BP1在乳腺癌組織中的臨床表達及其與Bcl-2表達相關性

喬曉娟 李昊昌 李云霞 李筱賀

1.內蒙古醫科大學附屬醫院保健中心一病區,內蒙古呼和浩特 010050；2.內蒙古醫科大學附屬醫院超聲科，內蒙古呼和浩特 010050；3.內蒙古醫科大學基礎醫學院解剖教研室，內蒙古呼和浩特 010050

乳腺癌屬于臨床女性最普遍惡性腫瘤，目前國際上病死率僅比肺癌低，位于致死疾病第二位，且仍然處于逐年增長的趨勢。乳腺癌的致病標志物研究一直屬于臨床研究重要課題，以期能為乳腺癌的治療找到新方向。本研究主要對2012年5月～2013年5月在本院行手術治療的乳腺癌患者72例的乳腺癌組織標本中BP1蛋白的陽性表達及其與Bcl-2表達的相關性進行研究，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本資料隨機選取2012年5月～2013年5月在本院行手術治療的乳腺癌患者72例，年齡為31～76歲，平均（46.0±6.7）歲。

1.2 診斷標準

患者的臨床癥狀均與相關標準中乳腺癌的診斷標準相符合，且經過鉬鈀及彩超等相關檢查方法的確診[1]。

1.3 納入和排除標準

納入標準：患者均知情并同意相關病理檢驗；所有患者無手術和麻醉相關禁忌證。排除標準：手術前經過化療、放療者；無嚴重的心臟肝腎疾病者。

1.4 方法

將在本院進行手術治療的乳腺癌患者72例的乳腺癌組織標本作研究組，將同一乳腺癌患者的乳腺癌旁組織（距離乳腺癌的病灶邊緣大于5cm位置處正常的乳腺組織）標本72例作對照組，對兩組予以Westem blot和免疫組織的化學方法進行陽性檢測。

1.4.1 試劑和材料選擇 實驗中材料和試劑選擇，BP1蛋白由Novus Bio-logicals生產的兔抗BP1的多克隆抗體，由Santa Cruz生產的Bcl-2的鼠抗單克隆的抗體，β-actin的鼠抗單克隆的抗體等。選擇由Sigma Biotechnology生產的硝酸纖維的過濾膜；Promega生產的NBT/BCIP的顯影劑，以及北京的中杉金橋生產的免疫組化和DAB的顯示相關試劑盒等。

1.4.2 Westem blot方法 將從機體取下并做好的組織均放與-80℃的溫度下保存，從研究組和對照組兩種細胞均取下組織100mg放在EP管內，剪碎后放入勻漿液冰水中高速勻漿直到組織塊不可見，然后進行離心，提取上層清夜。依據改良后的Lowary等方法，進行蛋白測定以及兩組標本中BP1的陽性表達和其與Bcl-2表達相關性的測定。

1.4.3 免疫組化方法 選擇研究組乳腺癌的組織標本，連續切片后，進行切片的脫蠟至水，后微波修復，選擇免疫組化的試劑盒進行封閉，放置于溫度4℃下進行過夜等操作，通過DAN的顯色之后，選擇蘇木精進行復染，乙醇的脫水以及中性樹膠的封片等操作，檢測BP1的陽性表達和其與Bcl-2的表達相關性等。

1.5 觀察指標

觀察并統計分析兩組組織標本中的BP1的臨床表達，研究組乳腺癌的組織中BP1及Bcr-2的的臨床表達，以及乳腺癌的組織中BP1和臨床病理相關性情況。

1.6 療效標準

1.6.1 陽性表達相關標準 BP1陽性表達主要分布于上皮細胞胞質及部分胞核，Bcl-2陽性表達主要分布上皮細胞胞質，相應的部位呈棕黃色的顆粒表示陽性。

1.6.2 細胞計數相關標準 計數于顯微鏡下進行，統一進行（×40）放大，由三名專業操作，獨立隨機選擇等距的每張切片5個視野，分析系統5個視野陽性的細胞數量，并取平均數。

1.7 統計學分析

所有數據應用SPSS19.0軟件包完成統計分析，一般資料應用（±s）完成表示，計量資料應用t完成檢驗，計數資料應用x2完成檢驗，當P＜0.05表示比較差異具統計學意義。

2 結果

2.1 兩組的BP1的臨床表達情況

研究組組織內BP1的陽性表達，比對照組組織內BP1陽性表達高，比較差異具統計學上的意義（t=2.351，P=0.000，P＜0.05）。如表1。

2.2 研究組中BP1及Bcr-2的的臨床表達情況

研究組的乳腺癌的組織Bcl-2的蛋白陽性表達和BP1陽性表達具有正相關性（r=0.7854，P＜0.05）。如表2。

表1 兩組的BP1的臨床表達情況（±s）

表1 兩組的BP1的臨床表達情況（±s）

組別 n Westem blot（+） 免疫組化（+）研究組 72 0.95±0.58 302.80±153.76對照組 72 0.09±0.06 103.92±58.12

表2 研究組中BP1及Bcl-2的的臨床表達情況（±s）

表2 研究組中BP1及Bcl-2的的臨床表達情況（±s）

方法 n BP1表達 Bcr-2表達Westem blot（+） 72 0.95±0.58 0.62±0.39免疫組化（+） 72 302.80±153.76 212.37±127.45

2.3 研究組中BP1和臨床病理相關性情況

研究組標本中，BP1的陽性表達和乳腺癌病理因素中PR、ER和C-erb-B-2具有相關性（r=0.684，r=0.812，r=0.668，P＜0.05）。如表3。BP1的陽性表達和患者絕經、年齡、腫瘤大小、病理類型、臨床分期以及Ki-67等相關因素不相關（P＞0.05）。

3 討論

機體組織內的BP1蛋白發現于行β珠的蛋白表達相關調控時，克隆出的BP1的cDNA長度是1254bp，由240個氨基酸進行編碼，結構域呈現為螺旋狀同源異性。同時BP1蛋白同家族是DLX，BP1也可稱DLX9。

BP1蛋白是新近發現的轉錄因子與人類乳腺癌發生密切相關，有研究表明BP1的高表達與多種惡性腫瘤的發生密切相關。有研究在急性白血病中BP1的表達高于正常人，其主要機制為BP1在腫瘤的形成中發揮上游因子的作用。依據相關臨床研究實踐表明，BP1可能屬于乳腺癌的腫瘤形成重要上調因子，可能促進機體腫瘤的形成和發展，且機體乳腺癌組織內的BP1陽性表達，明顯比癌旁的正常組織內高[2]。機體PR、ER和C-erbB-2乳腺癌的內分泌相關敏感性判斷重要病理指標，BP1蛋白的表達可與其指標具有正相關性。依據相關研究表明，Bcl-2蛋白參與很多腫瘤發生和發展，Bcl-2蛋白具有細胞凋亡抑制以及細胞生存期延長作用，當乳腺癌細胞處于凋亡期期，Bcl-2蛋白具有直接影響[3-9]。依據相關研究表明，BP1蛋白的表達對于機體Bcl-2的上升表達具有促進效果[10-11]。

表3 研究組中BP1和臨床病理相關性情況（±s，n=72）

表3 研究組中BP1和臨床病理相關性情況（±s，n=72）

ER（%） PR（%） C-erb-B-2（%）0～50 51～100 0～50 51～100 0～50 51～100 Westem blot（+） 1.2±0.5 0.7±0.6 1.1±0.5 0.7±0.6 0.5±0.4 1.0±0.5免疫組化（+） 348.5±130.3 251.8±131.1 352.2±106.5 245.4±180.6 123.8±123.4 342.1±130.5方法

本研究表明，研究組組織內BP1的陽性表達，比對照組組織內BP1陽性表達高，比較差異具統計學上的意義，說明在本組研究中BP1可以作為乳腺癌診斷標志物；研究組的乳腺癌的組織Bcl-2的蛋白陽性表達和BP1陽性表達具正相關性，由此可以推斷，BP1可能通過雌二醇的調節作用而升高，發揮其誘導癌變。研究組標本中BP1的陽性表達和乳腺癌病理因素中PR、ER和C-erb-B-2具相關性；BP1的陽性表達和患者絕經、年齡、腫瘤大小、病理類型、臨床分期以及Ki-67等相關因素不相關，表明BP1不能應用到對乳腺癌治療的療效監控。研究表明乳腺癌組織內BP1的陽性表達和乳腺癌的發生以及組織內Bcl-2的蛋白陽性表達具有相關性。

綜上所述，乳腺癌患者的乳腺癌組織內BP1蛋白陽性表達，可同乳腺癌的發生、發展具有相關性，且可與Bcl-2的上升表達的促進具有相關性，從而產生乳腺癌的細胞凋亡抑制作用，具有一定臨床研究和應用價值。

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