采集血樣，及時提取血清置－70℃低溫冰箱冰凍保存以備測。

1.2 試劑與儀器 試劑:乙肝病毒標志物(HBV-M)、PreS1Ag的定性、HBV-DNA定量診斷試劑盒(上海科華生物工程股份有限公司提供);HBV-LP診斷試劑盒(北京貝爾生物工程有限公司提供)。儀器:酶標儀:Labsystem Dragon公司，MUL-TISKAN MK3型;洗板機:北京普朗新技術有限公司;熒光定量PCR儀:上海宏石醫療科技有限公司。

1.3 檢測方法與結果判定 采用酶聯免疫(ELISA)法檢測HBV-LP、PreS1Ag和 HBV-M;采用實時熒光聚合酶鏈反應(PCR)檢測HBV DNA。所有試劑盒均在有效期內，嚴格按試劑說明書及臨床實驗操作規程操作。

1.4 統計學分析 應用SPSS 12.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 抗病毒治療不同階段進行 HBV-DNA、HBV-LP、preS1Ag和HBeAg陽性率比較 抗病毒治療前，HBV-DNA陽性率均顯著高于 PreS1Ag、HBeAg陽性率(P＜0.01)，而 HBV-LP和HBV-DNA陽性率差異無統計學意義(P＞0.05);在抗病毒治療后，PreS1Ag、HBeAg與HBV DNA陽性率差異有統計學意義(P＜0.01)。在不同治療階段PreS1Ag和HBeAg陽性率之間差異無統計學意義(P＞0.05)，而PreS1Ag和HBeAg陽性率的變化趨勢一致，隨著抗病毒治療時間的延長，陽性率均在降低。在抗病毒治療后，HBV-DNA的陽性率明顯低于HBV-LP的陽性率，二者陽性率差異有統計學意義(P＜0.05)。隨著抗病毒治療時間的延長HBV-DNA和HBV-LP的變化趨勢一致，而且HBV-LP消退晚于HBV-DNA、PreS1Ag和HBeAg的消減，抗病毒治療12個月時，HBV DNA陽性率從100%降到61.40%，HBV-LP陽性率從100%降到80.70%。見表1。

表1 抗病毒治療過程中患者HBV-LP、HBV、DNA、preS1Ag和HBeAg陽性率比較 %

2.2 以HBV DNA為金指標對HBV-LP的靈敏度、特異度、陰、陽性預測值比較 抗病毒治療不同階段共檢測528例次，在抗病毒治療前HBV-LP的靈敏度、陽性預測值最高(均為100%)。在抗病毒治療后，隨著抗病毒治療時間的延長，HBV-LP的靈敏度降低，特異度升高，陽性預測值降低。治療后12個月時，HBV-LP的靈敏度最低(94.28%)、特異性最高(52.94%)，均顯示HBV-LP是 HBV感染者體內病毒復制的可靠指標。見表2。

表2 以HBV DNA為金標準時HBV-LP的各指標數據 %

3 討論

目前，臨床上用于評估乙肝患者病毒復制與抗病毒療法的監測指標主要是HBV-DNA載量和HBeAg的血清轉換。雖然定量PCR方法監測HBV-DNA已成為目前判定HBV復制最直接和可靠的指標，但對于抗病毒治療患者來說，HBV-DNA陰性并不意味著病毒已經清除了。因為肝內cccDNA的降低遠遠低于血清HBV-DNA水平，血清HBV-DNA不能真實反映肝組織內HBV復制的情況。同時HBeAg也不能反映干細胞內HBV復制的情況，在HBeAg陰性的慢性乙肝患者中，由于HBV基因前C區或者CP區的變異［2］，導致HBeAg合成障礙，容易造成漏檢，患者HBeAg呈陰性而病毒仍在復制現象。

本研究中PreS1Ag陽性率低于HBV-LP陽性率可能由于HBV-LP試劑采用的是針對HBV-LP前S蛋白的構象表位制備的單克隆抗體。PreS1Ag作為大蛋白的一部分，無法模擬其復雜的拓撲結構。在制作單克隆抗體時其序列會被折疊、卷曲而失去暴露表位的機會，這樣的低級結構抗原制作出的單克隆抗體在實際應用中便可以導致漏檢［3］。提示檢測含構象前S區的HBV-LP比單獨檢測HBV PreS1Ag更能準確反映出患者體內病毒復制情況。

抗病毒治療前HBV-LP的靈敏度、陽性預測值最高(均為100.00%)，抗病毒治療后，隨著抗病毒治療時間的延長，HBVLP的靈敏度降低，特異度升高，陽性預測值降低。治療后12個月時，HBV-LP的靈敏度最低(94.28%)、特異性最高(52.94%)，均顯示HBV-LP是 HBV感染者體內病毒復制的可靠指標。

另在抗病毒治療前，HBV-LP和 HBV-DNA陽性率差異無統計學意義(P＞0.05)，而在抗病毒治療后，HBV-LP和 HBVDNA陽性率差異有統計學意義(P＜0.05)。隨著抗病毒治療時間的延長HBV-DNA和HBV-LP的變化趨勢一致，而且HBVLP消退晚于HBV-DNA消減，這與陳曉明等［4］對拉米夫定治療患者的研究結果一致。抗病毒治療12個月時，HBV-DNA陽性率從100%降到61.40%，HBV-LP陽性率從100%降到80.70%。抗病毒治療過程中HBV-LP持續陽性者，HBV-DNA出現轉陰的概率降低。慢性乙肝患者主要以抗病毒治療為主，理論上只有當血液中HBV-DNA和HBV-LP都檢測不到了才意味著病毒核酸的復制、外膜蛋白的表達已經處于終止狀態，提示抗病毒治療的終點，因此，聯合檢測HBV-LP和HBV-DNA對抗病毒治療監測愈后具有重要臨床意義。

1 賈繼東.乙型肝炎HBeAg陰性慢性乙型肝炎治療.中華肝臟病雜志，2005，13:539-126.

2 Lambert C，Mann S，Pranqe R.Assessnent of determ inants affecting the dual topology of hepadnaviral large envelope proteins.J Gen Virol，2004，85:1221-1225.

3 彭建明，李金明.病毒樣顆粒在免疫測定中的應用研究進展.中華檢驗醫學雜志，2005，28:214-216.

4 陳曉明，楊梅芳，薛寒，等.乙型肝炎病毒大蛋白和DNA在抗病毒治療過程中的變化.中華傳染病雜志，2007，25:405-407.